肝損傷類型的檢查方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種肝損傷的檢查方法，詳細(xì)而言設(shè)及一種判斷肝損傷類型的檢查方 法。更詳細(xì)而言，本發(fā)明設(shè)及一種判斷肝損傷類型的檢查方法，其中測定從受試者采取的生 物學(xué)試樣中的LCA濃度，將測定的LCA濃度作為指標(biāo)。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟是附屬于消化道的腺組織，其具有膽汁的生成分泌、解毒作用、糖代謝、蛋白 質(zhì)代謝、血液凝固因子的生成、激素調(diào)節(jié)作用W及脂肪、糖原、蛋白質(zhì)和維生素等各種生體 構(gòu)成要素的儲(chǔ)存等對生體重要的多種功能。因此，運(yùn)些功能在受到病毒感染、藥物或毒物、 酒精的過量攝入等原因引起的急性的或慢性的損傷時(shí)，肝臟功能穩(wěn)態(tài)的保持被破壞，產(chǎn)生 重大的健康損傷。人體檢查等中發(fā)現(xiàn)的疾病中肝功能損傷占據(jù)的比例高，據(jù)說日本成人約 30 %具有肝功能損傷。
[0003] 肝疾病所包含的疾病，根據(jù)其原因或臨床癥候進(jìn)行分類。例如，根據(jù)其原因，能夠 分類為病毒性肝炎、藥劑性肝損傷、酒精性肝損傷、自身免疫性肝損傷、代謝損傷性肝損傷 等。另外，根據(jù)其臨床癥候不同，能夠分類為肝細(xì)胞損傷型和膽汁渺積型。肝細(xì)胞損傷見于 病毒性肝炎、中毒性肝損傷、脂肪肝、肝硬化等。肝細(xì)胞損傷因肝細(xì)胞的壞死、脂肪化、多核 細(xì)胞化、核的液泡變性化等而發(fā)生。肝細(xì)胞也稱為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，其是構(gòu)成肝臟的細(xì)胞之一， 占肝臟的絕大多數(shù)。肝細(xì)胞是分泌膽汁的外分泌細(xì)胞，同時(shí)也是將血漿蛋白分泌至頂膜側(cè)， 積累糖原調(diào)節(jié)血糖的內(nèi)分泌細(xì)胞。因此，肝細(xì)胞受到損傷時(shí)會(huì)引起肝功能的顯著的降低。膽 汁渺積是因來自肝臟的膽汁的排泄因某些原因受到阻礙而產(chǎn)生的，最終，導(dǎo)致肝內(nèi)或肝外 的膽道系統(tǒng)的一部分或整體上膽汁的流出變異常，在肝臟和血中膽汁滯留，引起黃痘或肝 炎等諸癥狀。
[0004] 現(xiàn)在，肝疾病的診斷和治療使用將患者的癥狀和血清生化學(xué)參數(shù)的值作為指標(biāo)， 醫(yī)師根據(jù)經(jīng)驗(yàn)診斷肝損傷類型開始治療的手法(非專利文獻(xiàn)1)。作為生化學(xué)參數(shù)，使用因肝 細(xì)胞損傷而從肝細(xì)胞釋放的酶，具體而言，谷草轉(zhuǎn)氨酶下簡寫為AST;也稱為谷氨酸-草 酷乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GOT))、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（W下簡寫為ALT;也稱為谷氨酸-丙酬酸轉(zhuǎn)氨酶(GPT))、 丫-谷氨酷轉(zhuǎn)膚酶下簡寫為丫-GTP)、堿性憐酸酶下簡寫為ALP)等。
[0005] 此外，通常在非臨床W及臨床上，進(jìn)行總膽汁酸（total bile acids下簡寫為 TBA)的測定。膽汁酸是在哺乳動(dòng)物的膽汁中廣泛發(fā)現(xiàn)的醬體衍生物中具有膽酸骨架的化合 物的總稱，是在脂肪的消化吸收發(fā)揮重要作用的膽汁的主要成分。膽汁酸由肝臟的肝細(xì)胞 通過膽固醇(化olesterol)代謝而生成（圖1)，在與甘氨酸或牛橫酸(氨基酸乙橫酸)等結(jié)合 后，作為膽汁被分泌。膽汁酸分為初級膽汁酸和次級膽汁酸。初級膽汁酸是由肝臟合成的膽 汁酸，能夠例示膽酸下有時(shí)簡寫為CA)、碟去氧膽酸下有時(shí)簡寫為CDCA)和與CDCA具 有異構(gòu)體關(guān)系的熊去氧膽酸下有時(shí)簡寫為UDCA)等。次級膽汁酸是初級膽汁酸經(jīng)由膽管 排出至腸管通過由腸內(nèi)細(xì)菌引起的脫徑化反應(yīng)、脫氨反應(yīng)、氨化反應(yīng)和去禪反應(yīng)而生成的 膽汁酸，能夠例示去氧膽酸下有時(shí)簡寫為DCA)或LCA等。運(yùn)些例示的5種膽汁酸成分，分 別W游離型、甘氨酸結(jié)合型、牛橫酸結(jié)合型運(yùn)3種類型存在。此外，在一部分膽汁酸成分中， 存在硫酸結(jié)合型或葡萄糖醒酸結(jié)合型。在包括人在內(nèi)的多個(gè)動(dòng)物種類中，作為初級膽汁酸， 生成在膽酸骨架的3、7、12位具有徑基的CA和CDCA。另一方面，部分動(dòng)物生成該品種特有的 膽汁酸。發(fā)現(xiàn)了小鼠體內(nèi)的α-鼠膽酸下有時(shí)簡寫為OMCA)或β-鼠膽酸下有時(shí)簡寫為0 MCA) W及豬體內(nèi)的豬膽酸下有時(shí)簡寫為HCA)等在人體內(nèi)非常少的各動(dòng)物品種特征性的 膽汁酸。aMCA和MCA是初級膽汁酸，已知其也是牛橫酸結(jié)合型。HCA是初級膽汁酸，在腸內(nèi)通 過其的7α-脫徑化生成豬去氧膽酸（W下皿CA)。運(yùn)些膽汁酸成分也存在甘氨酸結(jié)合型或牛 橫酸結(jié)合型。
[0006] 肝疾病的治療中為了選擇適用于肝損傷各類型的治療，其類型的判斷是重要的。 W往，W生化學(xué)參數(shù)為標(biāo)準(zhǔn)判斷肝損傷類型。例如，肝細(xì)胞損傷型中將ALT或AST的上升，膽 汁渺積型中將ALP或丫 -GTP的上升作為一個(gè)指標(biāo)，判定肝損傷類型。但是，在將生化學(xué)參數(shù) 作為標(biāo)準(zhǔn)的判定方法中，也存在錯(cuò)誤進(jìn)行肝損傷類型的判斷的情形。因此，測定構(gòu)成膽汁酸 的多個(gè)成分的血清中的各濃度，基于該結(jié)果判斷肝損傷類型，進(jìn)一步確定治療方針的嘗試 正在進(jìn)行。
[0007] 目前為止，報(bào)告了肝損傷原因不同的分類和膽汁酸成分濃度之間具有多種關(guān)系 (非專利文獻(xiàn)2~6)，但是并沒有得出一致的見解，沒有實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用。
[0008] 此外，也有一些關(guān)于肝損傷的臨床癥候不同的分類和膽汁酸成分濃度之間的關(guān)系 的報(bào)告(非專利文獻(xiàn)6~8)，但是與原因不同的分類同樣，得到多個(gè)結(jié)果，沒有得出一致的見 解。另一方面，提倡藥劑性肝損傷的臨床癥候不同的分類，不是利用膽汁酸成分而是利用生 化學(xué)參數(shù)的評價(jià)方法(非專利文獻(xiàn)9)，基于此日本肝臟學(xué)會(huì)也提倡藥物性肝損傷的評分(非 專利文獻(xiàn)10)。此外，本發(fā)明人等報(bào)告了將針對大鼠的藥劑給藥中產(chǎn)生的肝疾病與通過膽管 結(jié)扎處理或1-糞基硫代異氯酸醋(ANIT)給藥等制成的代表性的膽汁渺積模型進(jìn)行比較，通 過膽汁酸成分濃度的測定能夠判斷肝疾病損傷類型的可能性(非專利文獻(xiàn)11)。但是，在臨 床上，早期診斷毛細(xì)膽管水平的肝內(nèi)膽汁渺積的明確的生物標(biāo)記物到目前為止沒有報(bào)告， 治療方針的確定困難的情形仍不少。
[0009] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0010] 非專利文獻(xiàn)
[0011] 非專利文獻(xiàn)1:嚴(yán)重副作用疾病不同對應(yīng)手冊藥物性肝損傷：10-30(平成20年4月， 日本厚生勞動(dòng)?。?br>[0012] 非專利文獻(xiàn)2 : IA Bouchier , CR Pennington , Serumbi le acids in hepatobiliaiy disease.Gut.Jun;19(6):492-6(1978).
[0013] 非專利文獻(xiàn)3: Fischer，S，Beuers，U, Spengler，U, Zwiebel，F(xiàn)M，Koebe，H-G, Hepatic levels of bile acids in end-stage chroniccholestatic liver disease.Clinica Qiimica Acta.251(2):173-86(1993).
[0014] 非專利文獻(xiàn)4:Williams CN,Bile-acid metabolismand the liver.Clin Biochem.9(3):149-52(1976).
[0015] 非專利文獻(xiàn)5:Be;rr F,Pratschke E,Fischer S,化umga;rtner G.Disorders of bile acid metabolism in cholesterol gallstonedisease.J Clin Invest.90(3):859-68(1992).
[0016] 非專利文獻(xiàn)6:0st;row JD,Metabolism of bilesalts in cholestasis in humans.In:Tavoloni,N,Berk,PD(Eds),Hepatictransport and bile secretion.Raven, New York,pp.673-712(1993).
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[0019] 非專利文獻(xiàn)9:Danan G,Benichou C.Causalityassessment of adverse reactions to drugs-I.A novel method based on theconclusions of international consensus meetings :曰pplic曰tion to drug-inducedliver injuries.J Clin 化idemiol.46(11):1323-30(1993).
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[0021] 非專利文獻(xiàn)11:樹瀏紀(jì)子(Noriko MasubucM)等，日本藥物動(dòng)態(tài)學(xué)會(huì)第24次年會(huì)， 第 305 頁，第 2-P-43 號，2009年。
[0022] 非專利文獻(xiàn) 12:A.Stiehl,Bile Salt Sulphatesin 畑olestasis.European Journal of Clinical Investigation.4(1):59-63(1974).

【發(fā)明內(nèi)容】

[0023] 肝損傷根據(jù)臨床癥候不同能夠分類為肝細(xì)胞損傷型和膽汁渺積型，為了選擇適用 于各類型的治療盡管其類型的判斷是重要的，但是仍然沒有確立能夠判定運(yùn)些類型的技 術(shù)。因此，目前邊進(jìn)行治療邊通過基于醫(yī)師等的經(jīng)驗(yàn)的綜合判斷，實(shí)施給藥等治療。W往，將 生化學(xué)參數(shù)作為標(biāo)準(zhǔn)判斷肝損傷類型時(shí)，肝細(xì)胞損傷型中將ALT或AST的上升，膽汁渺積型 中將ALP或丫-GTP的上升能夠作為一個(gè)指標(biāo)，然而僅憑此則存在錯(cuò)誤進(jìn)行判斷的情形。因 此，在肝疾病發(fā)病的初期階段如果存在能夠更明確判斷肝損傷類型的標(biāo)記物則在早期就能 夠確定治療方針。
[0024] 本發(fā)明的課題在于開發(fā)對肝損傷類型能夠進(jìn)行早期診斷有用的生物標(biāo)記物，提供 一種將該生物標(biāo)記物作為指標(biāo)的肝損傷類型的判斷方法或輔助肝損傷類型的判斷的方法。
[0025] 本發(fā)明人等為解決上述課題進(jìn)行深入研究，使用臨床血清樣本測定24種膽汁酸成 分、肝纖維化標(biāo)記物、氧化應(yīng)激標(biāo)記物濃度，通過對得到的測定數(shù)據(jù)的多變量解析，發(fā)現(xiàn)石 膽酸濃度與肝損傷類型相關(guān)。具體地，發(fā)現(xiàn)石膽酸濃度，在肝損傷患者群中，在肝細(xì)胞損傷 型肝損傷中顯示高的傾向，相反在膽汁渺積型肝損傷中顯示低的傾向。而且，在肝細(xì)胞損傷 型肝損傷中，熊去氧膽酸濃度顯示低的傾向，此外作為肝纖維化標(biāo)記物的IV型膠原蛋白濃 度顯示高的傾向。另一方面，在膽汁渺積型肝損傷中，去氧膽酸濃度顯示低的傾向，血清硫 酸結(jié)合型膽汁酸(serum sul化ted bile acids; W下簡寫為SSBA)、作為肝纖維化標(biāo)記物的 IV型膠原蛋白和透明質(zhì)酸下簡寫為HA)W及作為氧化應(yīng)激標(biāo)記物的活性氧類(reactive oxygen species; W下簡寫為R0S)顯示高的傾向。此外，各種膽汁酸的牛橫酸結(jié)合體和甘氨 酸結(jié)合體也顯示與其游離型成分濃度相同的傾向。運(yùn)表明通過利用含有具有因肝損傷類型 而具有特征性傾向的運(yùn)些膽汁酸成分的生物標(biāo)記物，能夠判斷肝損