用于確定雙療法藥物的改性效力程度的方法
【專利說明】
[0001] 本申請要求2013年3月18日提交的俄羅斯專利申請No. 2013111961的優(yōu)先權， 以引用的方式將其整體全部并入本文。
技術領域
[0002] 本發(fā)明涉及藥物、特別是制藥領域。本發(fā)明用于確定藥物、特別是雙療法 (biphatic)藥物的改性效力，所述雙療法藥物的至少一種組分以可靠和可重復的方式根據 順勢療法技術制備。
【背景技術】
[0003] 活性強化形式
[0004] 根據順勢療法技術制備的藥物包括通過在載體（水或水-醇溶劑）中的多次連 續(xù)稀釋（由此降低濃度）以及對各連續(xù)稀釋液進行的振蕩由順勢療法強化（也稱為活化） 制備的藥物，參見例如RU 2191601 C1;RU 2192888 C1;RU 2332236 C1(英文版為EP 2 123 300);以及RU 2438707 C 2 (U.S.專利公開2011/0008452)。通過順勢療法強化獲 得的制劑為含有低劑量或極低劑量的初始藥物的藥物；稀釋可進行至每分子處于分子形式 的初始藥物約為或超過1摩爾載體，需要注意的是，每摩爾的分子總數由阿伏伽德羅常數 (6.(^SXloMmol 1)給出。術語分子形式在下文中進一步定義。在固體的上下文中，稀釋指 的是磨碎。通過順勢療法技術，載體可獲得改性效力，當通過所述活性強化形式處理時，顯 示出改變起始物質的物理、化學和/或生物性質的能力（RU 2161955 C1)。
[0005] 術語"分子形式"用于表示特定化學物質的一個或多個分子。因此，阿司匹林的分 子形式可為單個分子的乙酰水楊酸；處于分子形式的1摩爾阿司匹林由6. 022X 1023個乙酰 水楊酸分子組成，重180. 157克。
[0006] 術語"活性強化形式"用于表示含有物質的分子形式的初始溶液的順勢療法強化 產物。換句話說，根據順勢療法技術，使含有物質的分子形式（例如特定的抗體或有機分 子）的溶液接受連續(xù)重復稀釋并對每次獲得的溶液進行多次豎直振蕩。優(yōu)選的稀釋劑（通 常稱為載體）為水或水-乙醇混合物。初始載體中的優(yōu)選的分子形式的濃度為約〇. 5mg/ml 至約5. Omg/ml。可通過順勢療法強化由初始溶液制備活性強化形式，優(yōu)選通過1份各在先 溶液的連續(xù)稀釋而成比例降低濃度的方法。因此，將1份初始溶液與99份載體混合（百倍 稀釋），并使之接受外部作用。優(yōu)選外部作用涉及每次稀釋時的多次豎直振蕩（稀釋增效 法，dynamization)。這使得制得第1百倍稀釋液（表示為C1)。通過將1份的第1百倍稀 釋液C1與99份載體混合，制備第2百倍稀釋液（C2)。將這一過程另外重復10次，從而制 備第12百倍稀釋液C12。通常將單獨的容器用于后續(xù)各次稀釋，直至所需的稀釋系數。以 相應的稀釋系數實施類似程序，從而獲得例如C30、C50和C200稀釋液。這一方法在順勢療 法領域中被廣泛接受。參見例如 V.Schwabe，"Homeopathic medicines"，M.，1967,第 14-29 頁，以引用的方式將其并入本文用于所述目的。C12、C30和C200表示抗體的初級基質溶液 (原始羾劑，mother tincture)分別被稀釋10012、1003°和100 2°°倍的稀釋液。
[0007] 優(yōu)選的活性強化形式通常為相同分子形式的多種百倍稀釋液的混合物。例如， C12、C30和C50稀釋液的混合物，或者C12、C30和C200稀釋液的混合物。當使用組合物的 各組分的多種順勢療法稀釋液（例如C12、C30、C50和C200)的混合物時，所述稀釋液根據 上述過程分別制備直至獲得倒數第二份稀釋液（例如，分別直至C11、C29和C199)，然后根 據混合物組成將1份的各組分加入一個容器中，并與所需量的載體（如，用97份以進行百 倍稀釋）進行混合。
[0008] 順勢療法強化的實例在US專利號7, 572, 441和7, 582, 294中描述，以引用的方式 將其整體并入本文用于所述目的。術語"活性強化形式"和術語"極低劑量"彼此完全支持 并基本上同義。
[0009] 順勢療法的雙療法（bipathy)
[0010] US專利號8, 178, 498描述了雙療法藥物形式的概念。雙療法藥物制劑將治療劑量 藥物物質的治療價值同與該藥物物質化學上同源質但在對機體的作用機制方面不同的活 性強化制劑的治療價值進行組合。換言之，所述雙療法藥物制劑將約處于標準濃度的藥物 物質的分子形式同衍生自相同分子形式、但其分子形式以極低濃度存在（如果有的話）的 活性強化形式進行組合。組合或者幾乎同時給予的標準劑量和活性強化形式顯示出促進生 物活性并在"全身性適應"方面誘導積極的形態(tài)和功能改變，從而擔負起活性藥物物質的增 高的治療效果以及患者個體反應的降低的風險和不期望的不利副作用或后遺癥。
[0011] 此外，根據US專利號8, 178, 498,處于治療劑量的藥物物質和活性強化形式的"雙 療法"的同時給予：（1)允許更低的物質常規(guī)劑量；(2)預防由酶"誘導"引起的習慣化；以 及（3)預防歸因于負能量中和作用的藥物過量以及對一些器官和整個機體的刺激作用。US 專利號8, 178, 498以引用的方式整體并入本文用于所述目的。
[0012] 藥物的定性和/或定量評價
[0013] 本領域已知用于確定物質的生物活性的方法（例如RU 2181890 C1)?；钚砸晕?質添加之前和之后對測試樣品的酶促應答率之比表示。在體外確定"樣品中的最佳物質濃 度"。然而，該方法不適于確定根據順勢療法技術制備的藥物的效力。
[0014] 本領域已知通過在恒定磁場的存在下向活化藥物施加線性的偏振相干光學輻射， 從而確定順勢療法藥物的效力。利用來自測試介質不同點的光學偏差模式中的偏振成分強 度的時間相關積累值來測量經散射的透射。進行分析以計算透過強度的極低波動的頻譜， 并將數據與標準樣本進行比較。參見例如RU 2112976 C1。
[0015] 另外已知的是，用于定性測定順勢療法藥物或活性強化形式的方法。該方法包 括對具有標準樣本的測試介質進行處理，并記錄物理和化學參數的改變。使用其結構和 /或組成與已確定的順勢療法藥物或強化物質形式以及這些已知物質的抗體的結構和/ 或組成大體相似或相似的一組已知物質。識別順勢療法藥物或強化物質形式應基于已知 的物質，當將順勢療法藥物或強化物質形式引入反應介質中時，所述已知的物質與合適的 抗體反應并伴有改變，利用基于抗原-抗體反應的免疫化學分析方法記錄這些改變（RU 2195648 C2)。
[0016] 然而，現有技術方法并未提供與活性強化形式有關的藥物特性和效力的可靠且可 重復的定性和定量測定。這包括根據上述順勢療法技術制備的活化藥物。

【發(fā)明內容】

[0017] 確定物質的活性強化形式的活性的方法，所述方法包括：提供物質的活性強化形 式；確保在所述活性強化形式中不含物質的分子形式；提供所述物質的分子形式；利用合 適的分析方法對所述物質的所述分子形式的至少一種物理、化學或生物參數（A)進行測 量；用所述物質的所述活性強化形式對所述物質的所述分子形式進行處理；以及利用所述 分析方法對所述經處理的所述物質的分子形式的至少一種物理、化學或生物參數（A M)進行 測量，其中，所述物質的所述活性強化形式的所述活性為A與AM之間的差異程度。
[0018] 如上所述的方法進一步包括根據式X = C(A_AM)/A，以相對單位（X)表示所述物質 的所述活性強化形式的所述活性。
[0019] 上述方法進一步包括：i)用所述第一物質的活性強化形式對不同物質的分子形 式進行處理；ii)用所述分析方法對所述不同物質的所述分子形式的至少一種物理、化學 或生物參數（B)進行測量；iii)利用所述分析方法對所述經處理的所述不同物質的分子形 式的至少一種物理、化學或生物參數（B M)進行測量，從而確定所述方法的特異性，其中，當 對于A-Am而言所述至少一種物理、化學或生物參數以統(tǒng)計學上顯著的方式改變而對于B-Bm 而言不以統(tǒng)計學上顯著的方式改變時，認為所述方法是特異的。
[0020] 如上所述的方法，其中，所述分析方法為高效液相色譜。
[0021] 如上所述的方法，其中，所述分析方法為免疫測定（immunoferment)分析。
[0022] 如上所述的方法，其中，所述分析方法為核磁共振。
[0023] 如上所述的方法，其中，所述確保不含物質的分子形式的步驟包括移出所述物質 的分子形式。
[0024] 如上所述的方法，其中，所述物質為抗體。
[0025] 如上所述的方法，其中，所述抗體為多克隆抗體。
[0026] 如上所述的方法，其中，所述物質為有機小分子。
[0027] 如上所述的方法，其中，所述活性強化形式是液體。
[0028] 如上所述的方法，其中，所述活性強化形式被浸漬至固態(tài)載體上。
【附圖說明】
[0029] 圖1示出Ab抗IFN- y +AC以及Ab抗IFN- y +純水的NMR譜的疊加圖。
【具體實施方式】
[0030] 參考所附的權利要求書對本發(fā)明進行限定。關于權利要求書，相關定義已在上文 中提供，另外的定義在此提供。
[0031] 本文使用的術語"抗體"意味著特異性地結合至另一分子的特定空間和極性結構、 并因此被定義為與另一分子的特定空間和極性結構互補的免疫球蛋白。權利要求書中所列 舉的抗體可包括完整的免疫球蛋白或其片段，可為天然抗體、多克隆抗體或單克隆抗體，并 可包括多個類及同種型，例如184、18〇、18￡、1861、1862 &、186213和1863、1811等。免疫球蛋 白的片段可包括Fab、Fv和F(ab'） 2以及Fab'等。單數"抗體（antibody)"包括復數"抗 體（antibodies)"。
[0032] 術語"活性強化形式"或"強化形式"用于表示含有物質（例如抗體）的分子形式的 任何初始溶液的順勢療法強化產物。順勢療法強化的抗體的實例在美國專利號7, 572, 441 和7, 582, 294中描述，以引用的方式將其整體并入本文中并用于所述目的。當存在三個因 素時，抗體處于"活性強化"或"強化"形式。首先，抗體的"活性強化"形式為順勢療法領域 廣泛接受的制備過程的產物。其次，抗體的"活性強化"形式必須具備通過現代藥學廣泛接 受的方法確定的生物活性。第三，抗體的"活性強化"形式所表現出的生物活性不能由順勢 療法過程終產物中的抗體的分子形式的存在加以解釋。
[0033] 關于用順勢療法對人類受試者進行治療已有許多爭議。雖然本發(fā)明依靠已接受的 順勢療法過程來獲得物質的"活性強化"形式（即分子形式），但是其并不僅僅依賴于在人 類受試者中進行順勢療法來證明其活性。特別是對于由抗體構成的分子形式而言，本申請 的發(fā)明人出乎預料地發(fā)現、并在已接受的藥理學模型中充分證明，由起始的抗體的分子形 式進行連續(xù)多次稀釋而最終得到的溶劑具有明確的活性，且與痕量的抗體的分子形式在目 標稀釋液中的存在無關。另外，所述的抗體的"活性強化"形式僅涵蓋溶液或固體制劑，所 述溶液或固體制劑的生物活性不能由初始、起始溶液中余留的抗體的分子形式的存在進行 解釋。換句話說，雖然抗體的"活性強化"形式可包含痕量的初始的抗體的分子形式也在考 慮之列，但是由于連續(xù)稀釋后余留的抗體的分子形式的濃度極低，因此本領域技術人員不 能以任何程度的合理性將在已接受的藥理學模型中觀察到的生物活性歸因于余留的抗體 的分子形式。雖然本發(fā)明并不受任何具體理論的限制，但是本發(fā)明的抗體的"活性強化"形 式的生物活性并不歸因于初始的抗體的分子形式。優(yōu)選所述抗體的"活性強化"形式處于 液體形式或固體形式，其中，抗體的分子形式的濃度低于所接受的分析技術（如毛細管電 泳和高效液相色譜）的檢測限。特別優(yōu)選抗體的"活性強化"形式處于液體形式或固體形 式，其中，抗體的分子形式的濃度低于阿伏伽德羅常數（即，1分子的分子形式/6. 022X1023 分子載體）。
[0034] 本發(fā)明的藥物組合物擴展了可用于治療和預防感染性疾病（包括細菌感染以及 急性和慢性病毒感染）的制劑庫。
[0035] 根據本發(fā)明這一方面的復合藥物組合物可處于液體形式或固體形式。制備本發(fā)明 所述的復合藥物的活性強化組分的優(yōu)選程序為：使用抗體初級基質溶液分別被稀釋1〇〇 12、 1003°和100 5°倍的3種水性-醇稀釋液的混合物，相當于百倍順勢療法稀釋液C12、C30和 C50 ;或者使用抗體初級基質溶液分別被稀釋10012、1003°和100 2°°倍的3種水性-醇稀釋液 的混合物，相