一種檢測(cè)蘋果和土壤中虱螨脲殘留的快速分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了一種檢測(cè)蘋果和±壤中風(fēng)蛾脈殘留的快速分析方法，屬分析檢測(cè)技 術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 風(fēng)蛾脈（lufenuron)(結(jié)構(gòu)式如圖1)是瑞±諾華公司開發(fā)的最新一代取代的苯甲 酷脈類的殺蟲劑，化學(xué)名稱為N-[[巧，5-二氯-4- (1，1，2, 3, 3, 3-六氣丙氧）苯基]氨基] 簇基]-2, 6-二氣苯甲酯胺，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。該藥劑通過(guò)抑制祀標(biāo)昆蟲幾下質(zhì)合成，阻 止脫皮過(guò)程而殺死害蟲，對(duì)幼蟲及卵有較好藥效。該產(chǎn)品比有機(jī)憐、氨基甲酸醋類農(nóng)藥更 安全，且能夠有效的控制對(duì)菊醋類和有機(jī)憐有抗性的鱗翅目害蟲，因而被廣泛用于蔬菜、果 樹、棉花、玉米等作物上鱗翅目害蟲的防治。同時(shí)，其在農(nóng)產(chǎn)品及環(huán)境中的殘留也日益引起 人們的關(guān)注。多個(gè)國(guó)家制定了風(fēng)蛾脈在不同作物中最高殘留限量（MRL)，如日本規(guī)定相橘類 中為0. 3mg/kg，意大利規(guī)定巧樣中為0. 5mg/kg，己西規(guī)定棉巧中0. 05mg/kg，韓國(guó)規(guī)定大白 菜中為0. 2mg/kg，歐盟規(guī)定風(fēng)蛾脈在蘋果中MRL值為0. 5mg/kg。而我國(guó)尚未制定風(fēng)蛾脈在 各種作物中的MRL值。
[0003] 目前對(duì)風(fēng)蛾脈藥物殘留的檢測(cè)主要采用液相色譜法0PLC)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì) 譜法化C-MS/M巧。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)雖然有定性準(zhǔn)確，定量靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，但價(jià)格昂貴，不宜 在普通實(shí)驗(yàn)室推廣使用。對(duì)風(fēng)蛾脈殘留狀況的研究的液相方法，近年來(lái)國(guó)內(nèi)外報(bào)道的有在 棉花、甘藍(lán)、番茄和菜豆中的殘留分析方法。液相方法對(duì)前處理要求比較高，不同基質(zhì)中相 同農(nóng)殘檢測(cè)的前處理方法差別較大，已報(bào)道的方法有些前處理步驟比較繁瑣，有些儀器方 法耗時(shí)較長(zhǎng)。蘋果基質(zhì)相對(duì)干凈，農(nóng)殘檢測(cè)干擾物主要是糖和有機(jī)酸，運(yùn)些物質(zhì)對(duì)非極性較 弱的農(nóng)藥干擾較大，特別是使用質(zhì)譜檢測(cè)時(shí)會(huì)有較大基質(zhì)效應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)蘋果和±壤中風(fēng)蛾脈殘留的快速分析方法，利用 超高效液相色譜快速，分離度，靈敏度高的特點(diǎn)，針對(duì)蘋果和±壤基質(zhì)，優(yōu)化了前處理和色 譜分離條件，建立了風(fēng)蛾脈殘留檢測(cè)的簡(jiǎn)便、快速、靈敏的分析方法，為風(fēng)蛾脈在蘋果上的 安全、合理使用及環(huán)境安全評(píng)價(jià)提供科學(xué)基礎(chǔ)。 陽(yáng)0化]本發(fā)明的技術(shù)方案是：
[0006] 一種檢測(cè)蘋果和±壤中風(fēng)蛾脈殘留的快速分析方法，其特征是，包括W下步驟：
[0007] (1)樣品前處理
[0008]稱取蘋果或±壤樣品于離屯、管中，加入乙臘，高速勻漿提取或者超聲提取，將液體 過(guò)濾至裝有氯化鋼的具塞量筒，再將離屯、管中的殘?jiān)尤胍遗D重復(fù)提取一次，將溶液也過(guò) 濾至上述裝有氯化鋼的具塞量筒，振搖，靜置，取上清液于平底燒瓶，濃縮近干，用甲醇洗涂 上述平底燒瓶，得洗脫液，再加入超純水混勻洗脫液，過(guò)0. 45ym微孔濾膜，即得待測(cè)樣品， 直接上機(jī)檢測(cè)；
[0009] 似將步驟（1)得到的待測(cè)樣品用超高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定。
[0010] 進(jìn)一步的，包括W下步驟：
[0011] (1)樣品前處理
[0012] 若樣品為蘋果，則此步驟為：稱取蘋果樣品于離屯、管中，加入乙臘，高速勻漿 0.5min，離屯、3min，將上清液過(guò)濾至裝有氯化鋼的具塞量筒，再將離屯、管中的殘?jiān)尤胍?臘重復(fù)提取一次，將提取液也過(guò)濾至上述裝有氯化鋼的具塞量筒，振搖，靜置，取上清液于 平底燒瓶，濃縮近干，用甲醇洗涂上述平底燒瓶，得洗脫液，再加入超純水混勻洗脫液，過(guò) 0. 45ym微孔濾膜，即得待測(cè)樣品；
[0013] 若樣品為±壤，則此步驟為：稱取±壤樣品于離屯、管中，加入乙臘，超聲20min，將 超聲提取液過(guò)濾至裝有氯化鋼的具塞量筒，再將離屯、管中的殘?jiān)尤胍遗D重復(fù)提取一次， 將提取液也過(guò)濾至上述裝有氯化鋼的具塞量筒，振搖，靜置，取上清液于平底燒瓶，濃縮近 干，用甲醇洗涂上述平底燒瓶，得洗脫液，再加入超純水混勻洗脫液，過(guò)0. 45ym微孔濾膜， 即得待測(cè)樣品；
[0014] 似將步驟（1)得到的待測(cè)樣品用超高效液相色譜進(jìn)行測(cè)定。
[0015] 進(jìn)一步的，包括W下步驟：
[0016] (1)樣品前處理 陽(yáng)017] 若樣品為蘋果，則此步驟為：稱取10.Og蘋果樣品于50血離屯、管中，加入20血乙 臘，在勻質(zhì)機(jī)上WlOOOOr/min高速勻漿0. 5min，4000;r/min離屯、3min，將上清液過(guò)濾至裝有 5g氯化鋼的100血具塞量筒，再將離屯、管中的殘?jiān)尤?0血乙臘重復(fù)提取一次，將提取液 也過(guò)濾至上述的裝有5g氯化鋼的具塞量筒，劇烈振搖2min，靜置20min，取20mL上清液于 平底燒瓶，濃縮近干，用ImL甲醇洗涂上述平底燒瓶，得洗脫液，再加入ImL超純水混勻洗脫 液，過(guò)0. 45ym微孔濾膜，即得待測(cè)樣品；
[0018] 若樣品為±壤，則此步驟為：稱取10.Og±壤樣品于50血離屯、管中，加入20血乙 臘，超聲20min，將超聲提取液過(guò)濾至裝有5g氯化鋼的lOOmL具塞量筒，再將離屯、管中的殘 渣加入20血乙臘重復(fù)提取一次，將提取液也過(guò)濾至上述裝有氯化鋼的具塞量筒，劇烈振搖 2min，靜置20min，取20血上清液于平底燒瓶，濃縮近干，用1血甲醇洗涂上述平底燒瓶，得 洗脫液，再加入1ml超純水混勻洗脫液，過(guò)0. 45ym微孔濾膜，即得待測(cè)樣品；
[0019] 更進(jìn)一步的，所述步驟（2)中超高效液相色譜的儀器參數(shù)條件如下：
[0020] 液相色譜條件為：
[0021] 色巧化 AcquhyUplcBEHCI8 色的化，SO.Onimxllmmxl.7 叫化 流動(dòng)相 甲醇;水=娜：4彷； 流速 0.4mlimin； 柱溫 35C; 迸樣量 2.0陣； 檢測(cè)器 紫外檢測(cè)器（XUV)芽IIEmpowers工作潘;： 檢測(cè)器波長(zhǎng) 255nm。
[0022] 本發(fā)明的有益效果：
[0023] (1)本發(fā)明的快速分析方法中，待測(cè)的藥物風(fēng)蛾脈屬于非極性較強(qiáng)的化合物，采用 反相色譜能很好的將干擾物和待測(cè)物分離；基于此，本研究利用超高效液相色譜快速，分離 度，靈敏度高的特點(diǎn)，針對(duì)蘋果和±壤基質(zhì)，優(yōu)化了前處理和色譜分離條件，建立了風(fēng)蛾脈 殘留檢測(cè)的簡(jiǎn)便、快速、靈敏的分析方法，為風(fēng)蛾脈在蘋果上的安全、合理使用及環(huán)境安全 評(píng)價(jià)提供科學(xué)基礎(chǔ)。
[0024] (2)本發(fā)明的快速分析方法中，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相，從而簡(jiǎn)化凈化步驟，樣品提取液 無(wú)需凈化，直接上機(jī)檢測(cè)，對(duì)風(fēng)蛾脈的定量并無(wú)影響。該方法簡(jiǎn)單、快速，大大的節(jié)省成本和 分析時(shí)間。
[00巧](3)本發(fā)明的快速分析方法中，洗脫定容時(shí)先用純甲醇溶解定容，再用水稀釋后上 樣（直接使用甲醇和水1:1定容時(shí)，由于含水的定容液極性太強(qiáng)不能充分的復(fù)溶風(fēng)蛾脈，對(duì) 分析結(jié)果影響較大一回收率僅有50% -60%)。
[0026] (4)本發(fā)明的快速分析方法中，選擇體積比60 :40的甲醇-水體系作為流動(dòng)化風(fēng) 蛾脈在2. 2分鐘出峰，且附近無(wú)干擾定量的雜質(zhì)峰，可快速檢測(cè)蘋果和±壤中的風(fēng)蛾脈殘 留。
[0027] (5)本發(fā)明的快速分析方法中，檢測(cè)蘋果和±壤中的風(fēng)蛾脈的定量限化0曲為 0. 05mg/kg。對(duì)農(nóng)殘限量要求較高的歐盟規(guī)定的風(fēng)蛾脈在蘋果中的脈L值0. 5mg/kg，本方法 的靈敏度完全能夠達(dá)到檢測(cè)要求。
[0028] (6)本發(fā)明的快速分析方法較高的準(zhǔn)確度和精密度（風(fēng)蛾脈在0. 025~2. 5mg/L 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)不低于0. 9997。在0. 05~2.Omg/kg加標(biāo)濃度范圍內(nèi)的 平均回收率為83. 6 %~105. 2 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0. 7 %~6. 1 %，方法的檢出限為0. 0Img/ kg)，符合農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)的要求。
【附圖說(shuō)明】
[0029] 圖1為風(fēng)蛾脈結(jié)構(gòu)式；
[0030] 圖2為不同凈化方式下風(fēng)蛾脈的回收率比較（A:無(wú)凈化；B:氨基柱；C:PSA凈 化）；
[0031] 圖3為風(fēng)蛾脈紫外吸收譜圖；
[0032] 圖4為蘋果空白樣品和添加0.05mg/kg風(fēng)蛾脈樣品圖譜（A;空白樣品；B:添加樣 品）；
[003引圖5為±壤空白樣品和添加0.05mg/kg風(fēng)蛾脈樣品圖譜（A;空白樣品；B:添加樣 品）；
[0034] 圖6為風(fēng)蛾脈標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（一:標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)曲:基質(zhì)空白標(biāo)曲）；
[0035] 圖7為為風(fēng)蛾脈標(biāo)準(zhǔn)品（0.Img/L)、蘋果空白樣品和蘋果添加樣品（0. 2mg/kg)色 譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的 內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例，實(shí)施例不應(yīng)視作對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0037] 實(shí)施例
[0038] 1材料與方法
[0039] 1. 1儀器和藥劑 W40]AcquityH-class超高效液相色譜儀，配紫外檢測(cè)器（TUV)和Empower3工作站 (美國(guó)Waters公司）；Alliance2695高效液相色譜儀，配光電二極管陣列檢測(cè)器（PDA)(美 國(guó)Waters公司；T25高速勻漿機(jī)（德國(guó)IKA公司；IKA-MS3滿旋振蕩器（德國(guó)IKA公司）； L油orata4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國(guó)化idol地）。風(fēng)蛾脈標(biāo)準(zhǔn)品：純度97% (國(guó)家農(nóng)藥質(zhì) 檢中屯、提供），甲醇為色譜純（美國(guó)Fisher)，其它試劑均為分析純。
[0041] 1.2樣品前處理
[0042] 1. 2. 1 蘋果
[0043] 稱取蘋果樣品10.Og于50血離屯、管中，加入20血乙臘，在勻質(zhì)機(jī)上W1000化/min 高速勻漿0. 5min，400化/min離屯、3min，將提取液過(guò)濾至裝有5g氯化鋼的100血具塞量筒， 再向殘?jiān)尤?0mL乙臘重復(fù)提取一次，將提取液過(guò)濾至同一具塞量筒，劇烈振搖2min，靜 置20min，取20mL上清液于平底燒瓶，濃縮近干，用ImL甲醇洗涂濃縮瓶后再加入1ml超純 水混勻洗脫液，過(guò)0. 45ym微孔濾膜，待測(cè)。
[0044] 1.2. 2±壤 W45] 稱取±壤樣品10.Og