一種對慢性酒精性肝損傷具保護作用的組合物及制備方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于功能食品及醫(yī)藥領域，涉及包含趕黃草提取物制備以及該提取物與低 聚殼聚糖、蟲草多糖的一種對慢性酒精性肝損傷具保護作用組合物及制備方法。
【背景技術】
[0002] 通過合理的功能食品來預防疾病的發(fā)生一直是人們關注的熱點，植物性食品中存 在大量的非營養(yǎng)性生物活性物質(zhì)或者稱為植物化學物質(zhì)，具有廣泛的生物活性作用和促進 健康及防治疾病的作用，酚酸和多糖則是其中非常重要的一類，具有抗氧化、抗炎以及調(diào)節(jié) 血脂等多種生理功能（Hu，2003 ;Loo, 2003)。
[0003] 近年來，我國因長期飲酒造成的慢性肝損傷人群數(shù)量越來越多，慢性肝損傷進 一步發(fā)展會導致酒精性肝炎、肝硬化及肝癌等嚴重疾病，酒精對肝臟損傷是一種眾所周 知的現(xiàn)象，明顯的肝損傷標志是細胞酶滲入到血衆(zhòng)中（Baldi,Burra,Plebani,&Salvagni ni，1993)，威脅人們的健康。通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，長期酒精攝入導致動物體重降低，此與先 前報道一致（Lieber，1994)，這可能是由于食物攝入量減少和代謝紊亂所致。
[0004] 在肝細胞中，酒精性氧化壓力可引起酒精性肝病，酒精誘導肝臟病理變化包括 肝腫大和血清學變化，伴隨著谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST)，谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 (GGT)活性的增加。
[0005] ALT和AST是肝功能的可靠的指標，人體組織內(nèi)雖然含有大量基質(zhì)特異性轉(zhuǎn)氨酶， 但血清中只發(fā)現(xiàn)兩種：天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT)。在正常情況下，肝 細胞膜能將細胞內(nèi)的酶保持在細胞內(nèi)，維持肝細胞和肝竇狀間隙之間存在的一個明顯酶濃 度梯度（Gradient)。血清酶ALT和AST的增高表明細胞透性、損害或者肝細胞壞死的增加 (Goleberg&Watts，1965)。越來越多的證據(jù)表明酒精導致肝臟不正常，因為氧化壓力直接損 害細胞膜（Halliwell, 1999)。Obi,Usenu, &0sayande(1998)研究H.Rosainensis趕黃草組 合物能顯著降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST)和谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT)的降低。GGT是細胞膜結(jié)合 酶，血清GGT增高是誘導劑使肝臟合成酶增加的結(jié)果。乙醇能增強酶的誘導。GGT在肝內(nèi)主 要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而酒精中毒的最早期作用為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷，膜結(jié)合蛋白酶GGT被釋放到血液 中（Sillanaukee, 1996)〇
[0006] 脂質(zhì)過氧化是自由基引起的一系列的反應。機體內(nèi)存在著大量多不飽和脂肪酸 (PUFA)，它極易受到氧化作用的損傷，產(chǎn)生有細胞毒性的脂質(zhì)過氧化物。酒精的脂質(zhì)過氧化 反應的主要毒性是直接損傷細胞膜，使細胞內(nèi)PUFA過氧化，也使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溶酶體和線粒體等 生物膜結(jié)構(gòu)破壞，導致一系列的功能紊亂。脂質(zhì)過氧化機制是八十年代后公認的兩大酒精 性肝損傷機制之一。酒精性肝損傷與氧化壓力的增加和自由基介導組織傷害的密切相關性 在大鼠和人中已經(jīng)得到了廣泛的驗證（Lieber，2000;Minanaetal.2002)。
[0007] 長期酒精深入導致肝組織氧化應激加劇，導致脂質(zhì)過氧化和抗氧化酶活性降低。 自由基清除酶如SOD，GST和GSH-Px是對抗氧化傷害的第一道防線。
[0008] GSH-Px是細胞內(nèi)抗氧化防御體系的主要成員之一，是清除H202與許多有機氫過氧 化物的重要酶，與SOD-起，通過清除可以減輕和阻斷脂質(zhì)過氧化的引發(fā)作用。
[0009] GSTs是一種多基因家族同工酶，可催化GSH聚合為有害物質(zhì)，保護細胞免受活性 氧起重要作用（Wilce&Parker, 1994 ;Hayes&Pulford, 1995)。乙醇或者其代謝物可能是GST 同工酶的目標物，GST酶活降低可能產(chǎn)生毒性（Alin,Danielson, &Mannervik, 1985)。
[0010] 丙二醛（MDA)水平被廣泛用于脂質(zhì)過氧化指標。
[0011] 在抗氧化體系中，非酶促抗氧化劑例如GSH等在生物體系中保護細胞免受脂質(zhì)過 氧化起到了很大的作用。GSH耗竭被認為是酒精性脂肪肝發(fā)生的重要機理之一。GSH的 降低可能是由于酒精等物質(zhì)引發(fā)自由基過多導致過度使用清除劑造成的（Lieber，1997 ; Bjorneboeetal. , 1986)〇
[0012] 脂肪肝已被定義為超過5%脂滴或者總脂肪超過5%肝重量（Salt，2004)。脂肪的 聚集是對酒精過多攝入最早最普通的反應。酒精性脂肪肝的通常特點是肝臟腫大，血清和 肝組織的TG水平的增加，伴隨著脂滴的形成（Zengetal.，2008)。在目前的研究中，酒精 導致肝指標顯著增加，血清和肝組織TG和TCH水平顯著升高（P〈0. 05)，這表明酒精造成典 型脂肪肝。
[0013] 通過開發(fā)研究安全的保肝護肝的功能食品，可以幫助酒精引起的慢性肝損傷人士 逐步恢復健康。目前的護肝產(chǎn)品大多是植物來源的粗提取或者植物粉碎做成的茶，雖然也 有一定的保健效果，但是其成分不能確定，質(zhì)量難以保證。
[0014] 趕黃草始載于明代《救荒本草》，具有清熱解毒、退黃化濕，活血散瘀，利水消腫之 功效，是苗族民間治療肝病的經(jīng)驗方，苗族人世代習用，稱她為"神仙草"?，F(xiàn)代研究表明趕 黃草內(nèi)含多種有效成份均對肝損傷具保護作用，能恢復肝臟功能，減低飲酒及藥物對肝臟 的損害，抑制肝纖維化、肝硬化，并對甲肝、乙肝、慢性活動性肝炎具有顯著的治療作用。
[0015] 殼寡糖（C0S)也叫殼聚寡糖，是將殼聚糖經(jīng)酶水解或化學法水解等方法處理而得 到的一種水溶性較好、分子量在2KD以下的低聚糖。殼寡糖克服了甲殼素不溶于水的缺點， 能很好地經(jīng)腸道被人體吸收。大量的研究證明，殼寡糖具有很好的免疫調(diào)節(jié)功能，其可增強 單核巨噬細胞NK細胞以及中性粒細胞的吞噬功能、淋巴細胞增殖分化等功能，具有一定的 抗炎性。研究表明殼寡糖還具有一定的酒精肝損傷的保護作用（劉紅云等，[J]殼寡糖對 急性酒精性肝損傷保護作用的研究，中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，20 (3) :350-353)
[0016] 蟲草多糖為冬蟲夏草主要效用成分，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、降血糖等活 性，由于冬蟲夏草資源稀缺價格昂貴，大部分保健食品原料采用蟲草真菌經(jīng)生物發(fā)酵培養(yǎng)， 從菌絲體中提取有效成分，包括提取的蟲草菌絲體多糖具有與天然蟲草相同的作用，蟲草 菌絲體多糖具有提高免疫和抑制免疫損傷作用，同時研究發(fā)現(xiàn)蟲草多糖對化學性肝損傷具 有保護作用（方士英等，蟲草多糖對小鼠化學性肝損傷的保護作用，安徽醫(yī)科大學學報， 2004, 39(3)201-203)。
[0017] 采用現(xiàn)代生物分離技術將天然產(chǎn)物進行分離，對其組成進行分析鑒定，確定具有 生物活性的組分，是開發(fā)新一代護肝功能食品的方法。本發(fā)明選用趕黃草、殼聚糖、蟲草菌 絲體等為原料，進行制備工藝優(yōu)化，并對該功能食品組合進行活性評價，確定最佳配方和制 備工藝。
[0018] 雖然趕黃草、殼寡糖、蟲草多糖都對肝損傷具有保護作用，但是彼此之間組合在一 起是否可以達到理想的保護效果還未有過研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0019] 本發(fā)明的目的在于提供一種對慢行酒精性肝損傷具有保護作用的組合物，該組合 物具有較強的抗氧化、抗炎及免疫活性。
[0020] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述組合物的制備方法。
[0021] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種對慢性酒精性肝損傷具保護作用的組合物， 原料由如下重量份組成：趕黃草提取物1~5重量份、殼寡糖0. 5~1重量份、蟲草多糖1~ 2重量份和糊精1~2重量份。
[0022] 優(yōu)選地，原料由如下重量份組成：趕黃草提取物1重量份、殼寡糖0. 8重量份、蟲草 多糖1重量份和糊精1重量份。
[0023] 進一步地，所述組合物中總酸酸含量為50mg/g~200mg/g，多糖含量為100mg/g~ 400mg/g〇
[0024] 進一步地，所述殼寡糖的平均分子量為1500。
[0025] 本發(fā)明還提供一種上述對慢性酒精性肝損傷具保護作用的組合物的制備方法，包 括如下步驟：
[0026] 1)趕黃草提取物制備
[0027] 取趕黃草花或葉，粉碎機粉碎，加入與趕黃草重量等量的lw/v%氫氧化鈉溶液 浸泡2小時，然后加入醋酸調(diào)節(jié)pH到6,再用10倍趕黃草重量的90 %乙醇提取，提取溫 度50°C，提取