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      多項呼吸道病原體檢測試劑盒及其檢測方法

      文檔序號:9395623閱讀:1275來源:國知局
      多項呼吸道病原體檢測試劑盒及其檢測方法
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測領(lǐng)域,涉及一種多項呼吸道病原體檢測試劑盒及其檢測方法。
      【背景技術(shù)】
      [0002]現(xiàn)有的七項呼吸道病原體檢測試劑盒(免疫熒光法)是熒光素標記的抗體與細胞上的病毒抗原結(jié)合,形成抗體抗原復(fù)合物,在熒光顯微鏡下觀察呈現(xiàn)綠色熒光的細胞個數(shù)。
      [0003]主要技術(shù)缺陷:(I)樣本處理過程復(fù)雜,樣本需要多次離心、洗滌去除黏液層,制成細胞懸濁液;(2)檢測過程復(fù)雜,時間比較長需要1-2個小時。(3)需要使用熒光顯微鏡,儀器昂貴,并且需要技術(shù)人員操作。(4)定性檢測到樣本中的有無病毒,不能確定病毒數(shù)量。(5)只能檢測感染細胞的病毒,不能檢測到樣本中游離的病毒;當少數(shù)病毒感染細胞時,可能因感染的病毒數(shù)量較少,未能觀察到綠色熒光細胞,出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0004]本發(fā)明的目的是提供一種新的多項呼吸道病原體檢測試劑盒及其檢測方法,以實現(xiàn)檢測操作簡單;檢測用時短,操作簡便;檢測特異性強;靈敏度高的目的。
      [0005]為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采取下述技術(shù)方案來實現(xiàn):
      多項呼吸道病原體檢測試劑盒,包括樣品抽提液,樣品管和多聯(lián)檢試劑板,
      多聯(lián)檢試劑板包括連接板和至少一個單一試劑板;
      單一試劑板包括卡板和試劑條,試劑板的外殼為卡板,試劑條位于卡板內(nèi)部;
      卡板的一端設(shè)有連接部,連接部與連接板可拆卸連接;
      卡板上表面設(shè)有加樣孔和檢測窗口;
      每個試劑條包括PVC板,層析膜,樣品墊,結(jié)合墊和吸水材料;
      卡板上的加樣孔位于樣品墊之上,
      每個試劑條的結(jié)合墊上固定有至少一種熒光標記的呼吸道病原體的單克隆抗體,層析膜上包含有質(zhì)控C線,至少一條檢測T線,質(zhì)控線和檢測線均位于卡板的檢測窗口內(nèi),C線固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體,每條T線均含有一種與結(jié)合墊上熒光標記抗體相對應(yīng)的抗體。
      [0006]根據(jù)不同需要,本發(fā)明可以做成不同數(shù)目的多聯(lián)病原體試劑盒。
      [0007]進一步,試劑盒還包括樣品管支架和棉簽。
      [0008]進一步,卡板的連接部為一凹槽,所述凹槽設(shè)置在卡板一端的側(cè)表面上;連接板設(shè)有與凹槽相對應(yīng)的凸起。
      [0009]進一步,所述連接板的凸起長度為凹槽長度的至少一倍。
      [0010]進一步,樣品抽提液為磷酸緩沖液、Tris緩沖液、硼酸緩沖液中的一種。
      [0011]進一步,所述樣品抽提液中含有質(zhì)量分數(shù)1%的表面活性劑TritonX-100。
      [0012]本發(fā)明還提供一種多項呼吸道病原體的檢測方法,包括以下步驟: 步驟a,采取待測樣本;
      步驟b,使用上述的試劑盒,將取出的樣品放入樣品管中,并加入樣品抽提液混合均勻;
      步驟C,分別在每個單一試劑板的加樣孔中滴加步驟b中混合均勻的待測樣品液進行反應(yīng);也可根據(jù)待測病原體的種類選取相應(yīng)數(shù)目的試劑板;
      步驟d,將反應(yīng)后的試劑板插入熒光免疫分析儀器中進行檢測,得到檢測結(jié)果。
      [0013]進一步,步驟b中加入的樣品抽提液體積與樣品體積比為1:1。
      [0014]進一步,步驟d中儀器的檢測波段為激發(fā)光波長365nm,發(fā)射光波長610nm。
      [0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
      本發(fā)明的試劑盒和檢測方法是采用熒光免疫層析技術(shù),其基本原理是免疫層析檢測方法和熒光標記技術(shù)的結(jié)合,產(chǎn)品是采用的是抗原抗體反應(yīng)方法,即將待測抗原相應(yīng)的抗體固定于載體T線上,同時將熒光標記好的另一個抗體固定于結(jié)合墊上。當樣本中含有待檢測物質(zhì)時,待檢測物質(zhì)和固定在結(jié)合墊上的熒光標記抗體反應(yīng),在層析至固定于T線位置上的抗體處,和該抗體反應(yīng)形成復(fù)合物,在激發(fā)光的作用下,在T線位置有熒光條帶出現(xiàn),熒光條帶的強弱與待測物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系。
      [0016]試劑板可以拆卸,即可同時檢測多種呼吸道病原體,也可檢測單一一種病原體。且拆卸下單一的試劑板檢測時,不會對其他的試劑板造成交叉污染。
      [0017]應(yīng)用本發(fā)明的檢測試劑盒和檢測方法時,樣本無需特殊處理,只需要抽提液稀釋樣本即可。且通過抽提液處理可以釋放出細胞中的病原體。檢測用時僅需要15-20min,時間短,操作簡便。使用的配套儀器價格低廉,操作方便。
      [0018]本產(chǎn)品以病原體的抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),加之熒光物質(zhì)強化特異性反應(yīng)效果,大大提高了產(chǎn)品的性能,特異性強,靈敏度高。
      [0019]在患者感染的初期(2-3天左右),僅有少量的病原體時。本試劑盒較高的特異性和靈敏度,能夠準確判斷病原體的陽性感染情況,在感染初期即可確定是否感染各種病原體,同時可以定量檢測樣本中的病原體數(shù)量,為治療提供依據(jù)。
      【附圖說明】
      [0020]圖1是本發(fā)明實施例1中七聯(lián)檢試劑板的立體示意圖;
      圖2是比較例的檢測結(jié)果圖。
      【具體實施方式】
      [0021]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳細闡述。
      [0022]實施例1
      一種七項呼吸道病原體檢測試劑盒
      該試劑盒包括七聯(lián)檢試劑板,樣品抽提液,樣品管,棉簽和樣品管架。
      [0023]其中樣品抽提液為磷酸緩沖液,其濃度是ΙΟηΜ,并含有質(zhì)量分數(shù)1%的表面活性劑TritonX-1OO0
      [0024]樣品管為普通樣品管即可,無特殊要求。
      [0025]棉簽用于輔助樣本的采集,適用于鼻腔取樣。
      [0026]樣品管架用于支撐樣品管,便于操作。
      [0027]七聯(lián)檢試劑板如圖1所示,包括試劑板I,試劑板2,試劑板3和連接板4 ;三個試劑板結(jié)構(gòu)相同,均一端與連接板4相連。
      [0028]每個單一試劑板包括卡板和試劑條。
      [0029]其中卡板包括上下兩塊,兩塊卡板合在一起形成試劑板的外殼,試劑條位于兩塊卡板中間的空腔內(nèi)。
      [0030]卡板的一端設(shè)有連接部31,連接部31與連接板4可拆卸連接。本實施例中,卡板的連接部31為一凹槽,所述凹槽設(shè)置在卡板一端的側(cè)表面上。凹槽的開口寬度小于凹槽底部寬度,可以保證卡板與連接板4穩(wěn)固連接,而不會輕易脫離。
      [0031]連接板4設(shè)有與凹槽相匹配的凸起,凸起長度為單個凹槽長度的三倍。通過凹槽與凸起的配合,實現(xiàn)卡板和連接板4的可拆卸連接。
      [0032]為了便于握持,連接板4上表面開設(shè)多個握持槽41。
      [0033]卡板的上表面設(shè)有加樣孔12和檢測窗口 13。
      [0034]其中加樣孔12對應(yīng)試紙條的加樣位置,檢測窗口 13對應(yīng)試紙條的檢測位置。
      [0035]試劑條為免疫層析試紙條,包括PVC板,層析膜,樣品墊,結(jié)合墊和吸水材料。
      [0036]吸水材料位于層析膜樣品流動方向的末端,確保產(chǎn)品能夠順利快速的通過層析膜。
      [0037]結(jié)合墊為玻璃纖維,每個試劑板的結(jié)合墊上面固定有兩種或者三種熒光標記的呼吸道病原體單克隆抗體。
      [0038]層析膜為硝酸纖維素膜,層析膜上包含檢測線T和質(zhì)控線C,檢測線T和質(zhì)控線C均位于卡板的檢測窗口內(nèi),其中每個試劑板T線位置固定有一種與結(jié)合墊上熒光標記的病毒抗體相對應(yīng)的另一個病毒單克隆抗體,C線位置固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體。
      [0039]具體的,本試劑盒可以檢測的病毒分別為:人流感病毒A (FluA),人流感病毒B (FluB),腺病毒(ADV),呼吸道合胞病毒(RSV),人副流感病毒(HPIV1),人副流感病毒(即1¥2),人副流感病毒(即1¥3)。
      [0040]試劑板I中的試劑條上的結(jié)合墊固定有焚光標記的甲型流感(FluA)單克隆抗體和熒光標記乙型流感(FluB)單克隆抗體。層析膜上包含有質(zhì)控C線,檢測Tl線和檢測T2線,質(zhì)控線和檢測線均位于卡板的檢測窗口內(nèi)。C線固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體。Tl線含有另一個FluA抗體,T2線含有另一個FluB抗體。
      [0041]試劑板2的試劑條上的結(jié)合墊固定有熒光標記的腺病毒(ADV)單克隆抗體和熒光標記合胞病毒(RSV)單克隆抗體。層
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