一種分離吐溫-80的柱色譜方法及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥品質(zhì)量控制方法。具體來說，涉及一種分離吐溫-80的柱色譜方法， 及其在含吐溫-80的藥品質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 吐溫-80(聚山梨酯80)是一種最常用的聚山梨酯類多元醇型非離子表面活性劑， 對電解質(zhì)有顯著的抵抗力，親水性強(qiáng)，作為0/W型乳化劑、增溶劑、濕潤劑、分散劑或穩(wěn)定劑， 被廣泛應(yīng)用于外用、口服或注射用的液體、半固體及固體制劑中，如注射液、口服液、乳劑、 混懸劑、透皮貼劑等。根據(jù)不同劑型和用途需要，其用量通常在〇.1%_15%的范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào) 整。目前，各種市售注射劑中最常用的增溶劑即為吐溫-80,用量一般在0.5%-2%。
[0003] 實(shí)踐證明，吐溫-80的加入對于提高難溶性藥物的溶解度，改善制劑的澄明度，以 及提高制劑穩(wěn)定性和生物利用度都十分有效。但大量吐溫-80的共存，對于薄層色譜鑒別、 光譜測定等都可能產(chǎn)生不利影響。特別是對于含生物堿的制劑，由于吐溫-80含有類同生物 堿的基團(tuán)，具有與生物堿類似的化學(xué)反應(yīng)特性，其共存會對基于生物堿沉淀或顯色反應(yīng)的 定性、定量分析結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重干擾，因此必須在分析前將其分離去除。如何有效消除吐溫_ 80的干擾，已成為相關(guān)藥物制劑質(zhì)量控制中備受關(guān)注的關(guān)鍵技術(shù)問題之一【鄭玲.吐溫-80 對鉤藤生物堿薄層分離干擾之排除.中成藥1993, 13(1): 33;戴述誠，等.吐溫-80對 柴胡注射液紫外吸收光譜的影響.中國獸藥雜志2011，45(10): 52-53.】。
[0004] 作為一種非離子表面活性劑，吐溫-80在常見極性和非極性溶劑中的溶解度都很 高，因此，常規(guī)液-液萃取手段難以實(shí)現(xiàn)藥物制劑中目標(biāo)質(zhì)量控制成分與大量共存吐溫-80 的有效分離。文獻(xiàn)報道，在強(qiáng)堿性條件下加熱煮沸一定時間，吐溫-80可因酯鍵水解而被破 壞【陳代懿.關(guān)于含吐溫-80的中藥注射劑用生物堿反應(yīng)作為鑒別試驗(yàn)的討論.中成藥研 究1987, 1: 8.】。但通常在如此劇烈的水解條件下，藥物制劑中的目標(biāo)質(zhì)量控制成分同樣 可能被破壞。與此同時，在吐溫-80被水解破壞后，試樣的澄明度和穩(wěn)定性均顯著降低，對后 續(xù)的分析、測定將產(chǎn)生新的干擾和影響。目前，適用于含吐溫-80的藥物制劑中吐溫-80與目 標(biāo)質(zhì)量控制成分快速、有效分離的方法尚屬空白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作快速、簡便，且具有良好重現(xiàn) 性和準(zhǔn)確度的柱色譜分離方法，應(yīng)用于藥物制劑中大量共存輔料吐溫-80與目標(biāo)質(zhì)量控制 成分的分離，以有效消除其對制劑質(zhì)量控制的干擾。
[0006] 本發(fā)明的目的可通過以下技術(shù)方案順利實(shí)現(xiàn)。對于含吐溫-80的供試藥品水溶液 試樣，以水可浸潤型兩親高分子聚合物基質(zhì)反相材料為固定相，以與水互溶的有機(jī)溶劑與 水組成的混合溶劑體系為流動相，在常壓至中壓條件下進(jìn)行梯度洗脫，使吐溫-80與目標(biāo)的 藥品質(zhì)量控制成分因親水性不同導(dǎo)致的色譜特性差異而被不同組成的溶劑分別洗脫，從而 實(shí)現(xiàn)二者的快速分離，以有效消除藥品中共存的吐溫-80對目標(biāo)質(zhì)量控制成分分析的干擾。
[0007] 本發(fā)明所采用的色譜柱既可以是商業(yè)來源的水可浸潤型高分子聚合物基質(zhì)固相 萃取(SPE)小柱，也可將商業(yè)來源的水可浸潤型兩親高分子聚合物基質(zhì)材料在常壓下自行 填裝制作。色譜柱的規(guī)格可根據(jù)待分析藥品試樣的實(shí)際情況和分析方法的具體需要進(jìn)行選 擇，在操作上十分便于實(shí)現(xiàn)。
[0008] 本發(fā)明所述的以與水互溶的有機(jī)溶劑與水組成的混合溶劑體系為流動相進(jìn)行洗 脫，該洗脫過程具體來說是:先以水、或水與有機(jī)溶劑組成的混合溶劑體系為流動相，先行 洗脫吐溫-80;再以與水互溶的有機(jī)溶劑或與水互溶的有機(jī)溶劑與水組成的混合溶劑體系 為流動相，洗脫藥物制劑中的目標(biāo)質(zhì)量控制成分。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 以下以含吐溫-80的苦木注射液經(jīng)柱色譜分離去除吐溫-80后的總生物堿定量分 析為具體實(shí)施例，以進(jìn)一步說明本發(fā)明及其應(yīng)用，但并不構(gòu)成對本發(fā)明權(quán)利要求所保護(hù)范 圍的限制。
[0010] 生物堿是一類重要的天然含氮有機(jī)化合物，不僅在植物界中分布廣泛，而且具有 抗炎、抑菌、解痙、平喘、降壓、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等多種多樣的生物活性，是很多常用中草藥的主 要化學(xué)和生物活性成分。如《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)?中藥成方制劑》第20冊收載 的苦木注射液，其主要藥效成分及質(zhì)量控制成分即為生物堿，規(guī)格為每支2 mL，含總生物堿 不低于0.50 mg。該制劑處方中同時含0.6~0.8%(w/v)的吐溫-80作為增溶劑。在現(xiàn)行部頒標(biāo) 準(zhǔn)(WS3-B-3887-98)中，采用重量法測定苦木注射液的總生物堿含量。單次測定即需消耗10 支(20 mL)注射液樣品，而且需要經(jīng)歷反復(fù)的調(diào)節(jié)酸堿度、有機(jī)溶劑萃取、洗滌、轉(zhuǎn)移、干燥 等一系列繁瑣的操作過程，結(jié)果的重現(xiàn)性和可靠性均難以保證，亟待改進(jìn)。
[0011] 基于本發(fā)明提供的柱色譜方法，可實(shí)現(xiàn)苦木注射液中總生物堿與共存吐溫-80的 快速分離，有效去除吐溫-80對生物堿特征呈色反應(yīng)的干擾。在此基礎(chǔ)上，建立了一種適用 于苦木注射液中總生物堿含量快速測定的光度分析方法，所得結(jié)果與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的重量法無 顯著差異，靈敏度、專屬性和重現(xiàn)性較重量法均顯著改善。該方法可在其他含吐溫-80的藥 品質(zhì)量控制中進(jìn)行推廣。
[0012] -、材料、試劑與儀器 苦木注射液(2mL/支），江西青峰藥業(yè);4-甲氧基-5-羥基鐵屎米酮對照品，實(shí)驗(yàn)室自制 (純度> 99.0%);固相萃取小柱（Phenomenex 31:抑七&-?(，20〇11^/31111^，33以111)，廣州菲羅門科 學(xué)儀器有限公司；INLUCK精細(xì)聚合物填料（INLKP0LY50/65，50-65μπι)，北京英萊克科技發(fā) 展有限公司；紫外可見分光光度計(jì)，島津UV2550;甲醇(色譜純），北京百靈威科技有限公司； 水，杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司;堿式硝酸鉍、碘化鉀、冰醋酸，分析純。
[0013] 二、實(shí)驗(yàn)方法 1、柱色譜分離制備待測總生物堿供試溶液 (l)SPE柱分離 1) 取Phenomenex Strata-X聚合物反相SPE小柱(填料為表面修飾的苯乙稀-二乙烯基 苯聚合物，