六味地黃制劑的超高效液相雙波長多指標(biāo)含量測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥測試技術(shù)領(lǐng)域，更具體設(shè)及一種六味地黃制劑的超高效液相雙波 長多指標(biāo)含量測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 六味地黃作為"滋補(bǔ)腎陰"的代表方劑，其療效不容置疑，現(xiàn)今市場上的六味地黃 制劑眾多，故只有確保其質(zhì)量，才能讓該一經(jīng)典古方充分發(fā)揮其治療優(yōu)勢。2010版中國藥 典規(guī)定的含量測定；對于水蜜丸、小蜜丸、大蜜丸該S種劑型，含牡丹皮W丹皮酪計(jì)，水蜜丸 每Ig不得少于0. 90mg;小蜜丸每Ig不得少于0. 70mg;大蜜丸每丸不得少于6. 3mg。含酒 奧肉W馬錢巧計(jì)，水蜜丸每Ig不得少于0. 7〇mg;小蜜丸每Ig不得少于0. 50mg;大蜜丸每丸 不得少于4. 5mg。對于濃縮丸，每Ig含酒奧肉W馬錢巧計(jì)，不得少于1. 4mg，每Ig含牡丹皮 W丹皮酪計(jì)，不得少于1. 8mg。膠囊劑每粒含牡丹皮W丹皮酪計(jì)，規(guī)格（1)不得少于3.Omg; 規(guī)格（2)不得少于1. 5mg，酒奧肉W熊果酸計(jì)，規(guī)格（1)不得少于0. 60mg;規(guī)格（2)不得少 于0.30mg。其中丹皮酪和馬錢巧采用高效液相色譜檢測，且色譜條件不同，檢測波長分別為 274nm和236nm，熊果酸采用薄層色譜法進(jìn)行含量測定，操作步驟繁瑣，耗時(shí)較長，不利于快 速高效的檢測且不能從整體評價(jià)和控制六味地黃整方的質(zhì)量。
[0003] W往有關(guān)六味地黃制劑的質(zhì)量控制研究報(bào)道較多的是關(guān)于高效液相色譜聯(lián)接紫 外檢測器，但往往能同時(shí)檢測的成分較少，也不能從整體上進(jìn)行質(zhì)量控制，有報(bào)道液質(zhì)聯(lián) 用和膠束電動毛細(xì)管色譜對六味地黃丸進(jìn)行多成分含量測定，均能同時(shí)檢測其中的四種成 分，但此類方法的普及受儀器較為少見的限制。還有文獻(xiàn)報(bào)道高效液相色譜聯(lián)用二極管陣 列和蒸發(fā)光散射檢測器能同時(shí)檢測六味地黃丸中的八種成分，但采用兩種檢測器檢測過程 較為繁瑣，且耗時(shí)費(fèi)力。超高效液相色譜扣冊LC)采用小顆粒填料色譜柱和超高壓系統(tǒng)，可 W顯著改善色譜峰的分離度和檢測靈敏度，又可W顯著縮短分析周期，減小試劑消耗，配備 二極管陣列檢測器值A(chǔ)D)后，檢測范圍更為拓寬。因此采用超高效液相色譜，經(jīng)過DAD全波 長掃描確定適合的檢測波長，能對六味地黃丸及膠囊中的主要成分進(jìn)行快速、全面的檢測， 儀器易得，方法簡便操作性強(qiáng)，有望成為該復(fù)方制劑質(zhì)量控制的強(qiáng)大手段。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于，針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種六味地黃制劑多成分 的超高效液相雙波長含量測定方法。本發(fā)明提供的方法可W實(shí)現(xiàn)對六味地黃制劑中的主要 成分進(jìn)行快速、全面的檢測，儀器易得，方法簡便，操作性強(qiáng)。
[0005] 本發(fā)明提供了一種六味地黃制劑的超高效液相雙波長多指標(biāo)含量測定方法，該方 法具體包括W下步驟：
[000引 （1)取六味地黃制劑，粉碎后精密稱取，W濃度lg/10~30ml溶解于甲醇中，超聲 提取，離屯、，取上清液過濾，即得六味地黃制劑溶液，備用；
[0007] 似精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品，W濃度20~30yg/ml溶解于甲醇中，即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備 用；
[0008] (3)采用超高效液相色譜法，在相同的檢測條件下分別獲得六味地黃制劑溶液和 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖；所述檢測條件包括：
[0009] 色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；
[0010] 采用梯度洗脫；其中，流動相A為濃度0. 08ml/100ml的磯酸水溶液，流動相B為己 膳；洗脫程序?yàn)椋?~5111111，2~25%流動相6;5~8111111，25~70%流動相6巧~8.1111111， 70-95%流動相6;8.1~13111111，95%流動相6;
[0011]檢測波長為 200-220nm和 238-250nm;
[0012] (4)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度、標(biāo)準(zhǔn)品在色譜圖中的峰面積W及六味地黃制劑中與標(biāo)準(zhǔn) 品相對應(yīng)成分在色譜圖中的峰面積，計(jì)算六味地黃制劑中與標(biāo)準(zhǔn)品相對應(yīng)成分的含量。
[0013] 本發(fā)明所述六味地黃制劑為六味地黃水蜜丸、大蜜丸、濃縮丸或膠囊。
[0014] 本發(fā)明步驟（1)對六味地黃制劑的提取W及溶液的配制方法進(jìn)行優(yōu)化，從而增加 了檢測的準(zhǔn)確度。具體而言，所述超聲提取的超聲波頻率優(yōu)選為35000~45000Hz，提取時(shí) 間優(yōu)選為20~40min在上述提取條件下，離屯、的速度優(yōu)選為5000~20000轉(zhuǎn)/分，離屯、時(shí) 間為5~15min。離屯、后，可使用孔徑0. 2~0. 3ym的濾膜過濾對上清液進(jìn)行過濾。通過 對上述條件的優(yōu)選，可W提高后續(xù)步驟中檢測的準(zhǔn)確度。
[0015] 作為一種優(yōu)選方案，本發(fā)明步驟（1)具體為：取六味地黃制劑，粉碎后精密稱取， W濃度Ig/lOml溶解于甲醇中，用頻率40000化的超聲波提取30min，W10000轉(zhuǎn)/分的速 度離屯、lOmin，取上清液，用孔徑0. 22ym的濾膜過濾，即得六味地黃制劑溶液。
[0016] 本發(fā)明步驟（2)所述標(biāo)準(zhǔn)品根據(jù)六味地黃制劑中的有效成分和藥典規(guī)定的檢測 成分進(jìn)行選取，包括沒食子酸、原兒茶酸、1，2, 3, 4, 6-五沒食子酷葡萄糖、丹皮酪、5-哲甲 基慷醒、莫諾巧、馬錢巧、猜牙菜巧、巧藥巧、苯甲酸和苯甲酯巧藥巧。在本發(fā)明中，所述標(biāo)準(zhǔn) 品的濃度是指每種標(biāo)準(zhǔn)品分別的濃度，在實(shí)際操作時(shí)，可將各種標(biāo)準(zhǔn)品分別精密稱量后，合 并，溶解于特定量的甲醇中，并混合均勻，得到混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。所述標(biāo)準(zhǔn)品的濃度優(yōu)選為： 沒食子酸、原兒茶酸、1，2, 3, 4, 6-五沒食子酷葡萄糖、丹皮酪、5-哲甲基慷醒、莫諾巧、馬錢 巧、猜牙菜巧、巧藥巧、苯甲酸和苯甲酯巧藥巧的濃度均為25yg/ml。
[0017] 由于不同成分在不同波長下出峰情況不同，因此，本發(fā)明優(yōu)選在在檢測波長為 200-220皿的條件下檢測沒食子酸、原兒茶酸、1，2, 3, 4, 6-五沒食子酷葡萄糖、丹皮酪；在 檢測波長為238-250皿的條件下，檢測5-哲甲基慷醒、莫諾巧、馬錢巧、猜牙菜巧、巧藥巧、 苯甲酸、苯甲酯巧藥巧。
[0018] 本發(fā)明步驟（3)所述檢測的波長優(yōu)選為2lOnm和238nm。采用該兩個(gè)波長對上述 成分進(jìn)行檢測，可W實(shí)現(xiàn)最佳的分析效果。
[0019] 本發(fā)明步驟（3)所述磯酸水溶液濃度0. 08ml/100ml的含義為：每100ml溶液中含 有0. 08ml磯酸。所述梯度洗脫程序中，流動相B的百分比是指流動相B占兩相體積之和的 體積百分比。
[0020] 本發(fā)明步驟（3)還可W包括W下檢測條件；色譜柱的規(guī)格為100~250mmX2. 1~ 4. 6mm，優(yōu)選為lOOmmX2. 1mm。色譜柱填充劑的粒徑為1. 8~5. 0ym，優(yōu)選為1. 8~2. 0ym， 進(jìn)一步優(yōu)選為1.8ym。所述填充劑可選用購自安捷倫科技公司的AgilentSBCi8。色譜 柱的柱溫為30~40°C，優(yōu)選為35°C。流動相流速為0. 1~1.Oml/min，優(yōu)選為0. 4ml/min。 進(jìn)樣量為1~5y1，優(yōu)選為1~2y1，進(jìn)一步優(yōu)選為1y1。
[0021] 由于標(biāo)準(zhǔn)品溶液和六味地黃制劑溶液的檢測條件相同，在色譜圖中，六味地黃制 劑中與標(biāo)準(zhǔn)品相對應(yīng)成分出峰的保留時(shí)間和峰形應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品基本相同，因此，可W通過相 同的保留時(shí)間判斷兩幅色譜圖中相對應(yīng)的成分，并通過峰的形狀輔助確認(rèn)。本發(fā)明步驟（4) 通過比較標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖和六味地黃制劑溶液色譜圖中相對應(yīng)成分的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) 品的已知濃度，計(jì)算出六味地黃制劑溶液中與標(biāo)準(zhǔn)品相對應(yīng)成分的濃度，進(jìn)一步計(jì)算出六 味地黃制劑中與標(biāo)準(zhǔn)品相對應(yīng)成分的含量。
[0022] 本發(fā)明方法采用超高效液相雙波長多指標(biāo)進(jìn)行色譜檢測，僅需不到10分鐘即可 檢測六味地黃丸及膠囊中至少11種主要成分，并對其進(jìn)行定量。與傳統(tǒng)的高效液相色譜法 相比，可將分析時(shí)間節(jié)省3/4W上，同時(shí)，節(jié)省了試劑耗費(fèi)。本發(fā)明提供的方法采用雙波長 檢測，從而涵蓋了六味地黃制劑中大部分含量較高的成分，且檢測方法準(zhǔn)確、可靠。
[0023] 本發(fā)明提供的超高效液相雙波長多指標(biāo)含量測定方法，可準(zhǔn)確、簡便、快速檢測六 味地黃制劑，并有利于從整體上評價(jià)六味地黃制劑的質(zhì)量，確保其臨床療效。
【附圖說明】
[0024] 圖1是210皿波長下的混合標(biāo)準(zhǔn)品與六味地黃濃縮丸樣品（34號樣品）色 譜圖；圖中標(biāo)記；a、混合標(biāo)準(zhǔn)品，b、六味地黃