一種氨基脲的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品污染物的檢測領(lǐng)域，是利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜快速、準(zhǔn)確地檢測 氨基脈的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氨基脈（SEM)作為有機(jī)合成原料，因其是獸藥巧喃西林的特征性代謝產(chǎn)物而被人 們熟知。隨后發(fā)現(xiàn)面粉改良劑偶氮甲醜胺（ADA)在面制品加工過程中可W轉(zhuǎn)化為SEM。另 外W聚氯己帰（PVC)為主要原料的塑料墊圈中加入發(fā)泡劑ADA,在密封玻璃瓶W及消毒處 理過程中，經(jīng)過高溫加熱條件處理后，該發(fā)泡劑熱分解生成SEM。
[0003] 國內(nèi)外已經(jīng)對SEM的毒性進(jìn)行了一系列研究，通過毒理學(xué)實驗研究表明SEM具 有致癌性與致突變性，可引起的是肺部和血管腫瘤。因此歐盟規(guī)定不允許食品中含有硝 基巧喃殘留物或它們的分解產(chǎn)物，禁止使用ADA作為罐頭墊片中的發(fā)泡劑。國家標(biāo)準(zhǔn) GB9685-2008《食品容器、包裝材料用添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》通過修訂后規(guī)定添加劑ADA在 PVC等塑料包裝產(chǎn)品中的最大使用量不得超過2. 0%，橡膠中不得超過5. 0%。目前我國尚 沒有制訂食品W及食品包裝材料中SEM的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供一種操作簡便、分析迅速的SEM的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-MS/M巧檢測方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[000引 （1)樣品預(yù)處理
[0006] 在樣品中加入0. 2mol/L的水解液、2-硝基苯甲酵衍生劑、內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行沈M的水解 和衍生化，離也，取上清液調(diào)抑至中性后過化ly-Sery HLB固相萃取小柱，棄去流出液，用 甲醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液氮吹至干，并用10%己膳溶液定容，用0. 22 y m膜過濾，從而完 成樣品的前處理。
[0007] (2) LC-MS/MS 條件
[0008] 采用 XBridge B邸 Amide 色譜柱（3. 5 y mX4. 6mmX 150mm);柱溫；35°C ;流動相： 等度洗脫，V(己膳）：V(水）=80 : 20;流速；0. 6血/min;時間；5min;
[0009] 電噴霧，正離子模式；掃描方式；多反應(yīng)監(jiān)測；離子噴霧電壓；5500V ;離子源溫度： 550°C ;霧化氣；50。
[0010] (3) SEM液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0011] 準(zhǔn)確稱取沈M標(biāo)準(zhǔn)品0. 01g(精確到0. OOOlg)置于10血蹤色容量瓶中，先用少部 分甲醇溶解，再用甲醇定容至lOmL，配制成lOOOmg/L的沈M儲備液。稱取6個陰性空白面 粉1. 〇g(精確到0. OOOlg)于50mL離也管中，分別加入沈M標(biāo)準(zhǔn)溶液，配置最終分別含有 1.0、2. 5、5.0、10.0、30.0、50.0yg/kg SEM面粉樣品。再按照方案（1)中樣品預(yù)處理后，按 方案（2)的檢測條件進(jìn)行測定，WSEM濃度為橫坐標(biāo)狂)，峰面積為縱坐標(biāo)（Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線，用于分析樣品中沈M的含量。
[001引 （4)樣品的測定
[0013] 取不同的實際樣品，根據(jù)方案（1)中樣品預(yù)處理后，按方案（2)中檢測條件進(jìn)行檢 巧1|，并利用方案（3)中得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中SEM含量。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點與有益效果是；采用本發(fā)明的LC-MS/MS法檢測食品及包裝材料中 SEM，方便快捷，靈敏度高，檢測限低，有利于SEM的快速檢測，可用于大規(guī)模樣品檢測，適于 標(biāo)準(zhǔn)化。
【附圖說明】
[00巧]圖1為沈M的標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為沈M濃度，縱坐標(biāo)為沈M色譜峰峰面積。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)洗明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實施 例。
[0017] 實施例1
[001引準(zhǔn)確稱取沈M標(biāo)準(zhǔn)品0. 01g(精確到0. OOOlg)，置于10血蹤色容量瓶中，先用少 部分甲醇溶解，再用甲醇定容至10血，配制成lOOOmg/L的沈M儲備液。稱取6個陰性空白 面粉1. Og (精確到0. OOOlg)于50mL離也管中，分別加入沈M標(biāo)準(zhǔn)溶液，使得最終濃度分別 為1.0、2.5、5.0、10.0、30.0、50.0yg/kg，按照方案（1)中樣品預(yù)處理后，按方案（2)的檢測 條件進(jìn)行測定，W峰面積（巧對濃度X(mg/L)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1)，通過不 斷降低標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，取信噪比為3時的濃度為最低檢出限。得標(biāo)準(zhǔn)曲線函數(shù)關(guān)系為；Y = 0. 5885+0. 1871X，相關(guān)系數(shù)為 R2 = 0. 9995,最低檢出限為 0. 01 y g/kg。
[001引 實施例2
[0020] 準(zhǔn)確稱取3份空白面粉1.0g(精確至0. OOOlg)作為基質(zhì)，分別加入SEM標(biāo)準(zhǔn)溶 液，使得面粉中沈M含量分別為10. 0、20. 0、40. 0 y g/kg，按照方案（1)中樣品前處理步驟 進(jìn)行處理，每個濃度水平下做3個平行試驗，按照按方案（2)檢測條件進(jìn)行檢測，測定該方 法的回收率與精密度。分析結(jié)果見表1，回收率為89. 46%?101. 20%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2. 48 %?4. 71 %，說明本研究建立的方法可靠。
[0021] 表1加標(biāo)面粉SEM回收率和精密度測定結(jié)果
[0022]
【主權(quán)項】
1. 一種氨基脲的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在于：包括如下步驟： (1) 在樣品中加入水解液、衍生劑、內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行氨基脲（SEM)的水解和衍生化，離心，取 上清液調(diào)PH至中性后過固相萃取小柱，棄去流出液，用洗脫液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液氮吹 至干，并用10 %乙腈溶液定容，用〇. 22 μ m膜過濾，從而完成樣品的前處理； (2) 用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS)測定樣品中SEM :液相色譜選用正相色譜柱，乙 腈和純水作為流動相；質(zhì)譜采用電噴霧，正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測的掃描方式； (3) 將步驟（1)所得的經(jīng)過處理的樣品按步驟（2)設(shè)定的參數(shù)進(jìn)行HPLC-MS/MS檢測。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 所用的水解液為〇. 2mol/L的鹽酸溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 所用的衍生劑為0. 02mol/L的2-硝基苯甲醛溶液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 固相萃取小柱為Poly-Sery HLB小柱。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（1)中 洗脫液為甲醇。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SEM的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（2)中 所用正相色譜柱為XBridge BEH Amide色譜柱。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SME的HPLC-MS/MS檢測方法，其特征在于：所述步驟（2)中 流動相的體積比為V (乙腈）：V (純水）=80 : 20。
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品污染物氨基脲(SEM)的檢測領(lǐng)域。包括如下步驟：樣品中加入0.2mol/L的鹽酸水解溶液、2-硝基苯甲醛衍生劑、內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行SEM的水解和衍生化，離心，取上清液調(diào)pH至中性，過Poly-Sery？HLB固相萃取小柱，用甲醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液氮吹至干，10％乙腈溶液定容，用0.22μm膜過濾，進(jìn)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測。液相色譜選用XBridge？BEH？Amide正相色譜柱，乙腈和純水(80∶20，體積比)作為流動相；質(zhì)譜采用電噴霧，正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測的掃描方式。最低檢出限為0.01μg/kg。本方法提供了一種檢測速度快，靈敏度高，檢測成本低的SEM測定方法。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104569168
【申請?zhí)枴緾N201310498822
【發(fā)明人】李培, 衛(wèi)榮, 陳英, 丁洪流, 許亮, 袁麗紅, 姚衛(wèi)蓉
【申請人】蘇州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所, 江陰市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所, 江南大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月17日