〇〇mL具塞離心管中加入35mL蒸餾水，振蕩混勻，再向所述 100mL具塞離心管中準(zhǔn)確移取5.OmL衍生化試劑，之后在超聲波清洗機(jī)中超聲萃取并衍生 化（其中：超聲波清洗機(jī)設(shè)定的參數(shù)為功率80w、溫度60°C，超聲萃取時(shí)間為30min)，再向 所述lOOmL具塞離心管中依次加入2. 5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21. 9%的乙酸鋅溶液和2. 5mL質(zhì)量 濃度為106.Og/L的亞鐵氰化鉀溶液，振蕩均勻，于8000r/min下離心5min，靜置，移取靜置 后的上層清液至50mL容量瓶中，用5mL蒸餾水洗絳殘澄1次，于8000r/min下離心5min， 靜置，合并上層清液并用蒸餾水定容至50mL，用0. 22ym混合相濾頭過濾，制得待測(cè)樣品溶 液；
[0027]標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：依次移取 0yL、50yL、100yL、200yL、500yL、1000yL 的114yg/mL甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液于6個(gè)lOmL容量瓶中，向所述6個(gè)lOmL容量瓶中依次加入 1.OmL的所述衍生化試劑，用蒸餾水定容，此時(shí)所述6個(gè)10mL容量瓶中溶液的甲醛含量分別 為 0yg/mL、0. 570yg/mL、1. 140yg/mL、2. 280yg/mL、5. 700yg/mL、11. 400yg/mL，將所述 6個(gè)lOmL容量瓶置于60°C恒溫水浴鍋中加熱20min后取出置于流動(dòng)水中快速冷卻至室溫， 用0. 22ym混合相濾頭過濾，制得具有6個(gè)等級(jí)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；
[0028] 高效液相色譜測(cè)定：利用高效液相色譜儀配合紫外檢測(cè)器對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測(cè) 樣品溶液進(jìn)行分析檢測(cè)，得到色譜圖；所述高效液相色譜儀的色譜分析條件為：色譜柱采 用EelipseXDB-C18液相色譜柱或其他等效的C18液相色譜柱，色譜柱溫度為40°C，進(jìn)樣量 為20yL，流速為1.OmL/min，流動(dòng)相為水和乙腈，所述水和乙腈的體積比為水：乙腈=3:7， 采用等梯度洗脫，洗脫時(shí)間為7min;在258nm下進(jìn)行檢測(cè)，即可分別得到標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色 譜圖和桔子溶液的色譜圖，如圖1至2所示；
[0029] 桔子中甲醛含量的定量分析：根據(jù)色譜圖，采用外標(biāo)法對(duì)桔子中甲醛進(jìn)行定量分 析。即首先以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液所檢測(cè)出的甲醛的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得 到標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖3所示，與標(biāo)準(zhǔn)曲線相對(duì)應(yīng)的回歸方程、相關(guān)系數(shù)等數(shù)據(jù)見表1所示，然后 將桔子溶液檢出的甲醛的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得到桔子溶液中的甲醛濃度，由此 即可計(jì)算出桔子中甲醛的含量，計(jì)算公式如下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種果蔬中甲醛含量的測(cè)定方法，其特征在于，用待測(cè)果蔬樣品制備待測(cè)樣品溶液， 待測(cè)樣品溶液通過高效液相色譜儀配合紫外檢測(cè)器檢測(cè)，采用外標(biāo)法對(duì)果蔬中甲醛進(jìn)行定 量分析； 待測(cè)樣品溶液的制備：稱取經(jīng)組織粉碎機(jī)粉碎的待測(cè)果蔬樣品，放入具塞離心管中，向 所述具塞離心管中加入蒸餾水、衍生化試劑，在超聲波清洗機(jī)中超聲萃取并衍生化，再向所 述具塞離心管中依次加入乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液，振蕩均勻，離心靜置，移取靜置后 的上層清液，洗滌殘?jiān)x心靜置，合并上層清液并定容，過濾，制得待測(cè)樣品溶液； 高效液相色譜儀的色譜分析條件：色譜柱采用Eelipse XDB-C18液相色譜柱，色譜柱 溫度為40°C，進(jìn)樣量為20 y L，流速為1.0 mL/min，流動(dòng)相為水和乙腈，所述水和乙腈的體積 比為水：乙腈=3:7,采用等梯度洗脫，洗脫時(shí)間為7min ; 所述衍生化試劑的制備：稱取300.0 mg五氟苯肼，溶解并定容于IOOmL乙腈中。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種果蔬中甲醛含量的測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟： 待測(cè)樣品溶液的制備：稱取IOg經(jīng)組織粉碎機(jī)粉碎的待測(cè)果蔬樣品，精確至〇. 〇lg，放 入IOOmL具塞離心管中，向所述IOOmL具塞離心管中加入35mL蒸餾水，振蕩混勻，再向所 述IOOmL具塞離心管中準(zhǔn)確移取5. OmL衍生化試劑，之后在超聲波清洗機(jī)中超聲萃取并衍 生化，再向所述IOOmL具塞離心管中依次加入2. 5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21. 9%的乙酸鋅溶液和 2. 5mL質(zhì)量濃度為106. Og/L的亞鐵氰化鉀溶液，振蕩均勾，于8000r/min下離心5min，靜 置，移取靜置后的上層清液至50mL容量瓶中，用5mL蒸餾水洗滌殘?jiān)?次，于8000r/min下 離心5min，靜置，合并上層清液并用蒸餾水定容至50mL，用0. 22 ym混合相濾頭過濾，制得 待測(cè)樣品溶液； 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：依次移取0 y L、50 y L、100 y L、200 y L、500 y L、1000 y L的 114 yg/mL甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用液于6個(gè)IOmL容量瓶中，向所述6個(gè)IOmL容量瓶中依次加入 1.0 mL的所述衍生化試劑，用蒸餾水定容，此時(shí)所述6個(gè)IOmL容量瓶中溶液的甲醛含量分別 為 0 y g/mL、0. 570 y g/mL、L 140 y g/mL、2. 280 y g/mL、5. 700 y g/mL、11. 400 y g/mL，將所述 6個(gè)IOmL容量瓶置于60°C恒溫水浴鍋中加熱20min后取出置于流動(dòng)水中快速冷卻至室溫， 用0. 22 y m混合相濾頭過濾，制得具有6個(gè)等級(jí)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； 高效液相色譜測(cè)定：利用高效液相色譜儀配合紫外檢測(cè)器對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測(cè)樣品 溶液進(jìn)行分析檢測(cè)，得到色譜圖； 果蔬中甲醛含量的定量分析：根據(jù)色譜圖，采用外標(biāo)法對(duì)果蔬中甲醛進(jìn)行定量分析。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種果蔬中甲醛含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述色譜柱的 規(guī)格為4. 6mm X 250mm，填充物粒徑為5 y m。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的一種果蔬中甲醛含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述超聲波 清洗機(jī)設(shè)定的參數(shù)為功率80w、溫度60°C，所述超聲萃取時(shí)間為30min。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的一種果蔬中甲醛含量的測(cè)定方法，其特征在于，所述紫外檢 測(cè)器的檢測(cè)波長為258nm。
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品安全檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種果蔬中甲醛含量的測(cè)定方法。用待測(cè)果蔬樣品制備待測(cè)樣品溶液，待測(cè)樣品溶液通過高效液相色譜儀配合紫外檢測(cè)器檢測(cè)，采用外標(biāo)法對(duì)果蔬中甲醛進(jìn)行定量分析。本發(fā)明所述的測(cè)定方法檢測(cè)時(shí)間短，一個(gè)檢測(cè)周期僅需40分鐘；本發(fā)明所述的測(cè)定方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)；本發(fā)明所述的測(cè)定方法的色譜條件使甲醛的衍生產(chǎn)物色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好的相關(guān)性，檢測(cè)限為0.057mg/kg，加標(biāo)試驗(yàn)中，當(dāng)果蔬中甲醛添加水平為1.14mg/kg～17.10mg/kg時(shí)，平均回收率為86.3％～93.8％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6～5.0％。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104849372
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510269054
【發(fā)明人】闞建全, 李俊, 鄭炯, 張甫生, 石慧, 夏雪娟, 任廷遠(yuǎn)
【申請(qǐng)人】西南大學(xué)
【公開日】2015年8月19日
【申請(qǐng)日】2015年5月25日