[0037]當然，為了使得制得的巧光吸收光譜曲線的方程的線性相關盡可能趨近于1，在本 發(fā)明的一種優(yōu)選的實施方式中，還可W進一步限定為在溫度為293-320K的條件下測定最 大巧光強度。
[0038] W下將通過實施例對本發(fā)明進行詳細描述。W下實施例中，所述聚合物PPEAS03為 根據(jù)下述制備方法制得，所述T-球蛋白為上海晶純生化科技股份有限公司的市售品，所 述憐酸氨二鋼-憐酸二氨鐘緩沖溶液為根據(jù)下述制備方法制得。
[0039] 制備例1
[0040] 根據(jù)《Microchim.Acta》期刊第177期第357-364頁中記載的方法制得聚合物 P陽as〇3。 陽OW 制備例2
[0042] 將3. 561g憐酸氨二鋼溶于lOOmL水中，制得0.2mol/L的憐酸氨二鋼溶液，將 3. 06g憐酸二氨鐘溶于lOOmL水中，制得0. 2mol/L的憐酸二氨鐘溶液，然后將上述31. 5mL的憐酸氨二鋼溶液滴加到68. 5mL的憐酸二氨鐘溶液中，調節(jié)抑值至6. 5,從而制得憐酸氨 二鋼-憐酸二氨鐘緩沖溶液。 陽043] 實施例1 W44] 將400 y L濃度為0. 5mg/mL的聚合物PPEAS03溶于濃度為0. 2mol/L的上述憐酸 氨二鋼-憐酸二氨鐘緩沖溶液中制得溶劑；取10份上述溶劑，并在每份溶劑中分別加入濃 度為5 y g/mL的 丫-球蛋白標準溶液0 y 1，10 y 1，20 y 1，100 y 1，200 y 1，500 y 1，700 y 1， 1000 y 1，1500 y 1和2000 y 1，并加水定容制成不同濃度的待測溶液，放置40min后分別測 定上述待測溶液的巧光強度，如圖1所示，測定各待測溶液的最大巧光強度（nm)分別為 5：34nm，508nm，488. 7nm，425. 8nm，396. 4nm，332. 2nm，301. 9nm，247nm，205. 3nm和182. 5nm， 其中，圖1中丫-球蛋白標準溶液的濃度自上而下依次為〇yg/l，5yg/l，l〇yg/l，5〇yg/ L，100 y g/l，250 y g/l，350 y g/l，500 y g/l，750 y g/L和1000 y g/L;如圖2所示，W溶劑 的巧光發(fā)射峰的巧光強度（巧光強度值為534nm)和待測溶液的巧光發(fā)射峰的巧光強度 的比值為縱坐標，丫-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立巧光吸收光譜曲線的方程，得到溫 度為293K下的巧光吸收光譜曲線的方程為：y=1. 11246+0.0019X，其中線性相關為R= 0.99789。
[0045]如圖3所示，按照上述方法分別制得在溫度為310K和320K下的巧光吸收光譜曲 線圖?？蒞看出，在溫度為293K的條件下巧滅常數(shù)最高。
[0046]如圖4所示，取4份PPEAS03溶液，第1份PPEAS03溶液中不加入丫-球蛋白，第2-4份PPEAS03溶液中分別加入相同體積（1〇化）的濃度為100ng/mL、250ng/mL、500ng/mL 的丫-球蛋白，測定其巧光衰減時間，其中，未加入丫-球蛋白的巧光衰減時間為0.781ns， 加入濃度為l(K)ng/mL的丫 -球蛋白的巧光衰減時間為0. 78化S，加入25化g/mL的丫 -球蛋 白的巧光衰減時間為0. 79化s、5(K)ng/mL的丫 -球蛋白的巧光衰減時間為0. 794ns，由此可 W很明顯地看出，巧光衰減時間幾乎不變。因此，進一步確定了 丫-球蛋白對ppeas〇3聚合 物的巧滅是靜態(tài)巧滅。 陽047] 應用例1
[0048]按照實施例的方法進行操作，不同的是，所述丫-球蛋白溶液的濃度為0.2yg/ ml,測得的最大巧光強度為340. 8nm，按照上述方程計算得出丫-球蛋白溶液的濃度為A1 = 0.196yg/mlo W49] 應用例2
[0050] 按照實施例的方法進行操作，不同的是，所述丫-球蛋白溶液的濃度為0. 4yg/ ml,測得的最大巧光強度為289nm，按照上述方程計算得出丫-球蛋白溶液的濃度為A2 = 0.408yg/mlo 陽0川應用例3
[0052] 按照實施例的方法進行操作，不同的是，所述丫-球蛋白溶液的濃度為0.25yg/ ml,測得的最大巧光強度為343. 6nm，按照上述方程計算得出丫-球蛋白溶液的濃度為A3 = 0.257yg/mlo 陽〇5引 應用例4
[0054] 按照實施例的方法進行操作，不同的是，所述丫-球蛋白溶液的濃度為0.5yg/ ml,測得的最大巧光強度為284. 3nm，按照上述方程計算得出丫-球蛋白溶液的濃度為A4 = 0.516yg/mlo
[0055] 通過上述可W看出，通過本發(fā)明的方法測定的丫-球蛋白溶液的濃度與丫-球蛋 白溶液的實際濃度值差距很小，因而在檢測丫-球蛋白溶液的濃度時具有較高的靈敏度， 且操作方法的穩(wěn)定性良好，可重復性高，而且通過運種方式檢測丫 -球蛋白溶液的濃度操 作方法簡單，能快速測得T-球蛋白溶液的濃度，大大降低了其他蛋白質對檢測的干擾。
[0056] W上詳細描述了本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實施方式中 的具體細節(jié)，在本發(fā)明的技術構思范圍內，可W對本發(fā)明的技術方案進行多種簡單變型，運 些簡單變型均屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0057]另外需要說明的是，在上述【具體實施方式】中所描述的各個具體技術特征，在不矛 盾的情況下，可W通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復，本發(fā)明對各種可 能的組合方式不再另行說明。
[0058] 此外，本發(fā)明的各種不同的實施方式之間也可W進行任意組合，只要其不違背本 發(fā)明的思想，其同樣應當視為本發(fā)明所公開的內容。
【主權項】
1. 一種Y-球蛋白的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括： ⑴將如式⑴所示結構的聚合物PPEAS03溶于水中制得溶劑； (2) 將不同濃度的Y-球蛋白標準溶液置于步驟（1)制得的溶劑中，并加水和緩沖溶液 定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大熒光強度； (3) 以溶劑的熒光發(fā)射峰的熒光強度和待測溶液的熒光發(fā)射峰的熒光強度的比值為縱 坐標，Y-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立熒光吸收光譜曲線的方程； (4) 檢測待測濃度的Y-球蛋白溶液的最大熒光強度，然后根據(jù)熒光吸收光譜曲線的 方程計算待測濃度的Y-球蛋白溶液中Y-球蛋白的濃度；其中，n為正整數(shù)。2. 根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其中，相對于lmg的所述聚合物PPEASO3，所述緩 沖溶液的用量為〇. 01-0. 2ymol。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的檢測方法，其中，所述緩沖溶液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫 鉀或三（羥甲基）氨基甲烷一鹽酸緩沖溶液。4. 根據(jù)權利要求3所述的檢測方法，其中，所述磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀和三（羥甲 基）氨基甲烷一鹽酸緩沖溶液的pH值為5-9。5. 根據(jù)權利要求1或2所述的檢測方法，其中，步驟（1)中所述聚合物PPEAS03由聚合 物PPEAS0^§液提供，且所述聚合物PPEASO3溶液的溶劑為水。6.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其中，所述聚合物PPEASO3溶液中聚合物PPEASO 3 的濃度為7. 5-22. 5 y g/mL。7. 根據(jù)權利要求1或2所述的檢測方法，其中，所述待測溶液的pH值為5-9。8. 根據(jù)權利要求1或2所述的檢測方法，其中，所述檢測方法還包括將待測溶液放置 l-80min后測定其熒光強度。9. 根據(jù)權利要求1或2所述的檢測方法，其中，在步驟⑵中，檢測各待測溶液的最大 熒光強度波長范圍為590-820nm〇10. 根據(jù)權利要求1或2所述的檢測方法，其中，在溫度為293-320K的條件下測定最大 熒光強度。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種γ-球蛋白的檢測方法，所述檢測方法包括：將如式(I)所示結構的聚合物PPEASO3溶于水中制得溶劑；將不同濃度的γ-球蛋白標準溶液置于上述制得的溶劑中，并加水和緩沖溶液定容制成不同濃度的待測溶液，測定各待測溶液的最大熒光強度；以溶劑的熒光發(fā)射峰的熒光強度和待測溶液的熒光發(fā)射峰的熒光強度的比值為縱坐標，γ-球蛋白溶液的濃度為橫坐標建立熒光吸收光譜曲線的方程；檢測待測濃度的γ-球蛋白溶液的最大熒光強度，然后根據(jù)熒光吸收光譜曲線的方程計算待測濃度的γ-球蛋白溶液中γ-球蛋白的濃度；其中，n為正整數(shù)。實現(xiàn)γ-球蛋白的濃度檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好且可重復性高，操作簡單，能快速測定的效果。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN105115945
【申請?zhí)枴緾N201510367483
【發(fā)明人】張萍, 卓舒娟, 朱昌青
【申請人】安徽師范大學
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年6月26日