水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)的二級質(zhì)譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)的二級質(zhì)譜檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雙酚類化合物是一類具有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)的精細化學(xué)品，一般是指一類具有兩個羥 苯基結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。根據(jù)羥苯基和碳橋上取代基不同又可分為不同的類似物。其中最常見的 有 TDP、雙酚 A (BPA)、雙酚 B (BPB)、雙酚 S (BPS)、雙酚 C (BPC)、雙酚 AF (BPAF)、TBA、PPDP。工 業(yè)上合成這類物質(zhì)主要通過酮和醛與芳環(huán)烴或其衍生物縮合而成。由于這類化合物化學(xué)性 質(zhì)穩(wěn)定、耐高溫、耐熱、具有很好的延展性，并且生產(chǎn)工藝簡單，成本低廉，因此被廣泛用于 工業(yè)生產(chǎn)中。然而，由于這類化合物結(jié)構(gòu)與雌二醇類似，對人體具有潛在的內(nèi)分泌干擾效應(yīng) 和毒效應(yīng)，并且不易降解，容易富集，對生態(tài)環(huán)境和人類健康均有潛在危害。其引發(fā)的一系 列問題均已引起廣泛關(guān)注。
[0003] 自上世紀(jì)90年代年，雙酚類物質(zhì)作為典型的內(nèi)分泌干擾物受到廣泛關(guān)注。歐美 等國對多原水及底泥中雙酚類物質(zhì)含量調(diào)查結(jié)果顯示，在原水及底泥中殘留著ng/L-μ g/L 濃度水平的雙酚類物質(zhì)。目前對于雙酚類物質(zhì)的檢測與監(jiān)控，關(guān)注食品樣品及生物樣品的 研究較多。在對水體基質(zhì)樣品的研究中，多見于關(guān)于污水廠進、出水及沉泥中的檢測，對原 水中該類物質(zhì)全面檢測的研究相對較少。
[0004] 這很大原因歸結(jié)為水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)痕量存在，易受水體基質(zhì)影響。因次，建立 回收率高、重現(xiàn)性好的水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)的分析方法，是進一步研究環(huán)境介質(zhì)中雙酚類 物質(zhì)移轉(zhuǎn)化的前提條件。
[0005] 水體基質(zhì)中雙酚類污染物含量較低，因此要求分析儀器具有良好的分離能力和 高靈敏度。目前，常用的檢測方法主要包括高效液相色譜法（HPLC)和超高壓液相色譜 (UPLC)，配紫外檢測器（UV)、熒光檢測器（FD)、質(zhì)譜（MS)或者串聯(lián)質(zhì)譜（MS-MS)等，氣相色 譜（GC)法及氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法也廣泛使用，另外還有酶聯(lián)免疫法（ELISA)、光譜分析 法等。然而，對于實際環(huán)境樣品，比如自然水體樣品，由于基質(zhì)干擾作用，使分析方法的準(zhǔn)確 性和精密性大大降低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的雙酚類污染物分析方法受自然水體基質(zhì)干擾，存 在準(zhǔn)確性和精密性低的問題，而提出一種水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)的二級質(zhì)譜檢測方法。
[0007] -種水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)的二級質(zhì)譜檢測方法，所述檢測方法通過以下步驟實 現(xiàn)：
[0008] 步驟一、雙酚類物質(zhì)的樣品提取過程：
[0009] 第一，取水環(huán)境中原水水樣放置于超聲清洗器中超聲處理，并調(diào)節(jié)pH值至4 ;
[0010] 第二，取HLB型固相萃取柱，利用自動固相萃取儀，依次以乙酸乙酯、甲醇、純水進 行活化；
[0011] 第三，再取酸化后水樣通過HLB型固相萃取進行固相萃取富集，完成上樣操作；
[0012] 第四，上樣操作完畢后，用淋洗液淋洗HLB型固相萃取柱以清除雜質(zhì)；再將淋洗后 的HLB型固相萃取柱在氮氣下干燥，之后用乙酸乙酯對HLB型固相萃取柱進行兩次洗脫操 作，并用平緩的氮氣流吹干洗脫液，再用甲醇重新溶解并定容，得到待凈化的甲醇溶液；
[0013] 步驟二、雙酚類物質(zhì)的樣品凈化過程：
[0014] 第一，將待凈化的甲醇溶液通過由甲醇活化的NH2固相萃取柱；
[0015] 第二，用洗脫液充分洗脫NH2固相萃取柱并收集洗脫液；合并收集的洗脫液，并用 平緩的氮氣流吹干洗脫液，再用甲醇與水的混合液重新溶解，得到待檢測樣品；
[0016] 步驟三、雙酚類物質(zhì)的樣品檢測過程：
[0017] 采用XEVO TQ串聯(lián)二級質(zhì)譜法的液相色譜，在全掃描模式下設(shè)定質(zhì)譜條件下對雙 酚類物質(zhì)進行雙酚類物質(zhì)的檢測；
[0018] 步驟四、利用內(nèi)標(biāo)法進行定量測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：
[0019] 利用分析天平稱量不同種類的雙酚類物質(zhì)，分別溶于色譜純甲醇內(nèi)，配置成系列 濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀進行分析，分別以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積 為縱坐標(biāo)進行回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0020] 步驟五、進行樣品中雙酚類物質(zhì)含量及雙酚類化合物回收率的測定：
[0021] 采集自然水體樣品，按步驟一對水樣中的雌激素結(jié)合體進行富集，再按步驟二進 行提取物的凈化，然后用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測，并與步驟四繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較， 并換算得到待測自然水體樣品中不同種類的雙酚類物質(zhì)的含量；
[0022] 采用同樣的水體樣品，按100ng/L的添加量加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，進行步驟一至步驟三 的預(yù)處理并測定不同雙酚類化合物的含量，同時根據(jù)式：
計算雙酚類化 合物的回收率；其中：
[0023] R表示回收率；
[0024] C表示添加標(biāo)準(zhǔn)溶液水體樣品的雙酚類物質(zhì)含量；
[0025] C。表示未添加標(biāo)準(zhǔn)溶液水體樣品的雙酚類物質(zhì)含量。
[0026] 本發(fā)明的有益效果為：
[0027] (1)本發(fā)明提取方法是在萃取前利用超聲波的振動勻化，使樣品介質(zhì)內(nèi)各點受到 的作用一致，使整個樣品萃取更均勻，操作時間節(jié)省至少一半、試劑用量節(jié)省一半，且提高 操作安全系數(shù)，有利于批量樣品的處理。
[0028] (2)本發(fā)明采用的固相萃取方法是通過降低樣品基質(zhì)的干擾，而將檢測靈敏度提 高5-7倍，因而具有萃取效率高、操作簡單、選擇性好、重現(xiàn)性好、消耗試劑少、無乳化現(xiàn)象、 使用范圍寬及易于實現(xiàn)自動化的優(yōu)點。
[0029] (3)UPLC-MS/MS二級質(zhì)譜方法，抗干擾能力強，監(jiān)測靈敏度略比高分辨質(zhì)譜低，但 是比較經(jīng)濟的檢測手段，且其定量限低于HPLC-MS/MS，其結(jié)果得到美國和歐盟的認可。
[0030] (4)本發(fā)明采用UPLC-MS/MS法來檢測水產(chǎn)品中的8種雙酚類，預(yù)處理方法簡單、節(jié) 約，氨基柱凈化效果好，并利用選擇全掃描檢測模式（MRM)來進行定性定量檢測，每種物質(zhì) 都其特定的一對或者幾對母離子和子離子進行檢測，可以有效地排除干擾物質(zhì)的干擾，因 此提高了檢測的靈敏度和定性定量的準(zhǔn)確度。
【附圖說明】
[0031] 圖1為本發(fā)明方法流程圖；
[0032] 圖2為本發(fā)明涉及的八種雙酚聯(lián)合洗脫總離子流圖；
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0033] 一：
[0034] 本實施方式的水環(huán)境中雙酚類物質(zhì)的二級質(zhì)譜檢測方法，所述檢測方法通過以下 步驟實現(xiàn)：
[0035] 步驟一、雙酚類物質(zhì)的樣品提取過程：
[0036] 第一，取水環(huán)境中原水水樣放置于超聲清洗器中超聲處理，并調(diào)節(jié)pH值至4 ;
[0037] 第二，取HLB型固相萃取柱，全稱為Waters Oasis HLB型的固相萃取柱，利用自動 固相萃取儀，依次以乙酸乙酯、甲醇、純水進行活化；
[0038] 第三，再取酸化后水樣通過HLB型固相萃取進行固相萃取富集，完成上樣操作；
[0039] 第四，上樣操作完畢后，用淋洗液淋洗HLB型固相萃取柱以清除雜質(zhì)；再將淋洗后 的HLB型固相萃取柱在高純氮氣下干燥，之后用乙酸乙酯對HLB型固相萃取柱進行兩次洗 脫操作，并用平緩的氮氣流吹干洗脫液，再用甲醇重新對洗脫、吹干操作后得到的溶質(zhì)進行 溶解并定容，實現(xiàn)乙酸乙酯到甲醇的溶劑置換操作，得到待凈化的甲醇溶液；
[0040] 步驟二、雙酚類物質(zhì)的樣品凈化過程：
[0041] 第一，將待凈化的甲醇溶液通過由甲醇活化的NH2固相萃取柱，即為氨基固相萃取 柱；
[0042] 第二，用洗脫液充分洗脫NH2固相萃取柱并收集洗脫液；合并收集的洗脫液，并用 平緩的氮氣流吹干洗脫液，再用甲醇與水的混合液重新溶解，得到待檢測樣品；
[0043] 步驟三、雙酚類物質(zhì)的樣品檢測過程：
[0044] 采用XEVO TQ串聯(lián)二級質(zhì)譜法的液相色譜，在全掃描模式下設(shè)定質(zhì)譜條件下對雙 酚類物質(zhì)進行雙酚類物質(zhì)的檢測；
[0045] 步驟四、利用內(nèi)標(biāo)法進行定量測量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：
[0046] 利用分析天平稱量不同種類的雙酚類物質(zhì)，分別溶于色譜純甲醇內(nèi)，配置成系列 濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀進行分析，分別以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積 為縱坐標(biāo)進行回歸，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于下一步測定樣品中雙酚類物質(zhì)的含量；
[0047] 步驟五、進行樣品中雙酚類物質(zhì)含量及雙酚類化合物回收率的測定：
[0048] 采集自然水體樣品，按步驟一對水樣中的雌激素結(jié)合體進行富集，再按步驟二進 行提取物的