一種烏雞白鳳片中有效成分的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)療領(lǐng)域，尤其是涉及中藥有效成分的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 烏雞白鳳片由烏雞、人參、白巧、丹參、當(dāng)歸等二十味中藥組成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、調(diào) 經(jīng)止帶的功效，主治氣血兩虧引起的身體瘦弱，腰酸腿軟，陰虛盜汗，經(jīng)血不調(diào)，子宮虛寒， 行經(jīng)腹痛，崩漏帶下，產(chǎn)后失血等癥。研究表明，烏雞白鳳片可降低大鼠甘油H醋及氧化低 密度脂蛋白、阻止動(dòng)脈硬化有防治骨質(zhì)酥松，保護(hù)肝臟等作用，對(duì)阿爾茨海默病具有潛在的 藥用價(jià)值。因此，烏雞白鳳片的臨床應(yīng)用越來越廣，目前國內(nèi)生產(chǎn)的廠家也越來越多。為了 控制烏雞白鳳片質(zhì)量，2005年藥典也有含量測(cè)定方法和標(biāo)準(zhǔn)，也有文獻(xiàn)報(bào)告烏雞白鳳中丹 參麗、丹參素或巧藥巧含量測(cè)定的方法。由于烏雞白鳳片是由20味藥材制備而成，有效成 分復(fù)雜多樣性，現(xiàn)有技術(shù)含量都是測(cè)定其中一種成分，至今為止，還沒有同時(shí)測(cè)定多種成分 的檢測(cè)方法出現(xiàn)，尤其是一種同時(shí)對(duì)巧藥巧和甘草巧定量定性的檢測(cè)方法。因此，為全面提 高其產(chǎn)品質(zhì)量，一種方法可W檢測(cè)多種成分并操作簡(jiǎn)單，易于產(chǎn)業(yè)化日常檢驗(yàn)的質(zhì)量測(cè)定 方法是迫在眉睫的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種烏雞白鳳片有效成分的檢測(cè)方法，該 方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)單并適應(yīng)產(chǎn)業(yè)化的日常檢驗(yàn)。
[0004] 本發(fā)明是通過W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0005] -種烏雞白鳳片有效成分檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：
[0006] (1)巧藥巧、甘草巧定量測(cè)定方法；
[0007] (2)巧藥巧、甘草巧、香附定性檢測(cè)方法：
[0008] 上述步驟（1)中所述的巧藥巧、甘草巧用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定含量，包括步 驟為；a、對(duì)照品制備；b、供試品制備；C、高效液相色譜法：
[0009] 上述步驟（2)中所述巧藥巧、甘草巧采用薄層色譜法同時(shí)檢測(cè)，香附采用薄層色 譜法單獨(dú)檢測(cè)。
[0010] 上述步驟（1)中所述的巧藥巧、甘草巧含量測(cè)定方法，包括如下步驟：
[0011] (a)對(duì)照品制備；分別取巧藥巧、甘草巧對(duì)照品用50-95%己醇或甲醇或流動(dòng)相溶 解，即得；
[0012] 化）供試品制備；取烏雞白鳳片樣品，用50-95%己醇或甲醇或流動(dòng)相提取，即得。
[0013] (C)高效液相色譜法；色譜條件如下
[0014] 色譜柱C185u250*4. 6mm、流動(dòng)相：己膳-甲醇-酸溶液、波長(zhǎng)；235皿、流速： 1. 0-1. 5ml/min。
[0015] 上述步驟a中優(yōu)選巧藥巧對(duì)照品濃度是甘草巧對(duì)照品溶度3-5倍，優(yōu)選巧藥巧對(duì) 照品濃度為19-20ug/ml，甘草巧對(duì)照品溶度為4-6ug/ml。
[0016] 上述步驟b中，優(yōu)選樣品中70%己醇超聲提取30-60min，放冷，稱重，再用70%己 醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
[0017] 上述步驟a、C所述流動(dòng)相為己膳-甲醇-酸10-15 : 3-8 : 75-87。優(yōu)選為己 膳-甲醇-酸13 : 5 : 82。所述流動(dòng)相中酸為醋酸、磯酸或甲酸，濃度為0.05-0. 12%，優(yōu) 選為醋酸，濃度為0. 1%。
[001引本發(fā)明上述步驟（2)中香附的薄層檢測(cè)方法如下，
[0019] a、供試品溶液制備；取烏雞白鳳片樣品，照揮發(fā)油測(cè)定法，在揮發(fā)油測(cè)定器中用己 酸己醋：水=1 : 150提取蒸觸2-5小時(shí)，取己酸己醋層作為供試品溶液；
[0020] b、對(duì)照品溶液的制備；取a -香附麗對(duì)照品，加己酸己醋溶解，即得對(duì)照品 [002。 溶液；
[0022] C、照薄層色譜法：取對(duì)照品和供試品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上，W甲 苯-己酸己醋=8-10 : 1-2為展開劑，展開，取出，瞭干后，置于紫外燈下檢視，后噴W二硝 基苯脫試液顯色，斑點(diǎn)澄紅色。
[0023] 上述步驟a中供試品制備：所述揮發(fā)油測(cè)定器中加入300ml水，然后再加入己酸己 醋2ml，富集揮發(fā)油，取己酸己醋層即可。
[0024] 上述步驟C中展開劑甲苯-己酸己醋9.5 : 1.5。
[00巧]本發(fā)明步驟（2)中巧藥巧和甘草巧的定性檢測(cè)方法，步驟如下
[0026] a、供試品溶液制備；取本品加甲醇提取，濾過，殘?jiān)铀芙?，正下醇萃取，取正?醇液蒸干，殘?jiān)状既芙饧吹茫?br>[0027] b、取甘草巧對(duì)照品，加甲醇溶解，作為甘草巧對(duì)照品溶液；甘草對(duì)照藥材溶液的制 備：取甘草對(duì)照藥材，按照步驟a供試品溶液制備方法制備，作為甘草對(duì)照藥材溶液；
[0028] C照薄層色譜法；吸取上述溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，氯甲焼-己 酸己醋-甲醇-水低溫W下放置的下層為展開劑，展開，取出，瞭干，噴W 10%硫酸己醇溶 液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在日光及紫外光燈（365nm)下觀察，巧藥巧顯示紫色斑點(diǎn)，紫外 光燈（365nm)下檢視，在與甘草巧和甘草對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的英光 斑點(diǎn)。
[0029] 上述步驟a中供試品制備；優(yōu)選樣品先用己離、石油離、氯仿或甲苯等除醋再甲醇 提取。最佳為取本品，研細(xì)，加己離超聲處理10-30分鐘，靜置，傾去上清液，藥渣揮干己離， 加甲醇超聲處理10-30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀芙猓诱麓颊駬u提取2-5次，每 次10-30ml，合并正了醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液?br>[0030] 上述步驟C中優(yōu)選展開劑為；氯甲焼-己酸己醋-甲醇-水 15 : 40 : 22 : lOlOCW下放置的下層。
[0031] 本發(fā)明所述的烏雞白鳳片是由下述重量份的原藥材制備得到的：
[0032] 烏雞5-15份、鹿角膠100-110份、醋整甲50-60份、鍛牡頓30-50份、桑螺峭50-60 份、人參100-110份、黃茂20-30份、當(dāng)歸120-130份、白巧100-110份、醋香附100-110份、 天冬50-60份、甘草20-30份、地黃200-220份、熟地黃200-220份、川寫50-60份、銀柴胡 20-30份、丹參100-110份、山藥100-110份、巧實(shí)炒50-60份、鹿角霜30-50份.
[0033] 本發(fā)明所述的烏雞白鳳片，優(yōu)選是由下述重量份的原藥材制備得到的：
[0034] 烏雞5-10份、鹿角膠108份、醋整甲54份、鍛牡頓40份、桑螺峭40份、人參108 份、黃茂27份、當(dāng)歸122份、白巧108份、醋香附108份、天冬54份、甘草27份、地黃215份、 熟地黃216份、川寫54份、銀柴胡22份、丹參108份、山藥108份、巧實(shí)炒54份、鹿角霜40 份。
[0035] 本發(fā)明的烏雞白鳳片按照現(xiàn)有技術(shù)制備，優(yōu)選是按照下述制備方法獲得的：
[0036] W上二十味，山藥、鹿角膠分別粉碎成細(xì)粉，香附提取揮發(fā)油，烏雞切成小塊，加水 煎煮1小時(shí)，趁熱加入適量的固體石蠟，攬拌使其融化，靜置，棄去上層蠟及油脂固體，煎液 攬拌成勻漿，加入適量的木瓜蛋白酶，攬拌，水解5小時(shí)，煮沸5分鐘，離也，取上清液，減壓 濃縮成稠膏，減壓干燥成干膏，整甲加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，濾過，合并 濾液，減壓濃縮成稠膏，再減壓干燥成干膏，人參，白巧，甘草，天冬加水煎煮二次，每次1小 時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 07 (5(TC )，通過D101大孔樹脂，用5倍量水 洗脫，棄去水液，再用90%己醇洗脫至洗脫液無皂巧反應(yīng)為止，洗脫液減壓回收己醇并濃縮 致稠膏狀，再減壓干燥成干膏。丹參、黃茂、銀柴胡、川寫、當(dāng)歸、桑螺峭用75%己醇回流提取 二次，每次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓回收己醇并濃縮，減壓干燥成干膏，其余牡頓等五 味子加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為 1. 28-1. 33 (6(TC )的清膏，加己醇至含醇量達(dá)到60%，靜置，濾過，濾液減壓回收己醇并濃 縮成稠膏，再減壓干燥成干膏，將上述干膏與山藥和鹿角膠的細(xì)粉及適量微晶纖維素混合， 粉碎成細(xì)粉，過篩，制成顆