法對(duì)240 份人血清樣品同時(shí)進(jìn)行檢測。其檢測結(jié)果如圖3所示，以抗Jo-Ι抗體IgG檢測試劑盒酶聯(lián)免 疫吸附法測定的結(jié)果為橫坐標(biāo)，以本發(fā)明方法的測定的結(jié)果為縱坐標(biāo)作回歸分析，相關(guān)方 程為:y = 0.9809x+0.6682，相關(guān)系數(shù)為R2:0.9869。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果表明，本方法同其他 方法的試劑盒臨床樣品測值相關(guān)性良好。
[0105] 8)穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
[0106] 取所述試劑盒分別進(jìn)行4°C12個(gè)月和37°C7天的加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明試劑盒 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確度、空白限、線性、重復(fù)性和質(zhì)控品的賦值有效性等指標(biāo)均在正常范圍之內(nèi)，試 劑盒有效期可達(dá)12個(gè)月，數(shù)據(jù)見表7和表8。
[0107] 表7試劑盒4°C穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0108]
[0109] 表8試劑盒37°C穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0110]
<.....................-.···，...........................<.............................................v...........................>............................y........................·'..........................
[0111] 實(shí)施例2
[0112] -種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測抗Jo-Ι抗體IgG的試劑盒的制備方法，包括以 下步驟：
[0113] 步驟1.制備所述Anti-Jo-11gG校準(zhǔn)品包括:Anti- Jo-11gG校準(zhǔn)品稀釋液配制步驟 和Ant i -Jo-11 gG校準(zhǔn)品配制步驟：
[0114] 所述Ant i -Jo-11 gG校準(zhǔn)品稀釋液的配制步驟包括：
[0115] 加800mL純化水和11.2g的Tris到容器中，攪拌混合均勻，再加8.5g的氯化鈉和2mL 的Proclin300，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為7.0-7.5，加40g的牛血清白蛋白到容器中，攪 拌至完全溶解，再將pH值調(diào)為7.0-7.5,用純化水定容至1L，使用0.2μπι濾器過濾，將獲得的 所述校準(zhǔn)品稀釋液保存在2_8°C待用；
[0?16] 所述Anti-Jo-1 IgG校準(zhǔn)品的配制步驟包括：
[0117]用上述Anti-Jo-lIgG校準(zhǔn)品稀釋液將抗Jo-Ι抗體IgG分別配制為0、5、20、50、100、 200RU/mL共6個(gè)濃度點(diǎn)；
[0118] 步驟2.制備所述Anti-Jo-1 IgG試劑1號(hào)包括:Anti-Jo-1 IgG試劑1號(hào)稀釋液配制步 驟和Anti-Jo-1 IgG試劑1號(hào)配制步驟：
[0119] 所述Anti-Jo-lIgG試劑1號(hào)稀釋液的配制步驟：
[0120] 加800mL純化水、12 · lg的Tris和5 · 8g的NaCl于1L容器中，攪拌至完全溶解，再加入 2mL的Proclin300，攪拌至完全溶解，再加入5g的牛血清白蛋白，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào) 為7.0-7.5,用純化水定容至1L，使用0.2μπι濾器過濾，將獲得的所述試劑1號(hào)稀釋液保存在 2_8°C待用；
[0121 ] 所述Anti-Jo-lIgG試劑1號(hào)的配制步驟：
[0122]用0.2mol/L的pH9.0碳酸鹽緩沖液配制0.5mg/mL的生物素溶液，按照J(rèn)o-Ι抗原與 生物素溶液質(zhì)量比為10:1的比例在jo-l抗原溶液中加入到上述〇. 5mg/mL的生物素溶液，混 合均勻，室溫靜置18h，反應(yīng)生成Jo-Ι抗原-生物素連接物的反應(yīng)液，將得到的Jo-Ι抗原-生 物素連接物反應(yīng)液通過G-25凝膠柱進(jìn)行分離，除去未反應(yīng)的生物素，得到Jo-Ι抗原-生物素 連接物，再用所述試劑1號(hào)稀釋液將Jo-Ι抗原-生物素連接物稀釋到0.1-0.3yg/mL，得到所 述的試劑1號(hào)；
[0123] 步驟3.制備所述Anti-Jo-lIgG試劑2號(hào)包括:Anti-J〇-lIgG試劑2號(hào)稀釋液配制步 驟和Anti-Jo-1 IgG試劑2號(hào)的配制步驟：
[0124] 所述Anti-Jo-1 IgG試劑2號(hào)稀釋液的配制步驟：
[0125] 加800mL純化水、6.06g的4-羥乙基哌嗪乙磺和8.5g的NaCl到容器中，攪拌至完全 溶解，再加入5g的牛血清白蛋白、0. lg的ZnCl2、0.2mL的Proclin 300和0. lg的MgCh，攪拌至 完全溶解，將pH值調(diào)為7.5-8.0，用純化水定容至1L，使用0.2um濾器過濾，將獲得的所述試 劑2號(hào)稀釋液保存在2-8°C待用；
[0126] 所述Anti-Jo-1 IgG試劑2號(hào)的配制步驟：
[0127]將lmg的羊抗人抗體和2-4yL的10mg/mL的偶聯(lián)劑為2-亞胺四氫噻吩溶液，室溫靜 置20min，加入0. lmol/L的甘氨酸溶液10yL，室溫靜置5min，用G-25凝膠柱除鹽，收集活化后 抗體，將活化后的抗體保存在2_8°C備用，取1.5mg的堿性磷酸酶溶液，加入5mg/mL的4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯溶液10-20yL，室溫靜置30min，用G-25凝 膠柱除鹽，收集活化后堿性磷酸酶，將活化后的堿性磷酸酶保存在2_8°C備用，再將上述活 化的羊抗人抗體與活化的堿性磷酸酶混合，在2-8°C條件下靜置12-24h，用Supperdex200凝 膠純化柱純化，獲得羊抗人抗體-堿性磷酸酶連接物濃溶液，置于2-8°C保存?zhèn)溆?，將羊抗?抗體-堿性磷酸酶連接物濃溶液用所述試劑2號(hào)稀釋液稀釋到0.02-0. lyg/mL，得到所述的 試劑2號(hào)；
[0128] 步驟4.制備所述Anti-Jo-1 IgG磁分離試劑包括:Anti-Jo-1 IgG磁分離試劑稀釋液 配制步驟和Anti-Jo-1 IgG磁分離試劑配制步驟：
[0129] 所述Anti-Jo-1 IgG磁分離試劑稀釋液配制步驟：
[0130] 加800mL純化水、12.1g的Tris和8.5g的NaCl到容器中，攪拌至完全溶解，再加5g的 牛血清白蛋白、50mL的新生牛血清和0.2mL的Proclin300,攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為 7.9-8.1，用純化水定容至1L，使用0.2um濾器過濾，將獲得的所述磁分離試劑稀釋液保存在 2_8°C待用；
[0131 ] 所述Anti-Jo-1 IgG磁分離試劑配制步驟：
[0132] 取10011^磁微粒，磁分離去上清，取用0.025111〇1/1的？!1值為4.5-6的2-嗎啉乙磺酸 緩沖液1 OmL重懸，室溫下混勾2~3h，加入0.5 -1. OmL新配制的濃度為1 Omg/mL的碳二亞胺和 N-羥基硫代琥珀酰亞胺的嗎啉乙磺酸緩沖液，室溫振蕩混懸30-60min，使磁珠充分活化，磁 分離，去上清，用0. 〇25mol/L的pH值為4.5-6的2-嗎啉乙磺酸緩沖液10mL重懸，加入4-8mg的 鏈霉親和素，室溫混懸16_20h，再進(jìn)行磁分離，去上清，用百分比濃度0.5%的牛血清白蛋 白，百分比濃度0.5%脫脂奶粉和百分比濃度0.05%吐溫-20的2-嗎啉乙磺酸緩沖液10mL重 懸，室溫條件下混勾2~3h，再磁分離，去上清，用磁微粒緩沖液稀釋重懸到0.5mg/mL，在2~ 8°C下平衡16~24h，室溫條件下混勻2~3h后，使用超聲振蕩儀將混懸液中聚集成團(tuán)的磁珠 分散成單顆粒狀態(tài)，得到所述Anti-Jo-lIgG磁分離試劑。
[0133] 實(shí)施例3
[0134] 在實(shí)施例2的基礎(chǔ)上，所述試劑盒還包括清洗液，所述清洗液的制備步驟：
[0135] 加800mL純化水、Tris 12.1g和NaCl 8.5g于1L容器中，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?再加 入5g的吐溫-20和5g的TritonlOO，充分?jǐn)嚢?，直至完全混勻，調(diào)pH值控制在7.5-8.0，定容 1L，用0.2μπι過濾器過濾，溫度為2-8°C范圍進(jìn)行保存，使用前將所述清洗液按照每7.5mL加 純化水至100mL比例稀釋并混勻。
[0136] 實(shí)施例4
[0137] 采用所述試劑盒應(yīng)用于一種抗Jo-Ι抗體IgG的檢測方法，包括的檢測步驟：
[0138] 1)將試劑盒中的 Anti-Jo-1 IgG-Rl，Anti-Jo-1 IgG-R2, Anti-Jo-1 IgG-M 三個(gè)組分 放置于本公司研制的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀試劑艙中；
[0139] 2)在儀器軟件上進(jìn)行定標(biāo)曲線，將Anti-Jo-lIgG校準(zhǔn)品放到儀器試劑艙中的測試 位置，得到由全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出擬合曲線；
[0140] 3)如果儀器提示擬合通過，則在儀器軟件上進(jìn)行質(zhì)控品測試申請(qǐng)，將Anti-Jo-llgG質(zhì)控品放到儀器指定位置。得到由全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出質(zhì)控品測試發(fā)光值 和通過標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合得到的質(zhì)控品的濃度值；
[0141] 4)如果質(zhì)控測值在預(yù)定范圍內(nèi)，進(jìn)行樣品測試申請(qǐng)，將樣品放到儀器試劑艙中，由 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出樣品測試發(fā)光值和通過標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合得到的濃度值。
[0142] 5)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測步驟如下：
[0143] 步驟1)加20yL校準(zhǔn)品或質(zhì)控品或1:20稀釋后的待測標(biāo)本至檢測管中；
[0144] 步驟2)加50yLAnti-J〇-lIgG試劑1號(hào)至步驟1)所述檢測管中，混勻后，37±0.5°C 溫育10分鐘；
[0145] 步驟3)加5(^1^拉丨-加-1186磁分離試劑至步驟2)所述檢測管中，混勻后，37±0.5 °C溫育5分鐘;進(jìn)行磁分離，去上清；
[0146] 步驟4)加 300yL清洗液至檢測管中，混勻;進(jìn)行磁分離去上清；
[0147] 步驟5)重復(fù)步驟4)兩遍；
[0148] 步驟6)加 150yL的Anti-Jo-lIgG試劑2號(hào)至檢測管中，混勻后，37±0.5°C溫育10分 鐘;進(jìn)行磁分離去上清；
[0149] 步驟7)加 300yL清洗液至檢測管中，混勻;進(jìn)行磁分離去上清；
[0150] 步驟8)重復(fù)步驟7)兩遍；
[0151] 步驟9)加 200yL化學(xué)發(fā)光底物至檢測管中，混勻，檢測發(fā)光強(qiáng)度。
[0152] 上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)