一種低密度脂蛋白膽固醇的定量測(cè)定方法、試劑及試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本申請(qǐng)涉及一種低密度脂蛋白膽固醇的定量測(cè)定方法、試劑及試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 眾多流行病學(xué)、遺傳學(xué)與臨床研究證實(shí)，血清中低密度脂蛋白膽固醇含量（LDL-C) 水平與動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病的發(fā)生率呈正相關(guān)，通常以高LDL-C作為心性猝死綜合征 (CHD)的首要致病因素。美國(guó)國(guó)家膽固醇教育計(jì)劃（NCEP)成人治療專業(yè)組規(guī)定以LDL-C水 平作為高脂血癥的分類與治療基礎(chǔ)及需要達(dá)到的治療目標(biāo)。
[0003] 目前測(cè)定血清LDL-C通常需根據(jù)各種脂蛋白密度、顆粒大小、電荷或apoB含量等， 應(yīng)用超速離心法、色譜法、電泳法、化學(xué)或免疫沉淀法將LDL與其他脂蛋白分離開(kāi)，然后測(cè) 定LDL組分中膽固醇含量。而且目前市售直接測(cè)定LDL-C含量的試劑均為進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格 偏高，抗干擾較差，不適于常規(guī)檢驗(yàn)，尤其是大規(guī)模流行病學(xué)檢查或臨床大批量標(biāo)本諸多項(xiàng) 目的同時(shí)檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本申請(qǐng)的目的是提供一種能夠應(yīng)用于大規(guī)模臨床試驗(yàn)的低密度脂蛋白膽固醇的 定量測(cè)定方法、試劑及試劑盒。
[0005] 本申請(qǐng)采用了以下技術(shù)方案：
[0006] 本申請(qǐng)的一方面公開(kāi)了一種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試 劑，該試劑由分別放置的試劑I和試劑Π組成，其中，所述試劑I含有GOOD' S緩沖液、聚 陰離子、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、4-氨基安替吡啉；所述試劑II含有GOOD' S緩沖液、 3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉、過(guò)氧化物酶、表面活性劑。
[0007] 進(jìn)一步的，所述聚陰離子為肝素。
[0008] 進(jìn)一步的，所述表面活性劑為吐溫-20。
[0009] 進(jìn)一步的，所述試劑I中GOOD' S緩沖液含量為25-80mmol/L，pH為5-8,聚陰離子 含量為10-40mmol/L，膽固醇酯酶含量為1-3KU/L，膽固醇氧化酶含量為3-6KU/L，4-氨基安 替吡啉含量為〇. 3-lmmol/L。
[0010] 優(yōu)選，所述試劑I中GOOD' S緩沖液含量為50mmol/L，聚陰離子含量為20mmol/ L，膽固醇酯酶含量為1.5KU/L，膽固醇氧化酶含量為5.0KU/L，4-氨基安替吡啉含量為 0.5mmol/L〇
[0011] 更進(jìn)一步的，所述試劑II中GOOD' S緩沖液含量為25-80mmol/L，過(guò)氧化物酶含 量為0. 5-3KU/L，3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉含量為10-30mmol/L，表面活性劑含量為 10-50mmol/L〇
[0012] 優(yōu)選，所述試劑II中GOOD' S緩沖液含量為50mmol/L，過(guò)氧化物酶含量為I. 8KU/ L，3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉含量為15mmol/L，表面活性劑含量為20mmol/L。
[0013] 本申請(qǐng)的另一面公開(kāi)了一種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試 劑盒，其中裝有上述定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試劑，該試劑由分別 放置的試劑I及試劑Π組成。
[0014] 本申請(qǐng)的另一面還公開(kāi)了一種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的 方法，該方法包括向血清樣品中加入所述試劑I，37°C孵育5分鐘，在一定的波長(zhǎng)下測(cè)定樣 品吸光度Al ;然后向樣品中加入試劑II，繼續(xù)孵育5分鐘后在上述波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A2， 由下式（1)計(jì)算Λ A樣本；用同樣的方法測(cè)定校準(zhǔn)液的吸光度值Λ A標(biāo)準(zhǔn)；再通過(guò)下式（2) 計(jì)算得到血清樣品的低密度脂蛋白膽固醇含量（LDL-C):
[0015] AA = Α2-Α1. (1)
[0016] 血清中低密度脂蛋白膽固醇含量（mmol/L) =Λ A樣本/ Λ A標(biāo)準(zhǔn)X標(biāo)準(zhǔn)液濃度 (2)
[0017] 本發(fā)明的試劑I中聚陰離子與低密度脂蛋白膽固醇形成復(fù)合物，在表面活性劑作 用下，不與膽固醇酶試劑反應(yīng)。而其它脂蛋白（CM，，VLDL-C，HDL-C)則被酶試劑水解產(chǎn)生 H 2O2，在過(guò)氧化氫酶的作用下被消耗而不顯色。試劑II中表面活性劑使低密度脂蛋白膽固 醇釋放膽固醇，在酶試劑與偶聯(lián)劑作用下生成紫色化合物。比色測(cè)定后與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比可計(jì)算 出低密度脂蛋白膽固醇的含量。
[0018] 本發(fā)明所述以酶學(xué)方法在均相體系中直接定量測(cè)定人血清樣品中低密度脂蛋白 膽固醇含量的試劑盒，是將分別放置的上述試劑I和試劑II以不同的規(guī)格裝入試劑盒包裝 中。該試劑盒具有多種不同的規(guī)格，可以分別適用于目前在臨床實(shí)驗(yàn)室普遍使用的各種國(guó) 內(nèi)外品牌的自動(dòng)生化分析儀器。
[0019] 本發(fā)明采用的試劑盒及檢測(cè)方法只需幾微升血清，無(wú)需離心或電泳等分離處理， 操作簡(jiǎn)便，可滿足全自動(dòng)化分析的要求，適用于大規(guī)模樣品的及時(shí)準(zhǔn)確檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 實(shí)施例一
[0021] 按照下述成分和比例配置下述本發(fā)明試劑I及試劑II :
[0022] 試劑 I:
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試劑，該試劑由分別放置的試 劑I和試劑II組成，其中，所述試劑I含有GOOD' S緩沖液、聚陰離子、膽固醇酯酶、膽固醇 氧化酶、4-氨基安替吡啉；所述試劑II含有GOOD' S緩沖液、3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉、 過(guò)氧化物酶、表面活性劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述聚陰離子為肝素。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述表面活性劑為吐溫-20。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑，其特征在于，所述試劑I中GOOD' S緩沖液含 量為25-80mmol/L，聚陰離子含量為10-40mmol/L，膽固醇酯酶含量為1-3KU/L，膽固醇氧化 酶含量為3-6KU/L，4-氨基安替吡啉含量為0. 3-lmmol/L。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑，其特征在于，所述試劑I中GOOD' S緩沖液含量為 50mmol/L，聚陰離子含量為20mmol/L，膽固醇酯酶含量為1.5KU/L，膽固醇氧化酶含量為 5. 0KU/L，4-氨基安替吡啉含量為0? 5mmol/L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的試劑，其特征在于，所述試劑II中GOOD' S緩沖液 含量為25-80mmol/L，過(guò)氧化物酶含量為0. 5-3KU/L，3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉含量為 10-30mmol/L，表面活性劑含量為10-50mmol/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑，其特征在于，所述試劑II中GOOD' S緩沖液含量為 50mmol/L，過(guò)氧化物酶含量為1. 8KU/L，3, 5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉含量為15mmol/L，表面 活性劑含量為20mmol/L。
8. -種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試劑盒，其特征在于，其中裝 有權(quán)利要求1至7中任一所述的定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試劑，該 試劑由分別放置的試劑I及試劑II組成。
9. 一種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的方法，該方法包括向血清樣品 中加入所述試劑I，37°C孵育5分鐘，在一定的波長(zhǎng)下測(cè)定樣品吸光度A1 ;然后向樣品中加 入試劑II，繼續(xù)孵育5分鐘后在上述波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A2,由下式（1)計(jì)算A A樣本；用同 樣的方法測(cè)定校準(zhǔn)液的吸光度值A(chǔ) A標(biāo)準(zhǔn)；再通過(guò)下式（2)計(jì)算得到血清樣品的低密度脂 蛋白膽固醇含量： A A = A2-A1 (1) 血清中低密度脂蛋白膽固醇含量（mm〇l/L) =AA樣本/ AA標(biāo)準(zhǔn)X標(biāo)準(zhǔn)液濃度 （2) 〇
【專利摘要】本申請(qǐng)涉及一種定量測(cè)定人體血清中低密度脂蛋白膽固醇含量的試劑，該試劑由分別放置的試劑I和試劑II組成，其中，所述試劑I含有GOOD'S緩沖液、聚陰離子、膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶、4-氨基安替吡啉；所述試劑II含有GOOD'S緩沖液、3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉、過(guò)氧化物酶、表面活性劑。本發(fā)明采用的試劑盒及檢測(cè)方法只需幾微升血清，無(wú)需離心或電泳等分離處理，操作簡(jiǎn)便，可滿足全自動(dòng)化分析的要求，適用于大規(guī)模樣品的及時(shí)準(zhǔn)確檢測(cè)。
【IPC分類】G01N33-92
【公開(kāi)號(hào)】CN104678111
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510070763
【發(fā)明人】梁朝陽(yáng)
【申請(qǐng)人】浙江凱成生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年6月3日
【申請(qǐng)日】2015年2月10日