用于測量非稀釋類型免疫層析法試劑中的樣品的添加劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫層析法（免疫色譜法，immunochromatographicmethod)。
【背景技術(shù)】
[0002] 在臨床檢查領(lǐng)域，使用需要簡單操作和短的測量時間并且即使在定量的情況下能 夠?qū)崿F(xiàn)以小的廉價裝置測量的免疫層析法的測量試劑極為普遍。為了進(jìn)一步改善簡單性和 快捷性，對于開發(fā)允許直接使用血液樣本（全血、血清或血漿）作為樣品同時沒有預(yù)處理如 稀釋的免疫層析法的需求日益增加。
[0003] 然而，即使在利用以血液樣本可以直接用作樣品的方式設(shè)計的測量系統(tǒng)的免疫層 析法的情況下，如果血液樣本中的被分析物的濃度足夠高而超過測量系統(tǒng)定量的上限，則 必須使用血液樣本的稀釋樣品。然而，就直接使用血液樣本作為樣品的情況和使用稀釋的 血液樣本作為樣品的情況而言，測量系統(tǒng)中這兩種樣品的行為從未被充分研宄過。
[0004] 專利文獻(xiàn)1公開了重均分子量為2000至9000的非離子型水溶性聚合物用作反應(yīng) 加速劑，其充當(dāng)免疫層析法中的樣本稀釋液的添加劑。在該文獻(xiàn)中描述了，如果重均分子 量大于9000并且測試樣本中非離子型水溶性聚合物的濃度增加以獲得足夠的反應(yīng)加速效 果，則測試溶液鋪展性的劣化會延長在檢測位點獲得恒定顯色所需的時間或者在測試條之 間標(biāo)記體的檢測強(qiáng)度方面會發(fā)生變化。
[0005] 引用列表
[0006] 專利文獻(xiàn)
[0007] 專利文獻(xiàn)1:日本臨時公開專利公開號2004-233127

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 技術(shù)問題
[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種免疫測定方法，所述方法降低當(dāng)血液樣本（全血、血清 或血漿）被稀釋并在設(shè)計為使用血液樣本直接作為樣品而無預(yù)處理如稀釋的免疫層析法 中用作樣品時引起的與理論值（下文也稱為參照值或基準(zhǔn)值）的偏差，并且本發(fā)明的目的 還在于提供用于該方法的試劑。
[0010] 問題的解決方案
[0011] 本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在設(shè)計為使用血液樣本（全血、血清或血漿）直接作為樣品 的免疫層析法（下文也稱為非稀釋方法）中，當(dāng)被分析物處于超過測量系統(tǒng)的定量的上限 的高濃度時并且將血液樣本稀釋并用作樣品，樣品中被分析物的測量值可能偏離理論值。 作為對于減少這種偏差的方法的深入研宄的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在非稀釋方法中 在測量稀釋的血液樣本時，當(dāng)在羥乙基淀粉存在下進(jìn)行測量時，即使將稀釋的血液樣本用 作用于測量的樣品，也可以減少與理論值的偏差，由此完成了本發(fā)明。
[0012] 本發(fā)明具有以下構(gòu)成。
[0013] [1]一種進(jìn)行血液樣本的免疫層析的方法，所述方法使用免疫層析裝置，所述免疫 層析裝置裝配有（1)樣品墊和（2)具有被固定的能夠特異結(jié)合至被分析物的組分的膜，所 述樣品墊和膜以自上游的（1)和（2)的順序布置（配置或排列，arrange)，其中羥乙基淀粉 存在于測量系統(tǒng)中。
[0014] [2] [1]所述的進(jìn)行免疫層析的方法，其中血液樣本是全血、血清或血漿。
[0015] [3] [1]或[2]所述的方法，其中所述免疫層析裝置還包括（3)綴合物墊 (conjugatepad)，所述綴合物墊以自上游的（1)、（3)和（2)的順序布置。
[0016] [4] [1]至[3]所述的進(jìn)行免疫層析的方法，其中導(dǎo)致羥乙基淀粉存在于測量系統(tǒng) 中的方式（手段或方法，means)是在（1)樣品墊、（2)具有被固定的能夠特異結(jié)合至被分析 物的組分的膜、和（3)綴合物墊、以及（5)血液樣本稀釋液中的任意一個或多個中包含羥乙 基淀粉。
[0017] [5] -種用于免疫層析的試劑，其中免疫層析裝置包括（1)樣品墊和（2)其上固 定有能夠特異結(jié)合至被分析物的組分的膜，所述樣品墊和所述其上固定有能夠特異結(jié)合至 被分析物的組分的膜以自上游的（1)和（2)的順序布置，并且羥乙基淀粉被包含在（1)和 (2)中的一個或多個中。
[0018] [6]用于免疫層析的試劑，其中所述免疫層析裝置還包括（3)綴合物墊，所述綴合 物墊以自上游的（1)、（3)和（2)的順序布置，并且其中羥乙基淀粉被包含在（1)至（3)中 的一個或多個中。
[0019] [7] -種用于免疫層析的血液樣本稀釋液，所述血液樣本稀釋液包含羥乙基淀粉。
[0020] 發(fā)明的有益效果
[0021] 本發(fā)明提供的免疫層析法，即使稀釋的血液樣本在非稀釋方法中用作用于測量的 樣品，也可以抑制測量值與理論值的偏差并且防止準(zhǔn)確性的降低。
[0022] 因此，即使樣品中的被分析物處于超過測量系統(tǒng)定量的上限的高濃度并且稀釋的 血液樣本用作樣品，也可以通過使用本發(fā)明的免疫層析法進(jìn)行準(zhǔn)確測量。
[0023] 附圖簡述
[0024] [圖1]圖1是本發(fā)明免疫層析裝置的一種形式的示意圖。
[0025] [圖2]圖2是顯示參考方法的測量結(jié)果與實施例3的測量結(jié)果或比較例2的測量 結(jié)果之間的相關(guān)性的示意圖。
【具體實施方式】
[0026] 在本發(fā)明中使用的羥乙基淀粉（化學(xué)名稱：淀粉，2-羥乙基醚，下文也稱為HES) 是可以通過水解支鏈淀粉（其是高度支化的玉米淀粉組分），接著進(jìn)行羥乙基化獲得的高 聚合物的糖化合物。該糖化合物在葡萄糖分子C4和C1之間具有糖苷鍵（a-1，4-糖苷鍵） 以形成主鏈，并且還在C6和C1之間具有糖苷鍵（a-1，6-糖苷鍵）以形成支鏈。葡萄糖分 子的C2或C6的羥基基團(tuán)被羥乙基基團(tuán)取代。
[0027] HES的性質(zhì)由分子量、輕乙基基團(tuán)的取代度、分散度（分子量分布的程度）、C2/C6 比（被羥乙基基團(tuán)取代的C2和C6之間的比例）等單獨(dú)或彼此組合地表示。例如，當(dāng)分子量 為70, 000且羥乙基基團(tuán)的取代度是0. 5時，所述性質(zhì)可以由"HES70000/0. 5"表示，等等。
[0028] 盡管HES可以以常規(guī)方式從玉米淀粉制備，但是含HES的灌輸溶液（輸液， transfusionsolution)也是可用的，其在臨床上用作血衆(zhòng)替代物/體外循環(huán)稀釋液?？?商購的含ffiS的灌輸溶液包括HESPANDER(注冊商標(biāo)）流體溶液和SALINHES(注冊商標(biāo)） 流體溶液6%(二者均由？代861111^1(&1^如?&11生產(chǎn)和銷售 ；重均分子量：約70,000， 羥乙基基團(tuán)的取代度：〇. 50至0. 55)。此外，以下HES制劑可以單獨(dú)或彼此組合地使用： Hetastarch(重均分子量：約670, 000,輕乙基基團(tuán)的取代度：0. 75) ;Pentastarch(重均分 子量：約260, 000,羥乙基基團(tuán)的取代度：0. 5);Elohes(重均分子量：約200, 000,羥乙基 基團(tuán)的取代度：〇. 62)trimmer(重均分子量：約200, 000,羥乙基基團(tuán)的取代度：0. 5);和 Voluven(重均分子量：約130, 000,羥乙基基團(tuán)的取代度：0. 4)。
[0029] 在本發(fā)明的免疫層析法中，導(dǎo)致HES存在于測量系統(tǒng)中的方法包括（A)其中預(yù)先 將HES與溶液狀態(tài)的樣品混合的方法和（B)其中HES被包含在免疫層析裝置的一個或多個 構(gòu)件中的方法。
[0030] (A)的方法可以是這樣的方法：其中HES被包含在血液樣本稀釋液中。在這種情 況下，稀釋液中ffiS的濃度優(yōu)選為1. 0重量％至2. 5重量％。樣品和稀釋液之間的混合比 (稀釋比例）可以在考慮樣品中被分析物的濃度、免疫層析法的定量的上限、添加至樣品墊 的樣品量等下通過實驗設(shè)置。例如，如果血漿中的BNP是被分析物并且免疫層析法的定量 的上限和下限分別是10pg/mL和800pg/mL，則10倍稀釋是優(yōu)選的。
[0031] 優(yōu)選將HES在使用前溶解在合適的緩沖溶液中。只要對免疫層析法的性能，例如 抗原和抗體的穩(wěn)定性和敏感性沒有有害作用，可以使用在免疫層析法中使用的任何緩沖 劑，包括磷酸鹽緩沖溶液、甘氨酸緩沖溶液、Tris緩沖溶液、硼酸緩沖溶液和檸檬酸緩沖溶 液。在這種情況下，優(yōu)選的pH范圍是5. 5至9.0。這同樣適用于在免疫層析法中使用的添 加劑（非特異反應(yīng)抑制劑、敏化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑）。
[0032] (B)的方法將在下文中與免疫層析裝置的描述相關(guān)地進(jìn)行描述。
[0033] 本發(fā)明的免疫層析裝置具有（1)樣品墊和（2)其上固定有能夠特異結(jié)合至被分析 物的組分的膜，其以自上游的（1)和（2)的順序布置。下文中，假定被分析物是抗原并且能 夠特異結(jié)合