標準儲 備液;移取l.OmL標準儲備液置于100mL容量瓶中，用用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶 劑定容得到10.〇yg/mL標準中間液;將10yg/mL標準溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0. lyg/mL 標準溶液。將不含胺苯吡唑酮的蘋果空白樣品按上述前處理步驟處理，得樣品提取凈化殘 渣，在此殘渣中加入900yL體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑和100yL上述標準溶液，渦 旋混勻，配成10、20、50、100、200、500yg/L基質(zhì)標準工作溶液。
[0031 ] (3)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測定 將不同濃度梯度的標準工作液分別注入GC-MS/MS，以外標法進行胺苯吡唑酮含量的定 量分析，即以標準工作液的色譜峰面積對其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在 相同條件下將樣品提取液注入GC-MS/MS進行測定，測得樣品液中胺苯吡唑酮的色譜峰面 積，代入標準工作曲線，得到樣品液中胺苯吡唑酮含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量 計算得到樣品中胺苯吡唑酮殘留量。
[0032]其中色譜條件為：
[0033] 色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25μπι。
[0034] 進樣口溫度:250.0°C，進樣模式:不分流進樣，進樣量:lyL。
[0035] 載氣:He，恒流模式，流速1.2mL/min。
[0036] 爐箱升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分 鐘2°C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;
[0037] 傳輸線溫度:290°C。
[0038] 其中，質(zhì)譜參數(shù)為：
[0039] 電離模式：電子轟擊電離，即El模式，能量70eV。
[0040] 離子源溫度:280°C。
[0041] 碰撞氣:氬氣。
[0042]掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(SRM)掃描模式。
[0043] MRM檢測參數(shù)見表1。 表1:實施例1的MRM檢測參數(shù)
$為定量離子對。
[0044] 定性鑒定:在相同的條件下，如果樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時間與標準溶液中相應(yīng) 農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且離子 豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若上述兩個條件 不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0045] 以標準工作液的色譜峰面積對其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線如表 2〇 丟2蘢里空白甚踣由胺某舯唑釃的烷準丁作曲錄
[0046] 加標回收率和重復(fù)性：
[0047] 在不含胺苯吡唑酮的蘋果中加入10、20和200yg/kg3個濃度水平的胺苯吡唑酮標 準溶液，待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，200yg/kg添加濃度的樣品待 測液用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑稀釋5倍后再用GC-MS/MS測定。將測定濃度與 農(nóng)藥理論添加濃度進行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對 標準偏差，測定結(jié)果見表3。由表3可以看出，在3個加標水平上，胺苯吡唑酮的平均回收率為 89.0%~92.6%，平均相對標準偏差(RSD)為6.1 %~8.7 %，說明本發(fā)明方法的回收率較 高，重復(fù)性好。
[0048] 表3胺苯吡唑酮的回收率和重復(fù)性(n = 6)
[0049] 檢出限：
[0050] 將不同濃度的胺苯吡唑酮基質(zhì)標準工作溶液注入GC-MS/MS，以最低濃度基質(zhì)標準 溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過程的濃縮倍數(shù)(蘋果的濃縮倍數(shù)為2.0倍)計算檢出 限，胺苯吡唑酮的檢出限為〇.83yg/kg。
[0051] 實施例2:黃瓜中胺苯吡唑酮殘留量的檢測
[0052] (1)樣品前處理 稱取經(jīng)充分混勻的黃瓜10. 〇g于50mL離心管中，準確加入20mL含1 %乙酸的乙腈溶液， 均質(zhì)提取lmin，加入3g無水硫酸鎂、2g乙酸鈉和2mL水，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離 心后，取6mL乙腈提取液轉(zhuǎn)移至裝有900mg無水硫酸鎂、300mg Ci8和150mg PSA的離心管中， 禍旋lmin，5000r/min離心5min。取4mL上清液于氮吹管中，于40°C氮氣吹干，加入體積比為 1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解殘渣，禍旋后混勻后，移入進樣瓶中待GC-MS/MS測定。 [0053] (2)標準工作溶液的配制 將lOOOyg/mL標準中間液溶液用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑稀釋成lOyg/mL 標準中間液，將l〇yg/mL標準溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0. lyg/mL標準溶液。將不含胺苯 吡唑酮的黃瓜空白樣品按上述前處理步驟處理，得樣品提取凈化殘渣，在此殘渣中加入900 yL體積比為1 /1的丙酮/正己烷混合溶劑和100yL上述標準溶液，渦旋混勻，配成10、20、50、 100、200、500yg/L基質(zhì)標準工作溶液。
[0054] (3)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測定 操作步驟、色譜和質(zhì)譜條件與上述蘋果樣品中胺苯吡唑酮的測定一致。
[0055] 定性鑒定：
[0056]同上述蘋果樣品中胺苯吡唑酮的測定一致。
[0057]線性關(guān)系：
[0058]以標準工作液的色譜峰面積對其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線為Y =176348X-199607，相關(guān)系數(shù)為0.9994。
[0059] 加標回收率和重復(fù)性：
[0060] 在不含胺苯吡唑酮的黃瓜中加入10、20和200yg/kg 3個濃度水平的胺苯吡唑酮標 準溶液，待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，200yg/kg添加濃度的樣品待 測液用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑稀釋5倍后再用GC-MS/MS測定。將測定濃度與 農(nóng)藥理論添加濃度進行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對 標準偏差，測定結(jié)果見表4。由表4可以看出，在3個加標水平上，胺苯吡唑酮的平均回收率為 83.3%~93.5%，平均相對標準偏差(RSD)為5.9%~8.2%，說明本發(fā)明方法的回收率高， 重復(fù)性好。
[0061] 表4胺苯吡唑酮的回收率和重復(fù)性(n = 6)
[0062] 檢出限：
[0063] 將不同濃度的胺苯吡唑酮基質(zhì)標準工作溶液注入GC-MS/MS，以最低濃度基質(zhì)標準 溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過程的濃縮倍數(shù)(黃瓜的濃縮倍數(shù)為2.0倍)計算檢出 限，胺苯吡唑酮的檢出限為〇.45yg/kg。
[0064] 以上的實施例僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行 限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)對本發(fā)明的技術(shù)方案作出 的各種變型和改進，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書確定的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯化挫酬殘留的方法，其特征在于，所述方法包括W下 步驟： (1) 提取 稱取蔬菜和水果樣品于具塞離屯、管中，加入乙臘或含1 %乙酸的乙臘溶液均質(zhì)提取 Imin,加入氯化鋼或乙酸鋼中的一種和無水硫酸儀振蕩后離屯、； (2) 凈化 移取樣品提取液于離屯、管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，滿旋振蕩，離屯、，取一定量凈 化液氮氣吹干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣相色譜串 聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測； (3) 標準工作溶液的配制 將不含胺苯化挫酬的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的胺苯化挫酬系列混合標 準工作液； (4) 測定和結(jié)果計算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-MS/MS測定，W標準工作液的色譜峰 面積對其相應(yīng)濃度進行回歸分析，得到基質(zhì)標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-MS/MS進行測定，測得樣品液中胺苯化挫酬的色譜峰面積，代入基質(zhì)標 準工作曲線，得到樣品液中胺苯化挫酬含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到 樣品中胺苯化挫酬殘留量;若上機溶液中胺苯化挫酬殘留量超過線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯化挫酬殘留的方法，其特征在 于，步驟(1)中蔬菜和水果樣品若為脫水樣品，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯化挫酬殘留的方法，其特征在 于，步驟（1)中采用乙臘提取時需加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時需加 入乙酸鋼鹽析。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯化挫酬殘留的方法，其特征在 于，步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無水硫酸儀、Cl沸PSA組成，每毫升提取液中無水硫酸 儀、Cl沸PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯化挫酬殘留的方法，其特征在 于，步驟(4)中GC-MS/MS分析條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進樣口溫度250.0°C;載氣:He，不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:290°C;電 離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰撞氣:氣氣；多反應(yīng)監(jiān)測掃描方式， 監(jiān)測參數(shù)為：
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種GC-MS/MS測定果蔬中胺苯吡唑酮殘留的方法，用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取樣品中殘留的胺苯吡唑酮，提取液經(jīng)乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷鍵合相（C18）基質(zhì)分散凈化后，氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS）檢測，采用不含待測農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液建立校正的標準工作曲線，外標法定量。本方法平均回收率為83.3%～93.5%，平均相對標準偏差（RSD）為5.9%～8.7%，檢出限低于0.83？μg/kg，具有操作簡便、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準確的優(yōu)點。能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及對外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105510507
【申請?zhí)枴緾N201610070444
【發(fā)明人】郭慶龍
【申請人】郭慶龍
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年1月30日