構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人 士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本發(fā)明 精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-1抗體IgG的試劑盒，所述試劑盒包括： Anti-Jo-1IgG校準(zhǔn)品、Anti-Jo-1IgG試劑1 號(hào)、Anti-Jo-1IgG試劑2 號(hào)、Anti-Jo-1IgG磁分離 試劑、Anti-Jo-1IgG質(zhì)控品和清洗液，其特征在于： 所述Anti-Jo-1IgG校準(zhǔn)品包括6個(gè)液體校準(zhǔn)瓶，所述液體校準(zhǔn)瓶?jī)?nèi)目標(biāo)濃度分別為0、 5、20、50、100、200RU/mL的抗Anti-Jo-Ι抗體IgG和牛血清白蛋白的Tris緩沖液； 所述Anti-Jo-lIgG試劑1號(hào)為1個(gè)含有生物素標(biāo)記的Jo-Ι抗原和牛血清白蛋白的Tris緩沖液的瓶； 所述Anti-Jo-1IgG試劑2號(hào)為含有堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗人多克隆抗體和牛血清白蛋 白的Tris緩沖液的瓶； 所述Anti-Jo-lIgG磁分離試劑為含有鏈霉親和素標(biāo)記的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris緩沖液瓶； 所述Anti-Jo-lIgG質(zhì)控品包括2質(zhì)控瓶，所述質(zhì)控瓶?jī)?nèi)的濃度的范圍分別為：16-24RU/mL和80-120RU/mL。2. -種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-1抗體IgG的試劑盒的制備方法，其特征在 于，所述的制備方法包括： 步驟1.制備所述Anti-Jo-11gG校準(zhǔn)品包括:Anti-Jo-11gG校準(zhǔn)品稀釋液配制步驟和Anti-Jo-11gG校準(zhǔn)品配制步驟： 所述Anti-Jo-11gG校準(zhǔn)品稀釋液的配制步驟包括： 加800mL純化水和11.2g的Tris到容器中，攪拌混合均勻，再加8.5g的氯化鈉和2mL的Proclin300，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為7.0-7.5，加40g的牛血清白蛋白到容器中，攪拌 至完全溶解，再將pH值調(diào)為7.0-7.5，用純化水定容至1L，使用0.2μπι濾器過濾，將獲得的所 述校準(zhǔn)品稀釋液保存在2_8°C待用； 所述Anti-Jo-1IgG校準(zhǔn)品的配制步驟包括： 用上述Anti-Jo-1IgG校準(zhǔn)品稀釋液將抗Jo-Ι抗體IgG分別配制為0、5、20、50、100、 200RU/mL共6個(gè)濃度點(diǎn)； 步驟2.制備所述Anti-Jo-1IgG試劑1號(hào)包括:Anti-Jo-1IgG試劑1號(hào)稀釋液配制步驟和Anti-Jo-1IgG試劑1號(hào)配制步驟： 所述Anti-Jo-11gG試劑1號(hào)稀釋液的配制步驟： 加800mL純化水、12.1g的Tris和5.8g的NaCl于1L容器中，攪拌至完全溶解，再加入2mL的Proclin300，攪拌至完全溶解，再加入5g的牛血清白蛋白，攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為 7.0-7.5,用純化水定容至1L，使用0.2μπι濾器過濾，將獲得的所述試劑1號(hào)稀釋液保存在2-8 °C待用； 所述Anti-Jo-11gG試劑1號(hào)的配制步驟： 用0.2mol/L的pH9.0碳酸鹽緩沖液配制0.5mg/mL的生物素溶液，按照J(rèn)o-Ι抗原與生物 素溶液質(zhì)量比為10:1的比例在Jo-Ι抗原溶液中加入到上述〇.5mg/mL的生物素溶液，混合均 勻，室溫靜置18h，反應(yīng)生成Jo-Ι抗原-生物素連接物的反應(yīng)液，將得到的Jo-Ι抗原-生物素 連接物反應(yīng)液通過G-25凝膠柱進(jìn)行分離，除去未反應(yīng)的生物素，得到Jo-Ι抗原-生物素連接 物，再用所述試劑1號(hào)稀釋液將Jo-Ι抗原-生物素連接物稀釋到0.1-0.3yg/mL，得到所述的 試劑1號(hào)； 步驟3.制備所述Anti-Jo-1IgG試劑2號(hào)包括:Anti-Jo-1IgG試劑2號(hào)稀釋液配制步驟和Anti-Jo-1IgG試劑2號(hào)的配制步驟： 所述Anti-Jo-lIgG試劑2號(hào)稀釋液的配制步驟： 加800mL純化水、6.06g的4-羥乙基哌嗪乙磺和8.5g的NaCl到容器中，攪拌至完全溶解， 再加入5g的牛血清白蛋白、0.lg的ZnCl2、0.2mL的Proclin300和0.lg的MgCl2,攪拌至完全 溶解，將pH值調(diào)為7.5-8.0，用純化水定容至1L，使用0.2μπι濾器過濾，將獲得的所述試劑2號(hào) 稀釋液保存在2_8°C待用； 所述Anti-Jo-1IgG試劑2號(hào)的配制步驟： 將lmg的羊抗人抗體和2-4yL的1Omg/mL的偶聯(lián)劑為2-亞胺四氫噻吩溶液，室溫靜置 20min，加入0.lmol/L的甘氨酸溶液10yL，室溫靜置5min，用G-25凝膠柱除鹽，收集活化后抗 體，將活化后的抗體保存在2_8°C備用，取1.5mg的堿性磷酸酶溶液，加入5mg/mL的4-(N-馬 來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯溶液10-20yL，室溫靜置30min，用G-25凝膠 柱除鹽，收集活化后堿性磷酸酶，將活化后的堿性磷酸酶保存在2_8°C備用，再將上述活化 的羊抗人抗體與活化的堿性磷酸酶混合，在2-8°C條件下靜置12-24h，用SypperdeUOO凝膠 純化柱純化，獲得羊抗人抗體-堿性磷酸酶連接物濃溶液，置于2-8°C保存?zhèn)溆?，將羊抗人?體-堿性磷酸酶連接物濃溶液用所述試劑2號(hào)稀釋液稀釋到0.02-0.lyg/mL，得到所述的試 劑2號(hào)； 步驟4.制備所述Anti-Jo-1IgG磁分離試劑包括:Anti-Jo-1IgG磁分離試劑稀釋液配制 步驟和Anti-Jo-1IgG磁分離試劑配制步驟： 所述Anti-Jo-1IgG磁分離試劑稀釋液配制步驟： 加800mL純化水、12.lg的Tris和8.5g的NaCl到容器中，攪拌至完全溶解，再加5g的牛血 清白蛋白、50mL的新生牛血清和0.2mL的Proclin300,攪拌至完全溶解，將pH值調(diào)為7.9-8.1，用純化水定容至1L，使用0.2μπι濾器過濾，將獲得的所述磁分離試劑稀釋液保存在2-8 °C待用； 所述Anti-Jo-1IgG磁分離試劑配制步驟： 取100mg磁微粒，磁分離去上清，取用0.025mol/L的pH值為4.5-6的2-嗎啉乙磺酸緩沖 液1OmL重懸，室溫下混勾2~3h，加入0.5-1.OmL新配制的濃度為10mg/mL的碳二亞胺和N-輕 基硫代琥珀酰亞胺的嗎啉乙磺酸緩沖液，室溫振蕩混懸30-60min，使磁珠充分活化，磁分 離，去上清，用0. 〇25mol/L的pH值為4.5-6的2-嗎啉乙磺酸緩沖液10mL重懸，加入4-8mg的鏈 霉親和素，室溫混懸16-20h，再進(jìn)行磁分離，去上清，用百分比濃度0.5%的牛血清白蛋白， 百分比濃度0.5%脫脂奶粉和百分比濃度0.05%吐溫-20的2-嗎啉乙磺酸緩沖液10mL重懸， 室溫條件下混勻2~3h，再磁分離，去上清，用磁微粒緩沖液稀釋重懸到0.5mg/mL，在2~8°C 下平衡16~24h，室溫條件下混勻2~3h后，使用超聲振蕩儀將混懸液中聚集成團(tuán)的磁珠分 散成單顆粒狀態(tài)，得到所述Anti-Jo-lIgG磁分離試劑。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種使用磁微粒化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-Ι抗體IgG的試劑盒的 制備方法，其特征在于，所述制備方法包括清洗液的制備步驟： 加800mL純化水、12.1g的Tris和8.5g的NaCl于1L容器中，攪拌至完全溶解，再加入5g的 吐溫-20和5g的TritonlOO，攪拌，直至完全混勻，將pH值調(diào)為7.5-8.0，定容1L，使用0.2μπι濾 器過濾，將獲得的所述清洗濃縮液保存在2-8°C待用，使用前將所述清洗液按照每7.5mL加 純化水至lOOmL比例稀釋并混勻。4. 一種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-Ι抗體IgG的試劑盒的檢測(cè)方法，包括以下 步驟： 步驟1.將Anti-Jo-lIgG校準(zhǔn)品放到全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)試位置，得到由全自 動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出的擬合曲線； 步驟2.將Anti-Jo-lIgG質(zhì)控品放到上述分析儀測(cè)試位置，得到由全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫 分析儀輸出的所述質(zhì)控品的測(cè)試發(fā)光值和通過步驟1得到的擬合曲線擬合得到Anti-Jo-1IgG質(zhì)控品的濃度值； 步驟3.將待測(cè)樣本放到上述分析儀測(cè)試位置，由所述分析儀自動(dòng)按1: 20將樣本稀釋， 得到由全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀輸出的待測(cè)樣本的濃度值。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-Ι抗體IgG的試劑盒 的檢測(cè)方法，其特征在于:所述步驟1、步驟2和步驟3均包括全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的 全自動(dòng)檢測(cè)步驟： 步驟1)加20yL校準(zhǔn)品或質(zhì)控品或1:20稀釋后的待測(cè)標(biāo)本至檢測(cè)管中； 步驟2)加50yL的Anti-Jo-1IgG試劑1號(hào)至步驟1)所述檢測(cè)管中，混勻后，37 ±0.5°C溫 育lOmin; 步驟3)加50yL的Anti-Jo-1IgG磁分離試劑至步驟2)所述檢測(cè)管中，混勻后，37 ±0.5°C溫育5min，進(jìn)行磁分離，去上清； 步驟4)加300yL的清洗液至檢測(cè)管中，混勻，進(jìn)行磁分離，去上清； 步驟5)重復(fù)步驟4)兩遍； 步驟6)加150yL的Anti-Jo-lIgG試劑2號(hào)至檢測(cè)管中，混勻后，37±0.5°C溫育lOmin，進(jìn) 行磁分離，去上清； 步驟7)加300yL的清洗液至檢測(cè)管中，混勻，進(jìn)行磁分離，去上清； 步驟8)重復(fù)步驟7)兩遍； 步驟9)加200yL的化學(xué)發(fā)光底物至檢測(cè)管中，混勻，檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度。
【專利摘要】本發(fā)明涉及免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-1抗體IgG的試劑盒及其制備方法和檢測(cè)方法。本發(fā)明提供的一種使用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光定量檢測(cè)抗Jo-1抗體IgG的試劑盒，包括Anti-Jo-1？IgG校準(zhǔn)品、Anti-Jo-1？IgG試劑1號(hào)、Anti-Jo-1？IgG試劑2號(hào)、Anti-Jo-1？IgG磁分離試劑、Anti-Jo-1？IgG質(zhì)控品和清洗液。本發(fā)明還公開了上述試劑盒的制備和檢測(cè)方法。該檢測(cè)方法在傳統(tǒng)的膜條免疫法和酶聯(lián)免疫吸附法的基礎(chǔ)上，將靈敏度和線性范圍再提高3-5個(gè)數(shù)量級(jí)、實(shí)現(xiàn)了定量檢測(cè)，具有敏感度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好、成本低、操作簡(jiǎn)便和結(jié)果判斷客觀優(yōu)點(diǎn)，并配合全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)使用，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類】G01N33/531, G01N33/553, G01N21/76
【公開號(hào)】CN105466913
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510782564
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請(qǐng)人】北京中航賽維生物科技有限公司
【公開日】2016年4月6日
【申請(qǐng)日】2015年11月16日