酒中二氧化硫的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，尤其涉及酒中二氧化硫的檢測(cè)方法，屬于檢測(cè)分析領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 在食品生產(chǎn)加工過(guò)程中，廠商常加入漂白劑等破壞食品的變色因子，保持食品免 于發(fā)生褐變，從而來(lái)保持食品的特有光澤及控制其組分。而在我國(guó)食品行業(yè)中，使用最大的 組分為二氧化硫及亞硫酸鹽，近年來(lái)，由于食品中亞硫酸鹽的超量使用及濫用的情況日益 嚴(yán)重，直接導(dǎo)致食品中二氧化硫含量明顯增加。另外，也有部分不法產(chǎn)家，在食品中直接添 加大量二氧化硫。
[0003] 二氧化硫殘留量是亞硫酸鹽在食品中存在的計(jì)量形式，亞硫酸鹽主要包括亞硫酸 鈉、亞硫酸氫鈉、低亞硫酸鈉（又名保險(xiǎn)粉）、焦亞硫酸鈉、焦亞硫酸鉀和硫磺燃燒生成的二 氧化硫等。這些物質(zhì)于食品中解離成具有強(qiáng)還原性的亞硫酸，起到漂白、脫色、防腐和抗氧 化作用。但亞硫酸鹽具有一定的毒性，可與蛋白質(zhì)的巰基進(jìn)行可逆反應(yīng)，刺激消化道黏膜， 出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹瀉等癥狀.攝入過(guò)量的亞硫酸鹽，會(huì)影響人體對(duì)鈣的吸收，并破壞B族維 生素，長(zhǎng)期攝入則會(huì)對(duì)肝臟造成損害。美國(guó)食品與藥物管理局（FDA)要求對(duì)亞硫酸鹽使用 量尚于l〇mg/kg的食品予以標(biāo)明。我國(guó)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)食品中的二氧化硫 及亞硫酸鹽等允許的殘留量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，但目前食品中二氧化硫及亞硫酸鹽等超標(biāo) 的現(xiàn)象仍較普遍。
[0004] 葡萄酒是以葡萄為原料的發(fā)酵酒，特別是干紅，因具有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，深受?chē)?guó)內(nèi) 消費(fèi)者的喜愛(ài)。葡萄酒的進(jìn)口量也逐年增加。在葡萄酒釀造過(guò)程中，亞硫酸鹽作為防腐劑被 廣泛應(yīng)用，由于目前并沒(méi)有找到更好的添加劑替代品，所以作為配料的一部分，葡萄酒中， 包括進(jìn)口葡萄酒都有不同含量水平的二氧化硫殘留。同樣，葡萄酒中的二氧化硫過(guò)高也會(huì) 對(duì)消費(fèi)者帶來(lái)危害。國(guó)家強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)GB15037-2006《葡萄酒》也制定了 250mg/L(以二氧 化硫計(jì)）的限量標(biāo)準(zhǔn)。
[0005] 亞硫酸鹽含量的檢測(cè)方法很多，常用的有：鹽酸副玫瑰苯胺比色法、蒸餾一碘量滴 定法、直接滴定法等。但是，比色法對(duì)于本身有紅色或玫瑰紅色的樣品（如紅葡萄酒），會(huì)產(chǎn) 生明顯干擾，且難以扣除；直接滴定法，也因葡萄酒的深紅色影響滴定終點(diǎn)的判斷而導(dǎo)致測(cè) 定結(jié)果的不準(zhǔn)確。所以，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T15038-2006《葡萄酒、果酒通用試驗(yàn)方法》規(guī)定了 蒸餾一碘量滴定法來(lái)測(cè)定葡萄酒中的亞硫酸鹽，但是該方法大約需蒸餾1個(gè)多小時(shí)，耗時(shí) 較長(zhǎng)，大批量檢測(cè)速度太慢。在大樣品量的情況下，例如口岸進(jìn)口葡萄酒檢測(cè)，該方法顯然 不能滿足快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種酒中二氧化硫的檢測(cè)方法，用于克服現(xiàn)有技術(shù)過(guò)程繁 瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、操作要求高等不足，建立一種葡萄酒中二氧化硫的快速檢測(cè)方法，方便、快 捷、準(zhǔn)確、尚效地完成匍甸酒中^?氧化硫含量檢測(cè)。
[0007] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
[0008] 酒中二氧化硫的檢測(cè)方法，其特征在于，樣品經(jīng)吸附劑凈化脫色后，通過(guò)鹽酸副玫 瑰苯胺比色法進(jìn)行含量檢測(cè)。
[0009] 優(yōu)選的，所述檢測(cè)方法包括如下步驟：
[0010] (1)二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：利用二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，加入甲醛緩沖吸收液 配置成二氧化硫含量為0-50μg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0011] (2)樣品脫色處理：準(zhǔn)確移取0. 2-0. 5ml的所述樣品，用水稀釋10-50倍，然后取 樣品稀釋液，經(jīng)吸附劑凈化脫色，取濾液并加入甲醛緩沖吸收液進(jìn)行穩(wěn)定，獲得樣品溶液；
[0012] (3)顯色反應(yīng)：向步驟（1)中制備好的系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液和步驟（2)中處理 好的樣品溶液中，分別加入氨磺酸鈉水溶液和氫氧化鈉水溶液，混勻，然后加入鹽酸副玫瑰 苯胺水溶液，在10-30°C下反應(yīng)5-40分鐘，獲得相應(yīng)的系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)顯色液和樣品顯 色液；
[0013] (4)檢測(cè)：步驟（3)中顯色反應(yīng)完成后，利用食品快速檢測(cè)儀在波長(zhǎng)577nm處對(duì)步 驟（3)獲得的系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)顯色液和樣品顯色液分別進(jìn)行吸光度測(cè)定，根據(jù)系列二氧 化硫標(biāo)準(zhǔn)顯色液的吸光度和濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)樣品顯色液的吸光度對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲 線計(jì)算得出樣品溶液中二氧化硫的含量。
[0014] 優(yōu)選的，所述系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液和所述樣品溶液的體積為5mL，所述氨 磺酸鈉水溶液和氫氧化鈉水溶液的加入量為5滴，所述鹽酸副玫瑰苯胺水溶液的加入量為 0. 5mL〇
[0015] 優(yōu)選的，所述的吸附劑為強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、碳納米管。
[0016] 優(yōu)選的，所述的吸附劑為強(qiáng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂、碳納米管等吸附材料所制成的固相 萃取小柱。
[0017] 優(yōu)選的，所述吸附劑為WatersMCX小柱或碳納米管。
[0018] 優(yōu)選的，所述甲醛緩沖吸收液的配置方法為：將體積濃度為36%~38%的甲醛水 溶液3-6mL、環(huán)己二胺四乙酸二鈉水溶液10-25mL、和含1. 5-2. 5g鄰苯二甲酸氫鉀的鄰苯二 甲酸氫鉀水溶液混合，再用水稀釋至l〇〇mL，得到甲醛緩沖吸收貯備液，然后再用水將甲醛 緩沖吸收貯備液稀釋10倍，即得到所述甲醛緩沖吸收液。
[0019] 優(yōu)選的，所述甲醛緩沖吸收液的配置使用的環(huán)己二胺四乙酸二鈉水溶液的濃度為 0.05mol/L〇
[0020] 優(yōu)選的，所述氨磺酸鈉水溶液的質(zhì)量濃度為4. 0-6.Og/L，所述氫氧化鈉水溶液的 濃度為 〇· 5-1. 5mol/L。
[0021] 優(yōu)選的，所述鹽酸副玫瑰苯胺水溶液的質(zhì)量濃度為0. 3-0. 6g/L，配置方法為：吸 取15-30mL質(zhì)量濃度為2.Og/L的副玫瑰苯胺貯備液于100mL容量瓶中，加25-35mL體積濃 度為85%的濃磷酸和8-16mL的12mol/L濃鹽酸，用水稀釋至標(biāo)線，搖勾，放置過(guò)夜后使用。
[0022] 優(yōu)選的，所述食品快速檢測(cè)儀為便攜式比色計(jì)或分光光度計(jì)。
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的酒中二氧化硫的檢測(cè)方法的優(yōu)勢(shì)在于：
[0024] 1.利用本方法實(shí)現(xiàn)了葡萄酒特別是深色葡萄酒中二氧化硫的快速檢測(cè)，與現(xiàn)有的 蒸餾法相比，可將檢測(cè)時(shí)間大大縮短?，F(xiàn)有技術(shù)中，采用蒸餾法檢測(cè)樣品時(shí)，需要對(duì)樣品進(jìn) 行蒸餾處理，以排除樣品中色素的干擾，單個(gè)樣品至少需要45分鐘，而單套裝置完成10個(gè) 樣品至少6小時(shí)；而本發(fā)明采用吸附劑對(duì)樣品進(jìn)行凈化脫色處理，單個(gè)樣品可在半小時(shí)內(nèi) 完成檢測(cè)，單套裝置可在1小時(shí)內(nèi)至少完成10個(gè)樣品的檢測(cè)；
[0025] 2.本法所用裝置為便攜式裝置，充電后無(wú)需交流電，可在實(shí)驗(yàn)室或現(xiàn)場(chǎng)完成檢測(cè)； 而蒸餾法需要復(fù)雜的玻璃蒸餾裝置，只能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成檢測(cè)。
[0026] 3.本法操作簡(jiǎn)單，且有商業(yè)化試劑盒出售，經(jīng)簡(jiǎn)單培訓(xùn)即可完成檢測(cè)，提高了檢測(cè) 效率；而蒸餾法操作需要加熱、蒸餾、相關(guān)試劑的配制等分析步驟，操作繁復(fù)，需要一定化學(xué) 分析水平的人員才可完成。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提出的酒中二氧化硫的檢測(cè)方法作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō) 明。根據(jù)下面說(shuō)明和權(quán)利要求書(shū)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征將更清楚。
[0028] 實(shí)施例1 :酒中二氧化硫的檢測(cè)方法
[0029] 實(shí)驗(yàn)所用試劑和樣品均為市購(gòu)商品。
[0030] 一種酒中二氧化硫的檢測(cè)方法，樣品經(jīng)吸附劑凈化脫色后，通過(guò)鹽酸副玫瑰苯胺 比色法進(jìn)行含量檢測(cè)。具體步驟包括：
[0031] (1)系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液配制：
[0032] a)二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液：配制濃度為10. 0μg/mL的二氧化硫標(biāo)液。用甲醛緩沖吸 收液將市售的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成每毫升含10. 〇μg二氧化硫的校準(zhǔn)溶液。此溶液用 于繪制校準(zhǔn)曲線，在4~5°C下冷藏，可穩(wěn)定1個(gè)月。
[0033] b)分別移取二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液 0mL，0. 5mL，1. 00mL，2. 00mL，3. 00mL，5.OOmL于 15mL刻度離心管中，用水定容至5.OmL，再在各管中分別加入0. 5mL甲醛緩沖吸收液。對(duì)應(yīng) 的二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中二氧化硫的含量范圍為0-50μg。
[0034] (2)樣品前處理：定量吸取葡萄酒樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑢?duì)于顏色較深的葡萄酒，利用吸 附劑對(duì)樣品進(jìn)行凈化脫色處理。
[0035] a)紅色或桃紅色等顏色較深的葡萄酒樣品前處理：
[0036] 按試樣中二氧化硫不同含量，準(zhǔn)確移取0. 2mL~0. 5mL試樣，用水稀釋至10.OmL。 準(zhǔn)確移取〇. 5mL樣品稀釋液（可根據(jù)初測(cè)濃度確定相應(yīng)的稀釋液取樣量，若初測(cè)濃度較 低，則應(yīng)加大取樣量），經(jīng)吸附劑進(jìn)行凈化脫色處理后，收集濾液至離心管中，用水定容至 5.OmL，再加入0. 5mL甲醛緩沖吸收液。
[0037] b)白色等淺色或無(wú)色葡萄酒樣品前處理：
[0038] 按試樣中二氧化硫不同含量，準(zhǔn)確移取0. 2mL~0. 5mL試樣，用水稀釋至10.OmL。 準(zhǔn)確移取〇. 5mL樣品稀釋液（可根據(jù)初測(cè)濃度確定相應(yīng)的稀釋液取樣量，若初測(cè)濃度較低， 則應(yīng)加大取樣量），用水定容至5.OmL，再加入0. 5mL甲醛緩沖吸收液。
[0039] (3)顯色反應(yīng)：對(duì)上述配置好的系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液和樣品進(jìn)行顯色反 應(yīng)，具體的顯色反應(yīng)步驟為：
[0040] 向上述系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液和樣品溶液中加入5滴氨磺酸鈉溶液和5 滴氫氧化鈉溶液，混勻，加入〇. 5mL鹽酸副玫瑰苯胺溶液（PRA溶液），在10-30 °C下反應(yīng) 5-40min〇
[0041] (4)檢測(cè)：顯色反應(yīng)完成后，對(duì)系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液和樣品溶液上機(jī)進(jìn)行 吸光度測(cè)定，根據(jù)如下步驟進(jìn)行操作：
[0042] a)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：利用食品快速檢測(cè)儀對(duì)系列二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液進(jìn)行檢測(cè)， 在波長(zhǎng)577nm處，用光纖探頭，以水為參比測(cè)量吸光度，以空白校正后各二氧化硫標(biāo)準(zhǔn)濃度 溶液管的吸光度為縱坐標(biāo)，以二氧化硫的含量（μg)為橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸 方程。
[0043] b)樣品中二氧化硫含量測(cè)定：利用食品快速檢測(cè)儀，在波長(zhǎng)577nm處，用光纖探 頭，以水為參比測(cè)量吸光度，測(cè)量以空白校正后樣品溶液的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線