水產(chǎn)品中43種人工合成色素的篩查方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種食品添加劑的檢測(cè)方法，尤其指一種水產(chǎn)品中43種人工合成色 素的篩查方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，色素在水產(chǎn)品中非法添加和濫用現(xiàn)象層出不窮。因此相關(guān)的檢測(cè)方法也 隨之被關(guān)注和研究。人工合成色素由于色澤鮮艷、容易上色，主要應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中如將羊 毛、皮革、蠶絲等方面的染色等，都是具有一定毒性的化學(xué)品。然而，有些不法分子為節(jié)省成 本，在水產(chǎn)品中非法添加人工合成色素，如偶氮玉紅、酸性紅、蘇丹紅等，對(duì)人民健康和社會(huì) 穩(wěn)定產(chǎn)生了極大的危害。因此很有必要建立水產(chǎn)品中人工合成色素的篩查方法，為有效遏 制水產(chǎn)品非法添加行為和食品安全風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警提供技術(shù)手段。
[0003] 現(xiàn)有一種申請(qǐng)?zhí)枮镃N201110384147. 1名稱為《食品中36種人工合成色素高通量 快速篩查方法》公開了一種36種人工合成色素高通量快速篩查方法，其方法為；食品中36 種人工合成色素高通量快速篩查方法，其特征在于：采用基于液相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜建 立的食品中亮黑、巧樣黃、嗟咐黃、姻脂紅、酸性紫7、覽菜紅、酸性紅2G、酸性黃17、日落黃、 誘惑紅、堅(jiān)牢黃、結(jié)晶麗春紅6R、偶氮玉紅、麗春紅SX、蒙酪藍(lán)黑、間苯二酪黃、說藍(lán)、酸性紅 26、酸性紅4、麗春紅3R、酸性紅52、蒙酪黃色-S、巧光素鋼、毛料綠色S、專利藍(lán)五、堅(jiān)牢綠 FCF、亮藍(lán)FCF、亮綠SF、酸性綠3、赤薛紅、巧光桃紅、孟加拉玫瑰紅、新紅、曙紅Y、澄色I(xiàn)和 澄色I(xiàn)I的食品中人工合成色素高通量快速篩查方法，并對(duì)可疑樣品進(jìn)行確證和定量。但其 缺點(diǎn)是樣品前處理復(fù)雜，只能通過一級(jí)信息來測(cè)定和確正，僅采用液相色譜/飛行時(shí)間，所 W檢測(cè)效率不高，速度不快，準(zhǔn)確度也不高，并且，上述方法，只能適用于酸色素的篩查，而 不能用于堿性色素的篩查，所W該檢測(cè)方法還有待于進(jìn)一步改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)狀而提供一種操作簡便快速、 能有效地減少了基體成分的干擾、高靈敏度、高分辨率，利用四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜定性 的功能，對(duì)已知和未知的酸性或堿性的可疑化合物進(jìn)行檢測(cè)，大大地減少了假陽性等誤判 事件的水產(chǎn)品中43種人工合成色素的篩查方法。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為；水產(chǎn)品中43種人工合成色素的 篩查方法，包括W下步驟，采用液相色譜的四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜篩查，調(diào)用已建立的質(zhì) 譜篩查數(shù)據(jù)庫W分子式匹配模式自動(dòng)掃描檢索，質(zhì)量允許誤差控制在5ppm;其特征在于： 使用 3. 0X 100mm，1. 8 y m 的 Agilent Eclipse Plus-C18 作為分析柱，W 5 毫 mol/L 己酸錠 水溶液含0. 1 %甲酸的己膳溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0. 3ml/min ;采用電噴霧離子 源在負(fù)離子模式下進(jìn)行檢測(cè)，提取可疑樣品，用基質(zhì)分散法凈化，液相色譜分離，外標(biāo)法定 量測(cè)定，確證，上述為體積百分比；所述43種人工合成色素為28種為酸性色素和15種堿性 色素，所述28種人工合成的酸性色素染料為；覽菜紅，日落黃，頗藍(lán)，誘惑紅，亮黑PN，蒙酪 黃S，酸性紅18,酸性黃17,嗟林黃、酸性紅2G，亮綠SF、偶氮玉紅，酸性紅26,羊毛綠，澄色 I，澄色I(xiàn)I，監(jiān)牢綠FCF、蒙酪藍(lán)黑，酸性藍(lán)，酸性紅52,赤薛紅，巧光桃紅，酸性黃36,酸性綠 3,巧光素鋼、孟加拉玫瑰紅，酸性紅87,麗春紅SX;所述15種人工合成的堿性色素染料為： 金胺、隱性孔雀石綠、孔雀石綠、蘇丹紅III、蘇丹紅IV、蘇丹黃、蘇丹黑B、堿性澄II、羅丹明 B、蘇丹澄、蘇丹紅7B、蘇丹紅G、蘇丹紅I、蘇丹紅II、橘紅2號(hào)。
[0006] 上述數(shù)據(jù)庫的建立步驟選擇為：
[0007] -、將化合物的名稱、分子式、保留時(shí)間、母離子質(zhì)荷比信息加入到化合物數(shù)據(jù)庫 MassHunter 軟件中；
[000引二、進(jìn)行化合物標(biāo)樣配置，準(zhǔn)確稱量標(biāo)準(zhǔn)品于100ml容量瓶中，用甲醇定容，配置 成濃度lOug/ml ;
[0009]=、標(biāo)樣直接質(zhì)譜進(jìn)樣，進(jìn)行一級(jí)準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)的采集，優(yōu)化離子源參數(shù)和質(zhì)譜電 壓，掃描采集參數(shù)；
[0010] 四、對(duì)于已采集并確認(rèn)的化合物一級(jí)準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)，進(jìn)行針對(duì)性的二級(jí)質(zhì)譜掃描采 集，并進(jìn)行不同碰撞能量下的測(cè)試，最終將二級(jí)全質(zhì)量碎片信息加入到化合物數(shù)據(jù)庫軟件 中，為樣品進(jìn)行二級(jí)精確匹配。
[0011] 上述色譜條件選擇為；采用AgilentEclipsePlus-ClS分離，AgilentEclipse Plus-C18的規(guī)格為；3.0X100mm，1.8ym，流動(dòng)相；A相為5毫mol/L己酸錠，體積百分比 0. 1 %的甲酸水溶液；B相為己膳，分析柱溫度控制為30°C，樣品溫度為25°C，進(jìn)樣體積為 3yL，流速為0. 2ml/min，梯度洗脫程序?yàn)椋?~1分鐘，5 %~20 %B相；1~10分鐘，20 %~ 100%B相；10~15分鐘，100%B相，上述為體積百分比。
[0012]上述流動(dòng)相的選擇為：甲醇0. 1 %，甲酸水溶液，己膳0. 1 %甲酸水溶液，含0. 1 % 甲醇的甲酸5毫mol/L己酸錠溶液和己膳，含0. 1%甲酸的5毫mol/L己酸錠溶液作為流動(dòng) 相分析比較色素分離結(jié)果。
[0013] 上述優(yōu)化離子源參數(shù)和質(zhì)譜電壓選擇為；選取負(fù)離子模式，在全掃描方式下優(yōu)化 離子化電壓、毛細(xì)管電壓、母離子質(zhì)荷比范圍、離子源溫度、裂解溫度、脫溶劑氣流速參數(shù)， 所述采集數(shù)據(jù)為；優(yōu)化碰撞電壓，通過不同的碰撞電壓進(jìn)行碎裂，把全息二級(jí)圖譜進(jìn)行數(shù)據(jù) 庫建立，最終確定質(zhì)譜條件，同時(shí)將一級(jí)質(zhì)量數(shù)，同位素豐度和二級(jí)碎片信息建立成一個(gè)完 成的數(shù)據(jù)庫。
[0014] 可疑樣品的提取方法為：酸性色素的可疑樣品用氨化己醇提取，而對(duì)堿性可疑樣 品用含有1%己酸的己膳提取，所述百分比為體積百分比。
[0015] 上述確證方法為；分子特征提取：對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理并結(jié)合數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配， 采用四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行分析，然后自動(dòng)生成確證結(jié)果，對(duì)陽性制備樣品保留時(shí) 間結(jié)合離子源進(jìn)一步確證。
[0016] 上述進(jìn)一步確證的步驟選擇為；采用MSC結(jié)構(gòu)的解析軟件對(duì)可疑化合物進(jìn)行進(jìn)一 步結(jié)構(gòu)確證，然后自動(dòng)生成進(jìn)一步確證結(jié)果。
[0017] 上述四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜采用一級(jí)信息匹配和二級(jí)信息的匹配，通過一級(jí)信 息匹配與二級(jí)信息的匹配相結(jié)合獲得化合物篩查的準(zhǔn)確度。
[0018] 上述的基質(zhì)分散法W及梯度洗脫法均為本技術(shù)領(lǐng)域的公知技術(shù)，還有，所述軟件 如Mass化nter軟件W及MSC結(jié)構(gòu)的解析軟件均不公知技術(shù)，在此不再細(xì)述。
[0019]現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明的檢測(cè)方法操作簡便快速，靈敏度高， 其回收率及重復(fù)性能滿足日常檢測(cè)的要求，采用基質(zhì)分散法凈化樣品，有效地減少了基體 成分的干擾，而且，本方法具有高通量、高靈敏度、高分辨率，高質(zhì)量精確度及可行的線性范 圍，利用四極桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜定性的功能，對(duì)已知和未知化合物進(jìn)行檢測(cè)，大大地減少 了假陽性等誤判事件，極大地提高了檢測(cè)機(jī)構(gòu)對(duì)水產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)的監(jiān)測(cè)能力，經(jīng)檢測(cè)后的水產(chǎn) 品更為衛(wèi)生安全；特別是發(fā)明的檢測(cè)方法對(duì)現(xiàn)有的"食品中36種人工合成色素高通量快速 篩查方法"相比，具有=大優(yōu)點(diǎn)：一、本發(fā)明能夠二級(jí)精確匹配，二、不僅能夠?qū)λ嵝陨剡M(jìn) 行檢測(cè)，而且還能用于堿性色素檢測(cè)，從而使檢測(cè)更方便、應(yīng)用范圍也更廣，=、樣品前處理 方法簡便快捷，所使用的基質(zhì)分散管均自制，既可W降低購買成本，而自制的基質(zhì)分散管質(zhì) 量保證，使使用效果更好。
【附圖說明】
[0020] 圖1是本發(fā)明28種酸性色素標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積小于流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積 圖；
[0021] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例中28種酸性色素的陽性樣品的提取離子流圖；
[0022] 圖3是本發(fā)明實(shí)施例中28種酸性色素另一陽性樣品的提取離子流圖；
[0023] 圖4是本發(fā)明實(shí)施例28種酸性色素標(biāo)準(zhǔn)品的提取離子流圖；
[0024] 圖5是本發(fā)明實(shí)施例中28種酸性色素中的酸性紅18二級(jí)碎片圖譜；
[0025] 圖6是本發(fā)明實(shí)施例中種酸性色素中的偶氮玉紅二級(jí)碎片圖譜；
[0026] 圖7是本發(fā)明實(shí)施例15種堿性合成色素混合標(biāo)準(zhǔn)液的總離子流色譜圖；
[0027] 圖8是本發(fā)明堿性色素中基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積小于流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積 圖；
[0028] 圖9本發(fā)明15種堿性合成色素中是陽性樣品的總離子流圖。
[0029] 圖10是本發(fā)明實(shí)施例中28種酸性色素中麗春紅SX同分異構(gòu)體質(zhì)譜圖；
[0030] 圖11是本發(fā)明實(shí)施例中28種酸性色素中酸性紅同分異構(gòu)體質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031] W下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0032] -、對(duì)人工合成28種酸性色素的檢測(cè)方法作具體說明，
[0033] 如圖1至圖6所示；
[0034]1試劑
[00巧]1. 1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；