一種氟唑菌苯胺殘留量的gc-ei-ms測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，更具體地說(shuō)是采用氣相 色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性定量測(cè)定糧谷、豬肉、牛肉、羊肉、雞肉等動(dòng)物 肌肉及制品等復(fù)雜基質(zhì)的動(dòng)植物源性食品中殘留的氟唑菌苯胺含量的方法，屬于農(nóng)藥殘留 量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氟唑菌苯胺是由巴斯夫公司開(kāi)發(fā)的琥珀酸脫氫酶抑制劑類(lèi)殺菌劑，通用名： penflufen;試驗(yàn)代號(hào):BYF14182;化學(xué)名稱(chēng):N-[2-(l，3-二甲基丁基)苯基]-5-氟-1,3-二甲 基- 1H-吡唑-4-甲酰胺；外觀:灰白色粉末狀固體;熔點(diǎn)：111°C ;沸點(diǎn)：沸點(diǎn)前分解;分解溫 度:320°C;蒸氣壓：1 · 2 X 10-6Pa(25°C);分配系數(shù):Kow logP = 3 · 3(20°C，pH=7);亨利常數(shù)： 1.05X10-5Pa · m3 · mol-l(25°C)。溶解度:在水中的溶解度為10.9mg/L(20°C);在正己烷中 的溶解度為1.6g/L，甲苯中為62g/L，丙酮中為139g/L，甲醇中為126g/L，乙酸乙酯中為96g/ L，二甲亞砜中為162g/L(以上均為20°C); CAS登錄號(hào)：494793-67-8。相對(duì)分子質(zhì)量317.41; 分子式C18H24FN3O,化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0003] 氟唑菌苯胺是拜耳公司開(kāi)發(fā)的又一個(gè)吡唑酰胺類(lèi)殺菌劑，于2006年申請(qǐng)專(zhuān)利，主 要用于種子處理，對(duì)多種植物病原真菌具有良好活性。該殺菌劑為琥珀酸脫氫酶(SDH)抑制 劑，主要作用于呼吸鏈電子傳遞復(fù)合體Π ，阻斷能量代謝。經(jīng)過(guò)處理后的種子在萌發(fā)過(guò)程中 可以吸收氟唑菌苯胺，并通過(guò)木質(zhì)部傳導(dǎo)到植物體的其他部位，從而起到保護(hù)作物的作用。 氟唑菌苯胺是一個(gè)種子處理殺菌劑，用于馬鈴薯、玉米、水稻、棉花、小麥、大麥、苜蓿、蔬菜、 豆類(lèi)以及油菜等種子，可以防治種傳、土傳的擔(dān)子菌和子囊菌病害，主要有絲核菌 (Rhizoctonia spp.)和黑粉菌素 (Ustilago spp.)等引起的馬鈴薯黑癒病、小麥紋枯病、水 稻紋枯病、油菜菌核病、小麥散黑穗病、小麥腥黑穗病、玉米小斑病等病害?？膳c丙硫菌唑、 甲霜靈、噻蟲(chóng)胺、肟菌酯等復(fù)配，不僅可以防治病蟲(chóng)害，還可以延緩抗性產(chǎn)生與發(fā)展。氟唑菌 苯胺于2011年在英國(guó)獲得首個(gè)全球登記，2012年又在美國(guó)和加拿大取得其登記批準(zhǔn)，在澳 大利亞及很多國(guó)家獲得登記，具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著氟唑菌苯胺的登記、推廣和使用，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的美國(guó)等國(guó)家制定 了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(MRL)，2012年5月14 日，美國(guó)新增對(duì)農(nóng)藥戊苯吡菌胺(Penflufen)的殘留限量要求，殘留限量要求規(guī)定如下：
歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒(méi)有在該國(guó)家登記，沒(méi)有制定相應(yīng)的殘留限量 標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品中殘留限量均實(shí)行 0.0 lmg/L的" 一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)氟唑菌苯胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜 和水果中氟唑菌苯胺殘留檢測(cè)方法，這些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測(cè) 定蔬菜和水果中氟唑菌苯胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng) 相或色譜柱，這樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，這一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。配備電子轟擊電離源的氣相色譜質(zhì)譜(GC-EI-MS)分析食 品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有很大優(yōu)勢(shì)，由于電子轟擊電離源質(zhì)譜為通用性檢測(cè)器，可實(shí)現(xiàn)幾 百種農(nóng)藥的多殘留分析，可同時(shí)定性和定量，價(jià)格適中，因此現(xiàn)各種檢測(cè)機(jī)構(gòu)和企業(yè)均配備 氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜儀(GC-EI-MS)對(duì)食品農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，但迄 今為止未見(jiàn)食品農(nóng)產(chǎn)品中氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS檢測(cè)方法的報(bào)道，氟唑菌苯胺屬電 負(fù)性化合物，由于糧谷、動(dòng)物源性食品等食品農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)比較復(fù)雜，須建立凈化效果良好的 樣品前處理方法和儀器分析條件才能滿足檢測(cè)要求，因此，建立氣相色譜-電子轟擊離子 源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)定性和定量分析糧谷和動(dòng)物源性食品中氟唑菌苯胺殘留量的檢測(cè)方法 具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，主要用于測(cè)定 糧谷、動(dòng)物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)廣品中氣唑菌苯胺殘留量。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱(chēng)取混勻樣品于具塞離心管中，加入適量水復(fù)蘇后，定量加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈 溶液均質(zhì)或振蕩超聲提取，然后加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無(wú)水硫酸鎂，劇烈渦旋 lmin后離心。
[0009] (2)凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至lmL左右，經(jīng)C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收 集洗脫液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過(guò)膜后，待氣相 色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氟唑菌苯胺的同種類(lèi)基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈 化殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的氟唑菌苯胺系列標(biāo)準(zhǔn) 工作液。
[0011] (4)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC-EI-MS)測(cè)定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氟唑菌苯胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線，得到樣品液中氟唑菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中氟 唑菌苯胺殘留量。若上機(jī)溶液中氟唑菌苯胺殘留量超過(guò)線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟（1)中樣品若為糧谷及動(dòng)物肝臟等含水量較少的樣品，提取前須加適量水充 分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時(shí)加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)加 入乙酸鈉鹽析。
[0014] 步驟(2)中進(jìn)行C18/PSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8mL。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25μπι;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為:離子源溫度150°C;四極桿溫度150°C;電離模式：電子轟擊 電離，即EI模式，能量70eV;掃描方式:選擇離子監(jiān)測(cè)（SIM)模式，監(jiān)測(cè)的離子為：141、274、 317。
[0017]步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡(jiǎn)便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-EI-MS應(yīng)用于糧谷、動(dòng)物源性食品中氟唑菌苯 胺定性確證和定量檢測(cè)，平均回收率為77.0%~88.6%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.3% ~7.4%，檢出限低于2.92yg/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。 能滿足美國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全 及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為添加在空白豬肉基質(zhì)中的氟唑菌苯胺的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含氟唑菌苯胺的豬肉空白樣品的GC-EI-MS選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為以不含氟唑菌苯胺的豬肉空白樣品為基質(zhì)配制的氟唑菌苯胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲 線。
【具體實(shí)施方式】
[0023]現(xiàn)以以下實(shí)施實(shí)例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] T18Basic均質(zhì)器（IKA，Germany) ;CR21GHI離心機(jī)（日立，Japan) ;MS3基本型旋禍混 合器（IKA，Germany);TurboVap LV型樣品自動(dòng)濃縮儀（Caliper，USA) ;7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent，USA);C18/PSA固相萃取柱(6mL，500mg/500mg)購(gòu)于天津博納艾杰爾 科技有限公司。
[0026] 試劑
[0027] 乙腈、丙酮、正己燒（HPLC級(jí)，Merke，Germany);乙酸（HPLC級(jí)，CNW，Germany);無(wú)水 硫酸鎂、氯化鈉和乙酸鈉為分析純，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0028] 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。
[0029] 實(shí)施例1:小麥中氟唑菌苯胺殘留量的檢測(cè)
[0030] (1)樣品前處理
[0031] 提取 稱(chēng)取經(jīng)充分混勾的5g小麥樣品（研磨成面粉)于50mL離心管中，加入20mL水復(fù)蘇30min 后，準(zhǔn)確加入20mL含1 %乙酸的乙腈溶液，振蕩提取20min，超聲提取5min，加入3g無(wú)水硫酸 鎂和2g乙酸鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心5min。離心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或 氮?dú)獯抵两?，加入lmL乙腈渦旋后，待凈化。
[0032] 凈化 用5mL乙腈預(yù)洗C18/PSA固相萃取柱，當(dāng)液面到達(dá)吸附劑的頂部時(shí)，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙腈洗滌試管，并將洗滌液移入SPE柱中，待溶液達(dá)到吸附劑頂部時(shí)，加入4mL 乙腈至柱子上進(jìn)行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，氮?dú)獯蹈珊笥皿w積比為1/1的丙 酮/正己烷混合溶劑定容至lmL，過(guò)0.22μπι濾膜后，待GC-EI-MS測(cè)定。
[0033] (2)標(biāo)