游離甲狀腺素的免疫分析試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)療檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種游離甲狀腺素的免疫分析試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 甲狀腺腫大是我們較為多見(jiàn)的疾病，是患者體內(nèi)缺少碘元素影響了甲狀腺激素， 從而患有的疾病，甲狀腺腫大給患者帶來(lái)的不僅僅是身體上的痛苦，還會(huì)有形象上的影響， 病情嚴(yán)重時(shí)還會(huì)引起一些并發(fā)癥的出現(xiàn)，給患者帶來(lái)全面性的傷害甲狀腺是人體內(nèi)最大的 內(nèi)分泌腺，成人平均生理重量約為20_25g。甲狀腺內(nèi)含有許多大小不等的圓形或橢圓形腺 泡。腺泡是由單層的上皮細(xì)胞圍成，腺泡腔內(nèi)充滿(mǎn)膠質(zhì)。膠質(zhì)是腺泡上皮細(xì)胞的分泌物，主 要成分為甲狀腺球蛋白。腺泡上皮細(xì)胞是甲狀腺激素的合成與釋放的部位，而腺泡腔的膠 質(zhì)是激素的貯存庫(kù)。甲狀腺激素影響所有組織的成熟、生長(zhǎng)、代謝活動(dòng)和功能，是很重要的 激素。
[0003] 甲狀腺患者的檢查項(xiàng)目很多，常見(jiàn)的有血清總T3(TT3)、血清總T4(TT4)、血清游 離T3(FT3)、血清游離T4(FT4)、血清促甲狀腺素（TSH)、促甲狀腺素釋放素（TRH)、促甲狀腺 素受體抗體、促甲狀腺刺激性抗體等，其他諸如基礎(chǔ)代謝、血清膽固醇、超聲波等因?yàn)橐妆?干擾或化驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)而漸漸很少使用了。
[0004] 甲狀腺素，又稱(chēng)四碘甲腺原氨酸（thyroxine，T4)，分子量大小為776. 93。甲狀腺 素經(jīng)甲狀腺分泌釋放進(jìn)人血液循環(huán)后，立即與血漿中甲狀腺素結(jié)合球蛋白結(jié)合，處于結(jié)合 態(tài)的激素失去活性，僅少量處于游離狀態(tài)而發(fā)揮生理作用。在正常的生理狀況下，血液循環(huán) 中的了4有99.97%與蛋白結(jié)合 ；游離甲狀腺素（打66也7仰1丨1^^了4)只占0.03%。在結(jié)合 型的T4中，有60%與甲狀腺素結(jié)合球蛋白（thyroxine binding globulin，TBG)結(jié)合，30% 與甲狀腺結(jié)合清前白蛋白（thyroidbindingpreallbumin，TBPA)結(jié)合，另有9.97%與清蛋 白（albumin，Alb)結(jié)合。血清游離甲狀腺素 FT4的生理濃度，不受機(jī)體甲狀腺結(jié)合球蛋白 濃度的影響，無(wú)論是生理性的的增加，還是病理性的減少，對(duì)FT4的生理濃度均無(wú)影響。FT4 可作為下丘腦-垂體-甲狀腺軸疾病可疑患者的篩選指標(biāo)之一，測(cè)定血清FT4對(duì)診斷甲狀 腺功能性疾病，具有重要的臨床價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一方面是提供一種游離甲狀腺素的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒， 其由以下組分組成：
[0006] 1)游離甲狀腺素 （free thyroxine, FT4)系列校準(zhǔn)品；
[0007] 2)抗異硫氰酸焚光素（fluoresceinisothiocyanate, FITC)單克隆抗體包被的磁 微粒溶液；
[0008] 3)異硫氰酸熒光素標(biāo)記的游離甲狀腺素抗體溶液；
[0009] 4)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的游離甲狀腺素溶液；
[0010] 5)化學(xué)發(fā)光底物液；
[0011] 6)濃縮洗滌液。
[0012] 所述試劑盒還包括反應(yīng)管；所述試劑盒中反應(yīng)管的材料為透明聚苯乙烯、聚乙烯、 聚丙烯或玻璃。所述游離甲狀腺素抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。
[0013] 所述化學(xué)發(fā)光底物液包含A液和B液，其中，A液為0· 1Μ、ρΗ值為8. 5的Tris-HCl 緩沖液，且該緩沖液中含有終濃度為5. Omg/mL的魯米諾或異魯米諾和終濃度為0. 2mg/mL 的對(duì)碘苯酚；B液是0.1 M pH值為4. 5的檸檬酸緩沖液，且該緩沖液中含有終濃度為IOOmg/ mL的過(guò)氧化氫。
[0014] 所述濃縮洗滌液為15mmol/L、pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，且該緩沖液中含有體 積百分比濃度為〇. 02%的吐溫20。
[0015] 所述抗異硫氰酸熒光素單克隆抗體包被的磁微粒溶液組分為：8mg/mL的抗異 硫氰酸熒光素單克隆抗體包被的磁微粒，溶于含〇. 〇5g/mL酪蛋白和0. 2g/mL PEG200的 15mmol/L磷酸鹽緩沖液；pH值為8. 0。所述抗異硫氰酸熒光素單克隆抗體的制備參見(jiàn)專(zhuān)利 CN200910091849公開(kāi)的內(nèi)容，當(dāng)然也可按照本領(lǐng)域常規(guī)戊二醛方法進(jìn)行制備。
[0016] 所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的游離甲狀腺素抗體溶液的組分為：含0. 3 μ mol/mL的 異硫氰酸焚光素標(biāo)記的游離甲狀腺素抗體，〇. 〇5g/mL酪蛋白和0. 2g/mL PEG200的15mmol/ L磷酸鹽緩沖液；pH值為8.0。所述游離甲狀腺素抗體為單克隆抗體，標(biāo)記方法可通過(guò)本領(lǐng) 域已知方法進(jìn)行制備，例如，按照CN200910091849公開(kāi)的內(nèi)容進(jìn)行制備。
[0017] 所述辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的游離甲狀腺素溶液的組分為：含1 μ g/ml的辣根過(guò)氧 化物酶標(biāo)記的游離甲狀腺素，含〇. 〇5g/mL酪蛋白和0. 2g/mL PEG200的15mmo 1/L磷酸鹽緩 沖液。
[0018] 所述游離甲狀腺素系列校準(zhǔn)品為將FT4標(biāo)準(zhǔn)品溶于含0. 05g/mL酪蛋白和0. 2g/ mL鹿糖的15mmol/L磷酸鹽緩沖液；pH值為8. 0, FT4濃度依次為Opmol/L，I. 59pmol/L， 3. 45pmol/L，15. 6pmol/L，37. 5pmol/L，122pmol/L 的 6 瓶 FT4 校準(zhǔn)品。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面將進(jìn)一步的來(lái)舉例說(shuō)明本發(fā)明。需要指出的是，以下說(shuō)明僅僅是對(duì)本發(fā)明要 求保護(hù)的技術(shù)方案的舉例說(shuō)明，并非對(duì)這些技術(shù)方案的任何限制。本發(fā)明的保護(hù)范圍以所 附權(quán)利要求書(shū)記載的內(nèi)容為準(zhǔn)。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] 1)游離甲狀腺素 （free thyroxine, FT4)系列校準(zhǔn)品；
[0022] FT4標(biāo)準(zhǔn)品溶于含0. 05g/mL酪蛋白和0. 2g/mL鹿糖的15mmol/L磷酸鹽緩沖液； pH 值為 8. 0，F(xiàn)T4 濃度依次為 0pmol/L，I. 59pmol/L，3. 45pmol/L，15. 6pmol/L，37. 5pmol/L， 122pmol/L 的 6 瓶 FT4 校準(zhǔn)品，I. 5mL/ 瓶。
[0023] 2)抗異硫氰酸焚光素（fluoresceinisothiocyanate, FITC)單克隆抗體包被的磁 微粒溶液；
[0024] 抗異硫氰酸熒光素單克隆抗體包被的磁微粒溶液組分為：8mg/mL的抗異硫氰酸 熒光素單克隆抗體包被的磁微粒，溶于含〇. 〇5g/mL酪蛋白和0. 2g/mL PEG200的15mmol/L 磷酸鹽緩沖液；pH值為8. 0 ;6mL/瓶。
[0025] 3)異硫氰酸熒光素標(biāo)記的游離甲狀腺素抗體溶液；
[0026] 所述異硫氰酸熒光素標(biāo)記的游離甲狀腺素抗體溶液的組分為：含0. 3 μ mol/mL的 異硫氰酸焚光素標(biāo)記的游離甲狀腺素抗體，〇. 〇5g/mL酪蛋白和0. 2g/mL PEG200的15mmol/ L磷酸鹽緩沖液；pH值為8.0。游離甲狀腺素抗體為單克隆抗體（購(gòu)自天健生物制藥（天 津）有限公司）
[0027] 4)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的游離甲狀腺素溶液；
[0028] 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的游離甲狀腺素溶液的組分為：含1 μ g/ml的辣根過(guò)氧化物 酶標(biāo)記的游離甲狀腺素，含0. 05g/mL酪蛋白和0. 2g/mL PEG200的15mmol/L磷酸鹽緩沖液； 3mL/ 瓶。
[0029] 5)化學(xué)發(fā)光底物液；
[0030] 化學(xué)發(fā)光底物液包含A液和B液，其中，A液為0. 1M、pH值為8. 5的Tris-HCl緩 沖液，且該緩沖液中含有終濃度為5. Omg/mL的魯米諾或異魯米諾和終濃度為0. 2mg/mL的 對(duì)碘苯酚；B液是0.1 M pH值為4. 5的檸檬酸緩沖液，且該緩沖液中含有終濃度為100mg/mL 的過(guò)氧化氫。A液，12mL/瓶；B液12mL/瓶
[0031] 6)濃縮洗滌液。
[0032] 所述濃縮洗滌液為15mmol/L、pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，且該緩沖液中含有體 積百分比濃度為〇. 02%的吐溫20。6mL/瓶，使用時(shí)用新鮮制備的去離子水稀釋20倍；
[0033] 試劑盒還包括反應(yīng)管；所述試劑盒中反應(yīng)管的材料為透明聚苯乙烯。
[0034] 實(shí)施例2試劑盒靈敏度測(cè)定
[0035] 分別配制FT4標(biāo)準(zhǔn)品不同濃度的PBS緩沖液，濃度分別為0· lpmol/L，0· 25pmol