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      一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法

      文檔序號(hào):8395060閱讀:14113來(lái)源:國(guó)知局
      一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及IgM抗體免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
      【背景技術(shù)】
      [0002] 現(xiàn)有免疫檢測(cè)方法中,主要是應(yīng)用免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)樣本中待測(cè)物質(zhì);在臨床 檢驗(yàn)中,主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中抗體或抗原等物質(zhì)。根據(jù)檢測(cè)原理的不同,免疫 檢測(cè)可以分為間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法和捕獲法。
      [0003] 在正常血清中,IgG是血清免疫球蛋白的主要成分,約占血清中免疫球蛋白總含量 的75 %,而IgM則大約占血清中免疫球蛋白總量的6 %,針對(duì)某種抗原的特異性IgM經(jīng)常與 特異性IgG同時(shí)存在,且特異性IgG經(jīng)常會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定?,F(xiàn)有的四種檢測(cè)方法中, 特異性IgG對(duì)IgM抗體測(cè)定的干擾主要表現(xiàn)在如下:
      [0004] 間接法測(cè)IgM抗體時(shí),通過(guò)包被抗原,用酶或者其他指示物標(biāo)記二抗的模式進(jìn)行 檢測(cè),這類方法容易出現(xiàn)特異性不強(qiáng),易受待測(cè)樣本中IgG的干擾;
      [0005] 夾心法測(cè)IgM抗體時(shí),同樣出現(xiàn)特異性不強(qiáng),容易受IgG的干擾,檢測(cè)靈敏度較捕 獲法不高,同時(shí)標(biāo)記的抗原與包被的抗原會(huì)相互競(jìng)爭(zhēng)與待測(cè)的IgM結(jié)合,導(dǎo)致檢測(cè)信號(hào)不 強(qiáng)或者沒有;
      [0006] 競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)IgM抗體時(shí),由于IgM抗體分子量較大,不是非常適合使用此方法,且與 間接法一樣,其特異性不強(qiáng),易受待測(cè)樣本中IgG的干擾,同時(shí)標(biāo)記所用的IgM抗體不易獲 得。
      [0007] 目前測(cè)定IgM抗體時(shí),主要用捕獲法,捕獲法則是通過(guò)包被抗IgM,用酶或其他指 示物標(biāo)記抗原的模式進(jìn)行檢測(cè),即,先將血清中所有免疫球蛋白IgM(包括特異性IgM和非 特異性IgM)都固定于固相中,去除IgG干擾后,再檢測(cè)待測(cè)特異性IgM,但是這種在檢測(cè)過(guò) 程中,容易出現(xiàn)檢測(cè)靈敏度不高,容易導(dǎo)致假陰性現(xiàn)象。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0008] 針對(duì)現(xiàn)檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法中存在的特異性不強(qiáng),容易受到待測(cè)樣本中 IgG干擾和檢測(cè)靈敏度不高,容易出現(xiàn)假陰性的問題,本發(fā)明的目的是為了解決前述問題而 提出一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法。
      [0009] 為達(dá)到上述技術(shù)目的,本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案:
      [0010] 本發(fā)明為一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法:包含以下步驟:
      [0011] 步驟一、抗IgM的固化處理,將抗IgM置于固相載體上,在2°C~8°C的條件下,孵 育12小時(shí)及以上,然后洗滌3~5次;
      [0012] 步驟二、待測(cè)IgM與抗IgM結(jié)合,將作為樣本的待測(cè)IgM加入已經(jīng)固化了抗IgM的 固相載體中,孵育〇. 5~1. 0小時(shí),洗滌3~5次;
      [0013] 步驟三、抗原、標(biāo)記單抗與固相載體上的待測(cè)IgM結(jié)合,可以先將抗原與標(biāo)記單抗 混合均勻后,再加入步驟二中洗滌好的固相載體中,在恒溫箱中,37°C恒溫條件孵育0. 5~ 1小時(shí),孵育結(jié)束,洗滌3~5次;或者依次將抗原、標(biāo)記單抗加入步驟二中洗滌好的固相載 體中,即先將抗原加入,緊接著加入標(biāo)記單抗,在恒溫箱中,37°C條件恒溫孵育0. 5~1小 時(shí),孵育結(jié)束,洗滌3~5次,留待檢測(cè);
      [0014] 步驟四、信號(hào)檢測(cè),待步驟三完成后,根據(jù)標(biāo)記單抗上的指示物的不同,在相應(yīng)的 儀器設(shè)備上進(jìn)行其反應(yīng)信號(hào)檢測(cè)。
      [0015] 較優(yōu)地,所述抗原、標(biāo)記單抗與待測(cè)IgM的孵育過(guò)程中,一個(gè)抗原份額子可同時(shí)結(jié) 合2個(gè)及以上不同結(jié)合位點(diǎn)的標(biāo)記單抗,以增加反應(yīng)信號(hào)。
      [0016] 較優(yōu)地,所述固相載體為微孔板、玻璃板或NC膜。
      [0017] 較優(yōu)地,所述洗滌過(guò)程采用含有表面活性劑的洗滌液。
      [0018] 較優(yōu)地,所述抗IgM為羊抗IgM或者鼠抗IgM。
      [0019] 較優(yōu)地,所述標(biāo)記單抗中的指示物為酶、膠體金、膠體銀、膠體硒、乳膠、放射性物 質(zhì)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)及熒光物質(zhì)。
      [0020] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明首先排除了樣本中IgG與待測(cè)IgM競(jìng)爭(zhēng)性與抗原的結(jié) 合,極大的降低了IgG對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾,從而降低檢測(cè)的背景和假陽(yáng)性率,提高檢測(cè)特異 性,同時(shí)采用2個(gè)及以上不同結(jié)合位點(diǎn)的標(biāo)記單抗,增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào),降低假陰性率,提高檢 測(cè)靈敏度。
      【附圖說(shuō)明】
      [0021] 圖1為本發(fā)明一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法的反應(yīng)原理示意圖。
      [0022] 其中,1-固相載體;2-抗IgM ;3_樣本中待測(cè)IgM ;4_抗原;5-標(biāo)記單抗。
      【具體實(shí)施方式】
      [0023] 為了更好地說(shuō)明本發(fā)明,現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例與附圖作進(jìn)一步說(shuō)明。
      [0024] 本發(fā)明為一種檢測(cè)IgM抗體的免疫檢測(cè)方法,如圖1所示的反應(yīng)原理,涉及的步驟 為:
      [0025] 步驟一、抗IgM2的固化處理。將抗IgM2置于檢測(cè)系統(tǒng)的微孔板或者玻璃板或者 NC膜上,這些微孔板或者玻璃板或者NC膜為實(shí)驗(yàn)的固相載體1,在2°C~8°C的條件下,孵 育12小時(shí)及以上,然后用含表面活性劑的洗滌液洗滌3~5次,洗滌的目的主要是去除尚 未結(jié)合上固相載體1的抗IgM2。
      [0026] 步驟二、待測(cè)IgM3與抗IgM2結(jié)合。將含待測(cè)IgM3樣本加入已經(jīng)固化了抗IgM2 的固相載體1中,孵育〇. 5~1. 0小時(shí),待待測(cè)IgM3和固相載體1上的抗IgM2結(jié)合后,用 含表面活性劑的洗滌液洗滌3~5次,以除去樣本中的特異性IgG,避免特異性IgG對(duì)檢測(cè) 的干擾。
      [0027] 步驟三、抗原、標(biāo)記單抗與固相載體上的待測(cè)IgM3結(jié)合??梢詫⒖乖c至少2個(gè) 標(biāo)記單抗混合均勻后,加入已經(jīng)附著了抗IgM2和待測(cè)IgM3的固相載體中,在恒溫箱內(nèi),恒 溫溫度37°C,孵育0. 5~1小時(shí),孵育結(jié)束,采用含表面活性劑的洗滌液洗滌3~5次;或者 可以先將抗原加入放置在37°C的恒溫箱中的已經(jīng)附著了抗IgM2結(jié)和樣本zhogn待測(cè)IgM3 的固相載體中,緊接著加入至少2個(gè)標(biāo)記單抗,同樣孵育0. 5~1小時(shí),孵育結(jié)束,采用含表 面活性劑的洗滌液洗滌3~5次,得到孵育物,待檢測(cè);
      [0028] 步驟四、信號(hào)檢測(cè)。待步驟三完成后,根據(jù)標(biāo)記單抗上指示物的不同,在相應(yīng)的儀 器設(shè)備上進(jìn)行其反應(yīng)信號(hào)檢測(cè)。
      [0029]具體地,本發(fā)明涉及的標(biāo)記單抗是2個(gè)及以上具有不同結(jié)合位點(diǎn)的單抗。
      [0030] 具體地,本發(fā)明所使用
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