一種gc-ms/ms測定果蔬中胺苯吡唑酮殘留的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯吡唑酮殘留的方法，更具體地說是采用 氣相色譜串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)定性定量測定蔬菜和水果中殘留的胺苯吡唑酮含量的方法， 屬于農藥殘留量的測定技術領域。
【背景技術】
[0002] 胺苯吡唑酮(Fenpyrazamine)是日本住友化學株式會社研究開發(fā)的基于吡啶的雜 環(huán)類殺真菌劑，通過抑制麥角留醇生物合成途徑的作用機制的病原體，顯示出對菌絲生長 和孢子萌發(fā)和花粉管生長的抑制作用。CAS號為:473798-59-3，分子式為CnifeNsOsS，分子量 為331.43，胺苯吡唑酮的化學結構式如下：
[0003] 胺苯吡菌酮是住友化學獨立開發(fā)的新殺菌劑，具有新穎化學結構，能迅速滲入作 物體內，對感染的真菌能快速發(fā)揮藥效，主要用于控制葡萄、石果、蔬菜作物中的灰霉病、菌 核病和鏈核盤菌。另外，胺苯吡菌酮對哺乳類動物高度安全，在環(huán)境中能迅速降解，可在多 種作物采收前應用。胺苯吡菌酮最初在韓國推出，在胺苯吡菌酮原藥獲得第一個全球登記 后，住友化學又在韓國推出其含胺苯吡菌酮原藥的殺菌劑新品，并以Botrycide商標名進行 銷售，該產(chǎn)品為30%的懸浮劑型，用于水果和蔬菜作物。2009年，住友化學于申請歐盟登記 用于溫室栽培的西紅柿、茄子、辣椒和萌蘆等蔬菜作物，還有葡萄的田間應用，但當時僅在 波蘭獲得為期三年的臨時登記，商品名為Pr 〇leCtU(32012年6月，歐盟食品與動物健康常務 委員會已投票通過了其登記申請，胺苯吡菌酮已經(jīng)獲得歐盟批準登記，將于2013年1月1日 起正式列入歐盟農藥1107/2009法規(guī)下的已登記有效成分名單，有效期為十年。胺苯吡菌酮 在歐盟取得登記后，將用于葡萄和一些溫室作物，如番茄、茄子、辣椒和萌蘆等。胺苯吡菌酮 對葡萄孢菌具有優(yōu)異防控能力，住友化學將進一步于2012/13年度向意大利和智利市場推 廣該產(chǎn)品，其全球商品名為Prolectus?，F(xiàn)已在美國和很多亞洲國家進行了登記，具有很廣 闊的應用前景。
[0004] 隨著胺苯吡唑酮的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟、美國、加拿 大等國家制定了其在疏采、水果、糧谷和畜廣品等食品農廣品中的最大允許殘留量(MRL)， 歐盟制定殺菌劑胺苯吡菌酮在多種作物上的最大殘留限量標準。該標準已于2012年5月7日 生效。胺苯吡菌酮在馬鈴薯、辣椒、茄子中的最大殘留限量為3mg/kg;在萌蘆、黃瓜、小黃瓜、 綠皮南瓜中的最大殘留限量為〇.7mg/kg;在柑橘、葡萄柚、檸檬等水果及各種干果中的殘留 限量最為嚴格，為〇. 〇lmg/kg。美國規(guī)定胺苯吡唑酮在杏仁中的最大殘留限量為0.02mg/kg; 在杏仁外殼中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在開心果中的最大殘留限量為0.02mg/kg;在萬 苣頭中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在萬苣葉中的最大殘留限量為2mg/kg;在蔓越莓亞組 13-07A中的最大殘留限量為5mg/kg;在灌木漿果類亞組13-07B中的最大殘留限量為5mg/ kg;在小型蔓生水果13-07F亞組中（除獼猴桃外）的最大殘留限量為3mg/kg;在葡萄汁中的 最大殘留限量為4mg/kg;在矮生漿果類亞組13-07G中的最大殘留限量為3mg/kg;在人參中 的最大殘留限量為〇.7mg/kg。加拿大規(guī)定胺苯吡唑酮在葡萄汁、生菜、萵苣、人參根、杏仁堅 果、開心果中的MRL 分別為4 · Omg/kg、2 · Omg/kg、1 · 5mg/kg、0 · 7mg/kg和0 · 02mg/kg;歐盟、日 本等國家規(guī)定沒有制定相應農藥的殘留限量標準時，出口至其國家的食品農產(chǎn)品包括畜禽 肉等動物源性食品中殘留限量均實行〇.〇lmg/L的"一律標準"。
[0005] 現(xiàn)階段，對胺苯吡唑酮殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中胺苯吡唑酮殘留檢測方法，這些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中胺苯吡唑酮殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農產(chǎn)品中農藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點，但由于其價格較昂貴，很多檢測機構、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動 相或色譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費比較長的時間對系統(tǒng)進行平衡，這一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應用。使用氣相色譜串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)分析食品農產(chǎn)品中農 藥殘留具有快速、簡便、靈敏度高、選擇性強等優(yōu)點，可實現(xiàn)幾百種農藥的多殘留分析，但迄 今為止未見食品農產(chǎn)品中胺苯吡唑酮殘留量的GC-MS/MS檢測方法的報道，因此建立簡便、 快速、準確、耐用、能準確定性和定量分析蔬菜和水果中氟醚菌酰胺殘留量的GC-MS/MS檢測 方法具有重要意義。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯吡唑酮殘留的方法。
[0007] 為實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術方案是:一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯吡 唑酮殘留的方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質提取lmin，加入氯化 鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，振蕩后離心。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質分散固相萃取劑，渦旋振蕩，離心，吸取 一定量凈化液氮氣吹干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣 相色譜串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)檢測。
[0010] (3)標準工作溶液的配制 將不含胺苯吡唑酮的同種類基質空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時，得樣品提取凈 化殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，渦旋混勻，配制成至少3個濃度的胺苯吡唑酮系列混合 標準工作液。
[0011] (4)氣相色譜串聯(lián)質譜法(GC-MS/MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-MS/MS測定，以標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-MS/MS進行測定，測得樣品液中胺苯吡唑酮的色譜峰面積，代入標準工作曲 線，得到樣品液中胺苯吡唑酮含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質量計算得到樣品中胺 苯吡唑酮殘留量;若上機溶液中胺苯吡唑酮殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機溶液濃度稀釋至線性范圍之內。
[0012] 步驟(1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(1)中采用乙腈提取時加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時加 入乙酸鈉鹽析;含水量較少的樣品鹽析時需加入一定量的水。
[0014] 步驟(2)中基質分散固相萃取劑由無水硫酸鎂、C18和PSA組成，每毫升提取液中無 水硫酸鎂、C 18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm， 膜厚0.25μπι;進樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進樣，進樣量：lyL;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:290°C。
[0016] 步驟(4)中質譜條件為：電離模式：電子轟擊電離(EI，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氬氣;多反應監(jiān)測掃描方式MRM，監(jiān)測參數(shù)為：
[0017] 步驟(4)中測定樣液和基質標準工作溶液時，若樣液中農藥色譜峰保留時間與標 準溶液中相應農藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結合GC-MS/MS應用于蔬菜和水果中胺苯吡唑酮定性確 證和定量檢測，平均回收率為83.3 %~93.5 %，平均相對標準偏差(RSD)為5.9 %~8.7 %， 檢出限低于〇.83yg/kg，具有操作簡便、快速、準確、靈敏度高及重復性好的優(yōu)點。能滿足美 國、歐盟、日本等國家對相應產(chǎn)品安全檢測的技術要求，為保障我國人民食品安全及對外出 口貿易健康發(fā)展提供有力的技術支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白蘋果基質中的胺苯吡唑酮標液的選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含胺苯吡唑酮的蘋果空白樣品的選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為以不含胺苯吡唑酮的蘋果空白樣品為基質配制的胺苯吡唑酮標準工作曲 線。
【具體實施方式】
[0023] 現(xiàn)以以下實施實例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實施例中使用的儀器與試劑
[0025] T18Basic均質器（IKA，Germany); 5810R離心機（Eppendorf，Germany) ;MS3基本型 旋渦混合器（1以，66^&即）；789(^氣相色譜-5977(：質譜儀以8丨161^，1^4) ;乙二胺-1丙基 硅烷(PSA)吸附劑(40~60μπι)、十八烷基硅烷鍵合相(C18)凈化劑(40~60μπι)均購于美國安 捷倫科技有限公司。
[0026] 試劑：乙腈、丙酮、正己燒(HPLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany); 無水硫酸鎂、氯化鈉和乙酸鈉為分析純，均購自國藥集團化學試劑有限公司。
[0027] 標準物質:純度98.0%，購自日本和光純農工業(yè)株式會社。
[0028] 實施例1:蘋果中胺苯吡唑酮殘留量的檢測
[0029] (1)樣品前處理 稱取經(jīng)充分混勾的蘋果10. 〇g于50mL離心管中，準確加入20mL乙腈，均質提取lmin，加 入3g無水硫酸鎂和2g氯化鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離心后，取6mL乙腈提取液 轉移至裝有900mg無水硫酸鎂、300mg Cis和150mg PSA的離心管中，禍旋lmin，5000r/min離 心5min。取4mL上清液于氮吹管中，于40°C氮氣吹干，加入體積比為1/1的丙酮/正己烷混合 溶劑溶解殘渣，渦旋混勻過膜后，移入進樣瓶中待GC-MS/MS測定。
[0030] (2)標準工作溶液的配制 準確稱取25 ± 0. lmg標準品于25mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容得1000.0 yg/mL