一種陰道炎多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種陰道炎七項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測試劑盒，用于輔助診斷陰道炎。
【背景技術(shù)】
[0002]陰道炎是陰道黏膜及黏膜下結(jié)締組織的炎癥，是婦科門診常見的疾病。健康婦女陰道由于解剖組織的特點(diǎn)對病原體的侵入有自然防御功能。當(dāng)陰道的自然防御功能受到破壞時(shí)，病原體易于侵入，導(dǎo)致陰道炎癥。常見的陰道炎有細(xì)菌性陰道病(BV)、霉菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、淋菌性陰道炎及其他陰道炎等。
[0003]細(xì)菌性陰道病(BV)又稱特異性陰道病、加德納菌性陰道病、陰道嗜血桿菌性陰道病，在細(xì)菌學(xué)上表現(xiàn)為陰道正常菌群數(shù)量明顯減少，厭氧菌群數(shù)量明顯增加，陰道分泌物中的乳酸減少，H2O2減少，pH增高使陰道微生態(tài)發(fā)生明顯變化而導(dǎo)致臨床癥候群。霉菌性陰道炎又稱念珠菌性陰道炎，是以念珠菌特別是白色念珠菌為主要病原體引起的一種常見多發(fā)的外陰陰道疾病。滴蟲性陰道炎是由陰道毛滴蟲為病原體引起的一種常見的陰道炎癥。淋菌性陰道炎是指由淋病奈瑟氏菌所引起的陰道炎。
[0004]細(xì)菌性陰道病臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是Amsel法，該法以四項(xiàng)綜合臨床指標(biāo)作為診斷BV的依據(jù)，即①用精密試紙測定陰道pH值，陰道分泌物？!1值> 4.5 ;②胺試驗(yàn)陽性，用棉拭子取陰道分泌物，加一滴1% KOH聞?dòng)袩o魚腥氣味，若有為陽性檢查線索細(xì)胞，線索細(xì)胞為陰道脫落上皮細(xì)胞表面黏附許多小桿菌，邊緣不清；④革蘭氏染色鏡檢找到大量陰道加德納菌，而乳酸桿菌少(1-5個(gè)/HP)，甚至缺乏。具備以上四項(xiàng)指標(biāo)中至少三項(xiàng)，其中線索細(xì)胞陽性為必備條件，即可確診為BV。但該法不易掌握，影響因素較多，鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)繁瑣費(fèi)時(shí)，不便于臨床常規(guī)，特別是醫(yī)院門診等的使用。
[0005]近年來研宄表明，BV不僅是陰道環(huán)境中產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌收到抑制，陰道分泌物中唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶活性也明顯偏高，因此可以通過檢測H2O2的產(chǎn)量、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶和脯氨酸氨基肽酶的活性來判斷細(xì)菌性陰道病。而在實(shí)際應(yīng)用中，采用脯氨酸氨基肽酶法來判斷BV時(shí)，經(jīng)常會(huì)因滴蟲的大量繁殖而呈假陽性，因此需要同時(shí)檢測滴蟲。滴蟲性陰道炎目前主要的診斷方法有滴蟲病懸滴法、滴蟲病涂色染色法、滴蟲病培養(yǎng)法、免疫學(xué)法(如熒光抗體檢查法、ELISA法、膠乳凝集法)等，這些方法中懸滴法是檢查陰道毛滴蟲最簡單的方法，但要制作涂片，比較繁瑣。對于霉菌性陰道炎，實(shí)驗(yàn)室的診斷基本上還是靠鏡檢或念珠菌培養(yǎng)鑒別。淋菌性陰道炎通常是通過鏡檢革蘭陰性雙球菌，陰道分泌物淋球菌培養(yǎng)，菌落形態(tài)典型，氧化酶試驗(yàn)陽性等進(jìn)行診斷。
[0006]目前市場上陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒只有四項(xiàng)指標(biāo)檢測(pH、過氧化氫濃度、白細(xì)胞酯酶和唾液酸酶)，能夠檢測陰道炎和細(xì)菌性陰道??；五項(xiàng)指標(biāo)檢測(過氧化氫、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、脯氨酸氨基肽酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶)和六項(xiàng)指標(biāo)檢測(過氧化氫、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、β -葡萄糖醛酸酶、乙酰氨基葡萄糖苷酶及pH值)檢測，均能夠檢測陰道炎、細(xì)菌性陰道病、滴蟲陰道病和念珠菌陰道病。由于各項(xiàng)指標(biāo)所包含的底物以及聯(lián)檢顯色劑的熱不穩(wěn)定性，必須低溫保存，使用低溫保存工具，因此存在使用局限性的缺陷；同時(shí)由于市場上陰道炎聯(lián)合檢測試劑盒均需要聯(lián)檢顯色液，部分還需要聯(lián)檢終止液，因此存在操作繁瑣的局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種陰道炎多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測試劑盒，包括針對陰道微生態(tài)環(huán)境、陰道炎、細(xì)菌性陰道病、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、淋病中的一種或幾種檢測的試劑塊。該試劑盒能夠在常溫下保存，無單獨(dú)包裝的聯(lián)檢顯色液，操作簡單。
[0008]本發(fā)明提供一種過氧化氫檢測試劑塊，所述試劑塊是將空白濾紙?jiān)诮菀褐薪莺蟾稍?，再將干燥后的試劑塊放入穩(wěn)定劑保護(hù)液中浸泡后干燥制備得到的；所述浸泡液的配方為:辣根過氧化物酶50-400KU/L，TMB 0.05_3g/LTMB，溶劑為水；所述穩(wěn)定劑保護(hù)液的配方為:酪蛋白 0.1-2.0g/L、蔗糖 1.0-10.0g/L、丙酮 1.0-3.0ml/L 硫酸銨 0.5-2.0g/L、BSA
0.4-4g/L、Proclin-300 1.0-5.0ml/L、檸檬酸 2.0-6.0g/L、尿素 1.0-4.0g/L 和 pH 7.4 的
0.02M PB緩沖液，溶劑為水。
[0009]本發(fā)明提供一種白細(xì)胞酯酶檢測試劑塊，所述試劑塊是將空白濾紙?jiān)诮菀褐薪莺蟾稍?，再將干燥后的試劑塊放入穩(wěn)定劑保護(hù)液中浸泡后干燥制備得到的；所述浸泡液的配方為:0.05-2g/L吡咯酯和0.01-2g/Ll-重氮基_2_萘酚-4-磺酸，溶劑為水；所述穩(wěn)定劑保護(hù)液的配方為:酪蛋白0.1-2.0g/L、蔗糖1.0-10.0g/L、丙酮1.0-3.0ml/L硫酸銨 0.5-2.0g/L, BSA 0.4_4g/L、Proclin-300 1.0-5.0ml/L、檸檬酸 2.0-6.0g/L、尿素
1.0-4.0g/L和pH 7.4的0.02M PB緩沖液，溶劑為水。
[0010]本發(fā)明提供一種唾液酸苷酶檢測試劑塊，所述試劑塊是將空白濾紙?jiān)诮菀褐薪莺蟾稍?，再將干燥后的試劑塊放入穩(wěn)定劑保護(hù)液中浸泡后干燥制備得到的；所述浸泡液的配方為:0.02-2g/L 5-溴-4-氯-3-吲哚-a -D-N-乙酰神經(jīng)氨酸鹽、0.05_5g/L氯化硝基四氮唑藍(lán)和0.05-5g/L T00S，溶劑為水；所述穩(wěn)定劑保護(hù)液的配方為:酪蛋白0.1-2.0g/L、蔗糖 1.0-10.0g/L、丙酮 1.0-3.0ml/L 硫酸銨 0.5-2.0g/L, BSA 0.4_4g/L、Proclin-3001.0-5.0ml/L、檸檬酸 2.0-6.0g/L、尿素 1.0-4.0g/L 和 pH 7.4 的 0.02M PB 緩沖液，溶劑為水。
[0011]本發(fā)明提供一種脯氨酸氨基肽酶檢測試劑塊，所述試劑塊是將空白濾紙?jiān)诮菀褐薪莺蟾稍?，再將干燥后的試劑塊放入穩(wěn)定劑保護(hù)液中浸泡后干燥制備得到的；所述浸泡液的配方為:0.001-0.5g/L脯氨酸氨基肽酶三氟鹽酸鹽和0.01-lmol/L Tris-HCl,溶劑為水；所述穩(wěn)定劑保護(hù)液的配方為:酪蛋白0.1-2.0g/L、蔗糖1.0-10.0g/L、丙酮
1.0-3.0ml/L 硫酸銨 0.5-2.0g/L, BSA 0.4_4g/L、Proclin-300 1.0-5.0ml/L、檸檬酸
2.0-6.0g/L、尿素 1.0-4.0g/L 和 pH 7.4 的 0.02M PB 緩沖液，溶劑為水.本發(fā)明提供一種N-乙酰氨基葡萄糖苷酶檢測試劑塊，所述試劑塊是將空白濾紙?jiān)诮菀褐薪莺蟾稍?，再將干燥后的試劑塊放入穩(wěn)定劑保護(hù)液中浸泡后干燥制備得到的；所述浸泡液的配方為:0.l~20g/L 5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰-beta_D-氨基葡萄糖苷、0.01-lg/L固紫B鹽和20~200g/L蔗糖，溶劑為水；所述穩(wěn)定劑保護(hù)液的配方為:酪蛋白 0.1-2.0g/L、蔗糖 1.0-10.0g/L、丙酮 1.0-3.0ml/L 硫酸銨 0.5-2.0g/L, BSA 0.4_4g/L、Proclin-300 1.0-5.0ml/L、檸檬酸 2.0-6.0g/L、尿素 1.0-4.0g/L 和 pH 7.4 的 0.02Μ PB 緩沖液，溶劑為水。
[0012]本發(fā)明提供一種氧化酶檢測試劑塊，所述試劑塊是將空白濾紙?jiān)诮菀褐薪莺蟾稍铮賹⒏稍锖蟮脑噭K放入穩(wěn)定劑保護(hù)液中浸泡后干燥制備得到的；所述浸泡液的配方為:0.l-10g/L四甲基對苯二胺鹽酸鹽，溶劑為水；所述穩(wěn)定劑保護(hù)液的配方為:酪蛋白 0.1-2.0g/L、蔗糖 1.0-10.0g/L、丙酮 1.0-3.0ml/L 硫酸銨 0.5-2.0g/L, BSA 0.4_4g/L、Proclin-300 1.0-5.0ml/L、檸檬酸 2.0-6.0g/L、尿素 1.0-4.0g/L 和 pH 7.4 的 0.02Μ PB 緩沖液，溶劑為水.本發(fā)明提供一種陰道炎多項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測試劑盒，所述試劑盒包括針對陰道微生態(tài)環(huán)境、陰道炎、細(xì)菌性陰道病、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、淋病中的一種或幾種檢測的試劑塊。
[0013]優(yōu)選地，所述陰道微生態(tài)環(huán)境檢測試劑塊為權(quán)利要求1所述的過氧化氫檢測試劑塊；
所述陰道炎檢測試劑塊為權(quán)利要求2所述的白細(xì)胞酯酶檢測試劑塊；
所述細(xì)菌性陰道病檢測試劑塊為:權(quán)利要求3所述的唾液酸苷酶常溫檢測試劑塊或聯(lián)合權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊；
所述念珠菌性陰道炎檢測試劑塊為:ρΗ試劑塊、權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊和權(quán)利要求5所述的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶常溫檢測試劑塊；
所述滴蟲性陰道炎檢測試劑塊為:ΡΗ試劑塊、權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊和權(quán)利要求5所述的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶常溫檢測試劑塊；
所述淋病檢測試劑塊為:權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊和權(quán)利要求6所述的氧化酶常溫檢測試劑塊。
[0014]白細(xì)胞酯酶試劑塊為陽性能夠初步斷定為陰道炎，具體為哪種陰道炎需要進(jìn)一步用其他試劑塊進(jìn)行檢測判斷。
[0015]本發(fā)明提供一種陰道炎七項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測試劑盒，所述試劑盒包括針對陰道微生態(tài)環(huán)境、陰道炎、細(xì)菌性陰道病、念珠菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、淋病檢測的試劑塊。
[0016]優(yōu)選地，所述陰道微生態(tài)環(huán)境檢測試劑塊為權(quán)利要求1所述的過氧化氫檢測試劑塊；
所述陰道炎檢測試劑塊為權(quán)利要求2所述的白細(xì)胞酯酶檢測試劑塊；
所述七項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合常溫檢測試劑盒由過氧化氫試劑塊、白細(xì)胞酯酶試劑塊、唾液酸苷酶試劑塊、脯氨酸氨基肽酶試劑塊、N-乙酰氨葡萄糖苷酶試劑塊、氧化酶試劑塊、pH試劑塊組合而成；
所述細(xì)菌性陰道病檢測試劑塊為:權(quán)利要求3所述的唾液酸苷酶常溫檢測試劑塊或聯(lián)合權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊；
所述念珠菌性陰道炎檢測試劑塊為:pH試劑塊、權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊和權(quán)利要求5所述的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶常溫檢測試劑塊；
所述滴蟲性陰道炎檢測試劑塊為:PH試劑塊、權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊和權(quán)利要求5所述的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶常溫檢測試劑塊；
所述淋病檢測試劑塊為:權(quán)利要求4所述的脯氨酸氨基肽酶常溫檢測試劑塊和權(quán)利要求6所述的氧化酶常溫檢測試劑塊。