從而 給出結(jié)合信號。生物和其它方法可適用于實現(xiàn)所述的方法。參見例如Zolotov，Yu. A.(編 著），Basics of analytical chemistry(兩卷），大學(xué)教材，第 3版（2004) ;Vasilyev， V. P. , Analytical chemistry (1989) ；0tto, M. , Up-to-date methods of analytical chemistry(2003) 〇
[0056] 使用分析方法的組合來檢測所述活性強化載體中的起始物質(zhì)分子，并在與所述活 性強化載體相互作用之前和之后，利用分析方法對起始物質(zhì)的至少一種特征參數(shù)進(jìn)行測 量，我們證明（證實）了 ：首先，與載體相關(guān)的改性活性并不能由起始物質(zhì)分子的存在加以 解釋，并且所述載體的物理、化學(xué)和/或生物性質(zhì)不同于起始物質(zhì)的物理、化學(xué)和/或生物 性質(zhì)；其次，通過使用起始物質(zhì)獲得活性強化載體，其中，通過起始物質(zhì)的技術(shù)處理過程中 使用的特定程序確?；钚詮娀问?，并且活性強化形式通過使用所述載體對起始物質(zhì)進(jìn)行 的多次連續(xù)的濃度降低而體現(xiàn)。最后，基于體外證據(jù)，證明使用所述活性強化載體制備的藥 物產(chǎn)物的可靠性和一致性。也就是說，以處于治療濃度的分子形式起始，活性強化形式通過 使用載體經(jīng)多次連續(xù)降低分子形式的濃度而制造。另外，在治療形式與活性強化形式相互 作用之前對治療形式的至少一種特征參數(shù)進(jìn)行的所述分析測量以及在此類相互作用后進(jìn) 行的再次測量用來以無量綱相對活性單位（釋放活性）對與活性強化形式相關(guān)的改性效力 程度進(jìn)行定量。
[0057] 基于特征參數(shù)的定量改變，確定活性強化形式相關(guān)的改性效力程度，通過式（1) 以相對活性單位（釋放活性）表示：
[0058] X=C|A-Aj/A(1)
[0059] X為活性單位（AU)的數(shù)量；
[0060] C為無量綱的比例常數(shù)，它取決于用于測量反映起始物質(zhì)的初始物理、化學(xué)和/ 或生物性質(zhì)的特征參數(shù)的分析方法以及特征參數(shù)的值。具體而言，例如C = 10k，其中，k為 來自連續(xù)的1、2、3等的整數(shù)；
[0061] A為在起始物質(zhì)與所述活性強化形式（經(jīng)技術(shù)處理的載體）相互作用之前，起始物 質(zhì)的特征參數(shù)的值；
[0062] AM為在起始物質(zhì)與所述活性強化形式（經(jīng)技術(shù)處理的載體）相互作用之后，起始 物質(zhì)的相同特征參數(shù)的值。
[0063] 可使用定量和定性測定的不同方法實現(xiàn)所述方法，由此確保對極低物質(zhì)濃度進(jìn)行 的測試中的高的靈敏度和重復(fù)性，所述方法例如光譜，特別是質(zhì)譜、色譜質(zhì)譜（氣液色譜 (GLC))以及高效液相色譜（HPLC)，所述HPLC基于混合物組分在兩種不混溶的相之間的同 質(zhì)分布的差異引起的混合物的組分的分隔開。色譜中的一個相是固定相（吸附劑），而另 一相是流動相（洗脫劑）。高壓（上至400bar)和吸附劑填料（通常3-5 ym ;當(dāng)前上至 1. 8 ym)為HPLC的辨識特征。利用HPLC分析的定性測定是基于對色譜峰保留時間的評估。 定量測定基于峰面積的評估。
[0064] 用于實現(xiàn)所述方法的另一技術(shù)是核磁共振譜（NMR譜），NMR譜利用一些原子核的 磁性。NMR確定原子或含有原子的分子的物理和化學(xué)性質(zhì)。它依賴于當(dāng)將具有零自旋核 的物質(zhì)置于由核磁矩重取向而誘導(dǎo)的頻率v (所謂的NMR頻率）的外部磁場中時，由該物 質(zhì)產(chǎn)生共振吸收和發(fā)射電磁能的現(xiàn)象，其中，所謂的化學(xué)位移是特征參數(shù)。另外，所述技術(shù) 包括免疫酶測定（IEA)，使用壓電免疫傳感器，以壓電共振器的共振頻率的差別（Af)表 示壓電免疫傳感器的分析信號，所述差別產(chǎn)生自歸因于受體覆蓋層表面上的免疫復(fù)合物的 形成和破壞的受體覆蓋層重量的增加或減少。生物和其它方法也可適用于實現(xiàn)所述的方 法，參見例如 Zolotov，Yu. A.(編著），Basics of analytical chemistry (兩卷），大學(xué)教 材，第 3 版，revised and supplemented ：Vysshaya shkola Publisher (2004) ；Vasilyev, V. P. , Analytical chemistry (1989) ；Otto, M. , Up-to-date methods of analytical chemistry(2003) 〇
[0065] 此外，如果起始物質(zhì)的分子存在于改性溶劑中，可使用廣泛認(rèn)可的方法將其移 出。具體而言，例如可通過對改性溶劑進(jìn)行加熱實現(xiàn)蛋白變性并隨后通過過濾，移出 作為起始物質(zhì)的蛋白分子?；蛘撸墒褂妹擕}方法，其中，通過高濃度的堿金屬和堿土 金屬的中性鹽對蛋白進(jìn)行沉淀，隨后進(jìn)行過濾。其它可能的方法包括使用離子交換樹 脂去離子、電滲析；反向滲透；以及超濾（分子過濾），該超濾伴隨有或者不伴隨有通 過更大的孔進(jìn)行的初步過濾。作為本領(lǐng)域中發(fā)現(xiàn)的進(jìn)一步的實例，參見B. M. Steward， The production of high-purity water in the clinical laboratory, Laboratory Medicine，2000，V. 31 (11)，第 605-611 頁；J. Grimm，D. Bessarabov, R. Sanderson, Review of electro-assisted methods for water purification,Desalination, 1998,V. 115(3), 第 285-294 頁；I. A. Koznacheev 等，Water purification of organic infusions in a reverse flow filtration combustion reactor， International Journal of Heat and Mass Transfer，1998, 54,第 932-937 頁；Labconco Corporation，A Guide to Laboratory Water Purification, An Industry Service Publication。 http://bioresearchonline. com/doc. mvc/A-Guide-to-Laboratory-ffater Purification(b CTaBHTbnpaB HJibHyioc ctiJiKy)〇
[0066] 使用分析方法的組合來檢測所述活性強化載體中的起始物質(zhì)分子，并在與所述活 性強化載體相互作用之前和之后，利用分析方法對起始物質(zhì)的至少一種特征參數(shù)進(jìn)行測 量，我們證明（證實）了 ：首先，與載體相關(guān)的改性活性并不能由起始物質(zhì)分子的存在加以 解釋，并且載體的理化和/或生物性質(zhì)不同于起始物質(zhì)的理化和/或生物性質(zhì)；其次，通過 使用起始物質(zhì)獲得活性強化載體，其中，通過起始物質(zhì)的技術(shù)處理過程中使用的特定程序 實現(xiàn)活性強化形式（即，使用所述載體對起始物質(zhì)進(jìn)行的多次連續(xù)的濃度降低）。最后，基 于體外證據(jù)，證明使用所述活性強化載體制備的藥物產(chǎn)物的可靠性和一致性。
[0067]另外，在起始物質(zhì)與活性強化載體相互作用之前和之后對起始物質(zhì)的至少一種特 征參數(shù)進(jìn)行的所述分析測量用于對處于無量綱相對活性單位（釋放活性）的與載體相關(guān)的 改性效力程度進(jìn)行定量。
[0068] 為確定與載體相關(guān)的改性效力程度，實施如下的連續(xù)程序：
[0069] a.利用所述載體通過連續(xù)的濃度降低的多個步驟，制備在對起始物質(zhì)進(jìn)行技術(shù)加 工（處理）的過程中強化的具有改性活性的載體，其中，所述載體不含所述起始物質(zhì)的分子 形式；
[0070] b.對來自步驟a)的溶液中存在的物質(zhì)進(jìn)行特異性測試，所述測試包括：
[0071] i.用步驟a)中所述的載體對起始物質(zhì)的分子形式進(jìn)行處理，
[0072] ii.優(yōu)選用步驟a)中所述的載體對不同的物質(zhì)和/或溶劑的分子形式進(jìn)行處理，
[0073] iii.對所述起始物質(zhì)的分子形式（A)和段落b) i)所述的組合（AM)的至少一種理 化和/或生物特征參數(shù)進(jìn)行分析測量，其中，如果實現(xiàn)段落b) i)的所述特征參數(shù)的改變在 統(tǒng)計學(xué)上顯著（并且就段落b)ii)的實現(xiàn)而言統(tǒng)計學(xué)上不顯著），所述載體特異性地改變被 認(rèn)為針對起始物質(zhì)而言特異性的起始物質(zhì)的理化和/或生物性質(zhì)的作用-能力進(jìn)行改性；
[0074] c.使用方程式⑴以相對活性單位確定與載體相關(guān)的改性效力：
[0075] X=C|A-AM|/A⑴
[0076] X、C、A和AM如同在前文的定義，其中，C優(yōu)選等于100或1000。
[0077] 實施例
[0078] 現(xiàn)通過如下的實施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，本發(fā)明的范圍不以任何方式受限于所述 實施例。
[0079] 實施例中通用的縮略詞：
[0080] Ab-抗體
[0081] ELISA或IEA-固相酶免疫測定
[0082] 0D-光密度
[0083] IFN- y -干擾素-y
[0084] HPLC-高效液相色譜
[0085] AC-活性強化形式
[0086] PBS-磷酸鹽緩沖鹽水
[0087] APBS-根據(jù)順勢療法技術(shù)活化的磷酸鹽緩沖鹽水
[0088] IgG-免疫球蛋白G，包括抗干擾素y ( " IFN- y "）的抗體
[0089] A水一根據(jù)順勢療法技術(shù)活化的水
[0090] UV/Vis-紫外至可見光譜
[0091] 實施例1
[0092] 實施例1的目的在于確定兔Ab抗人IFN- Y的活性強化形式的改性效力程度。由 兔Ab抗人IFN- Y的母液開始，通過多次連續(xù)稀釋降低起始物質(zhì)的濃度，并伴有多次中間振 蕩，制備兔Ab抗人IFN-y的活性強化形式。稀釋劑（即，載體）為水-醇溶液。將分子形 式于100 12、1003°和100 5°份載體中進(jìn)行稀釋（即，順勢療法百倍稀釋液C12、C30和C50)。 為確定起始物質(zhì)（即，兔Ab抗人IFN- y )的物理、化學(xué)和/或生物性質(zhì)的改變，施用HPLC， 并使用物質(zhì)體積作為特征參數(shù)。
[0093] 使用HPLC，基于對峰面積的評估來進(jìn)行物質(zhì)定量測定。選取IgG+AC的混合物作為 測試樣品。使用如下混合物作為對照樣品：IgG+A水、IgG+水以及IgG+APBS。
[0094] 通過將IgG (50mg/ml)和AC (或者A水、APBS或水）以1:2 (v/v)的比例進(jìn)行混合， 制備測試樣品。利用乙酸纖維素膜（孔徑-0.45 ym)過濾器對所得到的溶液進(jìn)行過濾。
[0095] 用HPLC分離法以梯度模式進(jìn)行分析。將陰離子交換柱用作固定相；將兩相的混合 物（第1相-乙腈、第2相-磷酸氫鉀溶液和氯化鉀溶液）用作流動相。為檢測的目的，使 用UV-Vis檢測器；波長-280nm。
[0096] 在各分析之前和之后，對UV-Vis檢測器的基線進(jìn)行歸零設(shè)定和校準(zhǔn)。
[0097] 將制備的混合物轉(zhuǎn)移入小瓶中，并使用自動進(jìn)樣器將其引入色譜系統(tǒng)。各測試樣 品的分析時間約為23分鐘。
[0098] -旦完成分析，在類似于分析開始時的流動相梯度條件下以恒定流速進(jìn)行色譜柱 平衡。
[0099] 以色譜峰的形式記錄測試樣品發(fā)出的信號，所述色譜峰被認(rèn)為對應(yīng)于IgG的輕鏈 和重鏈。計算分光光度峰面積的第一最大值（Max-1，對應(yīng)于免疫球蛋白重鏈）和第二最大 值（Max-2,對應(yīng)于免疫球蛋白輕鏈）。該分析的結(jié)果在表1中示出。
[0100] 表1色譜峰面積的最大值
[0101]
[0102] 利用如下的方程式（1)計算改性效力程度：
[0103] X=C|A-AJ/A
[0104] 其中，C= 100,將方程式（1)用于IgG+AC樣品和IgG+水樣品，獲得如下結(jié)果：
[0105] (Max-1)A= 30270. 2 ；AM= 17207. 9 ；X=43. 2AU；
[0106] (M a x -2)A= 5577. 4 ;AM= 45860. 6 ; X = 722. 3AU。
[0107] 實驗顯示出，與對照相比，IFN-y的AC降低了IgG峰面積第一最大值（Max-1，對 應(yīng)于免疫球蛋白重鏈），并增加了IgG峰面積的第二最大值（Max-2,對應(yīng)于免疫球蛋白輕 鏈）。
[0108] 實施例1的結(jié)果支持了如下結(jié)論：
[0109] 1.由于用于制備C12、C30、C50順勢療法稀釋液的技術(shù)，包含這三種順勢療法稀釋 液混合物的活性強化形式先驗地不含有起始物質(zhì)的分子；
[0110] 2.通過活性強化形式處理的起