規(guī)格:200 mg/3 mL，33 μπι)，先后以~20倍柱體積的甲醇及水浸潤(rùn)、洗脫，活化后 待用； 2) 精密量取苦木注射液5 mL，上樣； 3) 在1 mL/min~3 mL/min流速下，以~3倍柱體積水先行淋洗，分離去除試樣中的吐 溫-80; 4) 繼續(xù)在1 mL/min~3 mL/min流速下，以~2倍柱體積甲醇淋洗。收集洗脫液至10 mL 量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，即得待測(cè)總生物堿供試溶液； (2)填充柱分尚 1) 取1見(jiàn)1]〇(精細(xì)聚合物填料1見(jiàn)即01^50/65,50-65以111，表面修飾的苯乙烯-二乙烯基 苯聚合物)400 mg，裝填于玻璃小柱中（直徑=0.90 cm)，先后以~10倍柱體積的乙醇及水浸 潤(rùn)、洗脫，活化后待用； 2) 精密量取苦木注射液5 mL，上樣； 3) 在1 mL/min~3 mL/min流速下，以~3倍柱體積水先行淋洗，分離去除試樣中的吐 溫-80; 4) 繼續(xù)在1 mL/min~3 mL/min流速下，以~2倍柱體積甲醇淋洗。收集洗脫液至10 mL 量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，即得待測(cè)總生物堿供試溶液。
[0014] 2、顯色測(cè)定 1) 精密量取經(jīng)上述分離過(guò)程制得的總生物堿供試溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加入2mL 改良碘化鉍鉀顯色劑，用0.1 mol/L HC1定容至刻度，搖勻，即得供試顯色溶液； 2) 精密量取濃度(Cb)~100 yg/mL的苦木生物堿對(duì)照品4-甲氧基-5-羥基鐵屎米酮甲 醇溶液2 mL，或甲醇2 mL，同1)進(jìn)行顯色，分別得對(duì)照顯色溶液和參比溶液； 3) 以參比溶液為參比，在505 nm處分別測(cè)定供試和對(duì)照顯色溶液的吸光度，按下式計(jì) 算苦木注射液試樣中總生物堿含量： ...10 注射液中總生物堿含量(yg/mL) = t xCi?x 7 = x if 其中，Cb為對(duì)照品溶液的濃度;As、Ab分別為供試和對(duì)照顯色溶液的吸光度值。
[0015] 結(jié)果以4-甲氧基-5-羥基鐵屎米酮(C15H1()N2〇3)計(jì)。
[0016] 三、結(jié)果與結(jié)論 1、本法測(cè)定結(jié)果及與重量法比較 針對(duì)10個(gè)批次的苦木注射液樣品，分別采用本發(fā)明建立的柱色譜分離-顯色光度法和 部頒標(biāo)準(zhǔn)的重量法進(jìn)行總生物堿含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0017] 表1. 1〇批苦木注射液總生物堿含量測(cè)定結(jié)果
針對(duì)兩種方法的測(cè)定結(jié)果，采用EXCEL進(jìn)行成對(duì)雙樣本均值t檢驗(yàn)，結(jié)果P(雙尾)=0.19， > 0.05,表明針對(duì)苦木注射液總生物堿的含量測(cè)定，兩種方法不存在顯著性差異。
[0018] 2、回收率測(cè)定 取已經(jīng)測(cè)定總生物堿含量的苦木注射液試樣，加入不同量對(duì)照品溶液，按實(shí)驗(yàn)方法進(jìn) 行操作，測(cè)定加標(biāo)后的總生物堿量，計(jì)算加標(biāo)回收率和RSD(%)。結(jié)果見(jiàn)表2。
[0019] 低、中、高濃度的平均加標(biāo)回收率分別為97.3%、98.2%、97.1%，總體平均回收率為 97.5%，RSD 0.89%，表明該方法對(duì)于苦木注射液總生物堿含量測(cè)定具有良好的準(zhǔn)確度和精 密度。
[0020]表2.生物堿加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果
3、結(jié)論 基于本發(fā)明提供的柱色譜方法，可實(shí)現(xiàn)苦木注射液中總生物堿與共存吐溫-80的快速 分離，有效去除吐溫-80對(duì)生物堿特征呈色反應(yīng)的干擾。在此基礎(chǔ)上所建立的顯色光度分析 方法，適用于苦木注射液中總生物堿含量的測(cè)定，所得結(jié)果與重量法無(wú)顯著差異，準(zhǔn)確度和 精密度良好，且簡(jiǎn)便、快捷，完全可以替代現(xiàn)行部頒標(biāo)準(zhǔn)中的重量法用于苦木注射液的質(zhì)量 控制。該方法也適于在其他含吐溫-80的藥品質(zhì)量控制中進(jìn)行推廣。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種分離吐溫-80的柱色譜方法，其特征在于，以水可浸潤(rùn)型兩親高分子聚合物基質(zhì) 反相填料為色譜固定相填裝色譜柱，以與水互溶的有機(jī)溶劑與水組成的混合溶劑體系為流 動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，使吐溫-80與目標(biāo)化合物因色譜特性差異而被不同組成的溶劑分別洗 脫。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離吐溫-80的柱色譜方法，其特征在于，所述的水可浸 潤(rùn)型兩親高分子聚合物基質(zhì)反相填料包括但不限于聚甲基丙烯酸酯、聚苯乙烯、苯乙烯-二 乙烯基苯交聯(lián)共聚物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離吐溫-80的柱色譜方法，其特征在于，所述的色譜柱 為可以為商業(yè)化的固相萃取(SPE)柱或者自行填裝的色譜柱。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離吐溫-80的柱色譜方法，其特征在于，所述的與水互 溶的有機(jī)溶劑，包括但不限于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈，優(yōu)選為甲醇或乙醇。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離吐溫-80的柱色譜方法，其特征在于，所述的梯度洗 脫可以在常壓至中壓條件下進(jìn)行。6. -種分離吐溫-80的柱色譜方法在含吐溫-80的藥品質(zhì)量控制中的應(yīng)用，其特征在 于，該方法作為便捷的預(yù)處理手段，對(duì)含吐溫-80藥物制劑中的目標(biāo)質(zhì)量控制成分與吐溫-80進(jìn)行快速分離，有效消除目標(biāo)質(zhì)量控制成分與吐溫-80因共存所產(chǎn)生的相互干擾，從而實(shí) 現(xiàn)對(duì)藥品中目標(biāo)質(zhì)量控制成分或吐溫-80的準(zhǔn)確定性、定量分析。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種分離吐溫-80的柱色譜方法在含吐溫-80的藥品質(zhì)量控制 中的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物制劑包括但不限于含吐溫-80的外用、口服或注射用的 液體、半固體及固體藥物制劑，優(yōu)先為含生物堿類藥效成分的中藥制劑。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種分離吐溫-80的柱色譜方法，及其在含吐溫-80的藥品質(zhì)量控制中的用途。其特征在于，對(duì)于含吐溫-80的供試藥品水溶液試樣，以水可浸潤(rùn)型兩親高分子聚合物基質(zhì)反相材料為固定相，以與水互溶的有機(jī)溶劑與水組成的混合溶劑體系為流動(dòng)相，在常壓至中壓條件下進(jìn)行梯度洗脫，使吐溫-80與目標(biāo)的藥品質(zhì)量控制成分因色譜特性差異而被不同組成的溶劑分別洗脫，從而實(shí)現(xiàn)二者的快速分離，以有效消除藥品中共存的吐溫-80與目標(biāo)質(zhì)量控制成分的相互干擾。本發(fā)明為含吐溫-80的藥品質(zhì)量控制提供了一種快速簡(jiǎn)便、并具有良好重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度的試樣前處理手段。
【IPC分類】G01N21/31, G01N1/28
【公開(kāi)號(hào)】CN105547789
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610110319
【發(fā)明人】許卉, 郝盛源
【申請(qǐng)人】煙臺(tái)大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年2月29日