一種gc-ei-ms測定果蔬中胺苯吡唑酮?dú)埩舻姆椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種GC-EI-MS測定果蔬中胺苯吡唑酮?dú)埩舻姆椒?，更具體地說是采用 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測定蔬菜和水果中殘留的胺苯吡唑 酮含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留量的測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 胺苯吡唑酮(Fenpyrazamine)是日本住友化學(xué)株式會社研究開發(fā)的基于吡啶的雜 環(huán)類殺真菌劑，通過抑制麥角留醇生物合成途徑的作用機(jī)制的病原體，顯示出對菌絲生長 和孢子萌發(fā)和花粉管生長的抑制作用。CAS號為:473798-59-3，分子式為CnifeNsOsS，分子量 為331.43，胺苯吡唑酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0003] 胺苯吡菌酮是住友化學(xué)獨(dú)立開發(fā)的新殺菌劑，具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)，能迅速滲入作 物體內(nèi)，對感染的真菌能快速發(fā)揮藥效，主要用于控制葡萄、石果、蔬菜作物中的灰霉病、菌 核病和鏈核盤菌。另外，胺苯吡菌酮對哺乳類動物高度安全，在環(huán)境中能迅速降解，可在多 種作物采收前應(yīng)用。胺苯吡菌酮最初在韓國推出，在胺苯吡菌酮原藥獲得第一個全球登記 后，住友化學(xué)又在韓國推出其含胺苯吡菌酮原藥的殺菌劑新品，并以Botrycide商標(biāo)名進(jìn)行 銷售，該產(chǎn)品為30%的懸浮劑型，用于水果和蔬菜作物。2009年，住友化學(xué)于申請歐盟登記 用于溫室栽培的西紅柿、茄子、辣椒和萌蘆等蔬菜作物，還有葡萄的田間應(yīng)用，但當(dāng)時(shí)僅在 波蘭獲得為期三年的臨時(shí)登記，商品名為Pr 〇leCtU(32012年6月，歐盟食品與動物健康常務(wù) 委員會已投票通過了其登記申請，胺苯吡菌酮已經(jīng)獲得歐盟批準(zhǔn)登記，將于2013年1月1日 起正式列入歐盟農(nóng)藥1107/2009法規(guī)下的已登記有效成分名單，有效期為十年。胺苯吡菌酮 在歐盟取得登記后，將用于葡萄和一些溫室作物，如番茄、茄子、辣椒和萌蘆等。胺苯吡菌酮 對葡萄孢菌具有優(yōu)異防控能力，住友化學(xué)將進(jìn)一步于2012/13年度向意大利和智利市場推 廣該產(chǎn)品，其全球商品名為Prolectus。現(xiàn)已在美國和很多亞洲國家進(jìn)行了登記，具有很廣 闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著胺苯吡唑酮的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的歐盟、美國、加拿 大等國家制定了其在疏采、水果、糧谷和畜廣品等食品農(nóng)廣品中的最大允許殘留量(MRL)， 歐盟制定殺菌劑胺苯吡菌酮在多種作物上的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)已于2012年5月7日 生效。胺苯吡菌酮在馬鈴薯、辣椒、茄子中的最大殘留限量為3mg/kg;在萌蘆、黃瓜、小黃瓜、 綠皮南瓜中的最大殘留限量為〇.7mg/kg;在柑橘、葡萄柚、檸檬等水果及各種干果中的殘留 限量最為嚴(yán)格，為〇. 〇lmg/kg。美國規(guī)定胺苯吡唑酮在杏仁中的最大殘留限量為0.02mg/kg; 在杏仁外殼中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在開心果中的最大殘留限量為0.02mg/kg;在萬 苣頭中的最大殘留限量為1.5mg/kg;在萬苣葉中的最大殘留限量為2mg/kg;在蔓越莓亞組 13-07A中的最大殘留限量為5mg/kg;在灌木漿果類亞組13-07B中的最大殘留限量為5mg/ kg;在小型蔓生水果13-07F亞組中（除獼猴桃外）的最大殘留限量為3mg/kg;在葡萄汁中的 最大殘留限量為4mg/kg;在矮生漿果類亞組13-07G中的最大殘留限量為3mg/kg;在人參中 的最大殘留限量為〇.7mg/kg。加拿大規(guī)定胺苯吡唑酮在葡萄汁、生菜、萵苣、人參根、杏仁堅(jiān) 果、開心果中的M RL分別為4 · Omg/kg、2 · Omg/kg、1 · 5mg/kg、0 · 7mg/kg和0 · 02mg/kg;歐盟、日 本等國家規(guī)定沒有制定相應(yīng)農(nóng)藥的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽 肉等動物源性食品中殘留限量均實(shí)行〇.〇lmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對胺苯吡唑酮?dú)埩袅繙y定方法的研究較少，報(bào)道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中胺苯吡唑酮?dú)埩魴z測方法，這些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中胺苯吡唑酮?dú)埩袅康臋z測方法，使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時(shí)，需使用不同的流動 相或色譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費(fèi)比較長的時(shí)間對系統(tǒng)進(jìn)行平衡，這一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測器，可實(shí)現(xiàn)幾 百種農(nóng)藥的多殘留分析，可同時(shí)定性和定量，價(jià)格適中，因此現(xiàn)各種檢測機(jī)構(gòu)和企業(yè)均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中胺苯吡唑酮?dú)埩袅康腉C-EI-MS檢測方法的報(bào)道，建立氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動物源性食品中胺苯吡唑酮?dú)埩?量的檢測方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種GC-EI-MS測定果蔬中胺苯吡唑酮?dú)埩舻姆椒ā?br>[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種GC-EI-MS測定果蔬中胺苯吡 唑酮?dú)埩舻姆椒?，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取lmin，加入氯化 鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，振蕩后離心。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩，離心，吸取 一定量凈化液氮?dú)獯蹈珊螅皿w積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣 相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含胺苯吡唑酮的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈 化殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成至少3個濃度的胺苯吡唑酮系列混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC-EI-MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測定，測得樣品液中胺苯吡唑酮的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，得到樣品液中胺苯吡唑酮含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中胺 苯吡唑酮?dú)埩袅?若上機(jī)溶液中胺苯吡唑酮?dú)埩袅砍^線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時(shí)加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)加 入乙酸鈉鹽析;含水量較少的樣品鹽析時(shí)需加入一定量的水。
[0014] 步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無水硫酸鎂、C18和PSA組成，每毫升提取液中無 水硫酸鎂、C 18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25μπι;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式：選擇離子監(jiān)測（SIM)模式，監(jiān)測的離子為：230.1、 331.1、256.1、231.1。
[0017]步驟(4)中測定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若 上述兩個條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于蔬菜和水果中胺苯吡唑酮定性確 證和定量檢測，平均回收率為88.5%~93.9%，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.6 %~8.6%， 檢出限低于3.82yg/kg，具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能滿足美 國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及對外出 口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白蘋果基質(zhì)中的胺苯吡唑酮標(biāo)液的選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含胺苯吡唑酮的蘋果空白樣品的選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為以不含胺苯吡唑酮的蘋果空白樣品為基質(zhì)配制的胺苯吡唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線。
【具體實(shí)施方式】
[0023]現(xiàn)以以下實(shí)施實(shí)例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] Tl8 Basic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;5810R離心機(jī)（Eppendorf，Germany) ;MS3基本型 旋渦混合器（1以，66^&即）；789(^氣相色譜-5977(：質(zhì)譜儀以8丨161^，1^4) ;乙二胺-1丙基 硅烷(PSA)吸附劑(40~60μπι)、十八烷基硅烷鍵合相(C18)凈化劑(40~60μπι)均購于美國安 捷倫科技有限公司。
[0026] 試劑：乙腈、丙酮、正己燒(HPLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany); 無水硫酸鎂、氯化鈉和乙酸鈉為分析純，均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0027] 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度98.0%，購自日本和光純農(nóng)工業(yè)株式會社。
[0028]實(shí)施例1:蘋果中胺苯吡唑酮?dú)埩袅康臋z測 [0029] (1)樣品前處理 稱取經(jīng)充分混勾的蘋果10. 〇g于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入20mL乙腈，均質(zhì)提取lmin，加 入3g無水硫酸鎂和2g氯化鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離心后，取6mL乙腈提取液 轉(zhuǎn)移至裝有900mg無水硫酸鎂、300mg Cis和150mg PSA的離心管中，禍旋lmin，5000r/min離 心5min。取4mL上清液于氮吹管中，于40°C氮?dú)獯蹈?，加入體積比為1/1的丙酮/正己烷混合 溶劑溶解殘?jiān)瑴u旋混勻過膜后，移入進(jìn)樣瓶中待GC-EI-MS