準(zhǔn)工作溶液的配制 準(zhǔn)確稱取25 ± 0. lmg標(biāo)準(zhǔn)品于25mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容得1000.0 yg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ) 備液;移取l.OmL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于100mL容量瓶中，用用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶 劑定容得到10.〇yg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液;將10yg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0. lyg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液。將不含氟唑菌苯胺的小麥空白樣品按上述前處理步驟處理，得樣品提取凈化殘 渣，在此殘?jiān)屑尤?00yL體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑和100yL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦 旋混勻，配成10、20、50、100、200、500yg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0034] (3)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC- EI-MS)測(cè)定 將不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液分別注入GC-EI-MS，以外標(biāo)法進(jìn)行氟唑菌苯胺含量的定 量分析，即以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在 相同條件下將樣品提取液注入GC-EI-MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氟唑菌苯胺的色譜峰面 積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到樣品液中氟唑菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量 計(jì)算得到樣品中氟唑菌苯胺殘留量。
[0035]其中色譜條件為：
[0036] 色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚0.25μπι。
[0037] 進(jìn)樣口溫度:250.0°C，進(jìn)樣模式:不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量:lyL。
[0038] 載氣:He，恒流模式，流速1. OmL/min。
[0039] 爐箱升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分 鐘2°C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin。
[0040] 傳輸線溫度:280°C。
[0041] 其中，質(zhì)譜參數(shù)為：
[0042]電離模式：電子轟擊電離，即EI模式，能量70eV。
[0043] 離子源溫度：150°C;四極桿溫度150°C。
[0044] 掃描方式:選擇離子監(jiān)測(cè)（SHO模式;SIM監(jiān)測(cè)的離子為：141、274、317;定量離子為 317。
[0045] 定性鑒定:在相同的條件下，如果樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng) 農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且離子 豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在這種農(nóng)藥;若上述兩個(gè)條件 不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0046] 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如表 1〇 豐1爪豐卓白其踣由顧'Π 生苗架膀的烷姓丁作曲姥 LUU4/J 加稱回嘆卒和里復(fù)性：
[0048]在不含氟唑菌苯胺的小麥中加入10、20和200yg/kg3個(gè)濃度水平的氟唑菌苯胺標(biāo) 準(zhǔn)溶液，待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定。將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加 濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定 結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可以看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氟唑菌苯胺的平均回收率為83.1 %~ 84.3 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.3 %~7.1 %，說(shuō)明本發(fā)明方法的回收率較高，重復(fù)性 好。
[0049] 表2氟唑菌苯胺的回收率和重復(fù)性(n = 6)
[0050] 檢出限：
[0051 ] 將不同濃度的氟唑菌苯胺基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入GC-EI-MS，以最低濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過(guò)程的濃縮倍數(shù)(小麥的濃縮倍數(shù)為2.0倍)計(jì)算檢出 限，氟唑菌苯胺的檢出限為2.29yg/kg。
[0052]實(shí)施例2:豬肉中氟唑菌苯胺殘留量的檢測(cè) [0053] (1)樣品前處理
[0054] 提取 稱取經(jīng)充分混勾的5g豬肉樣品于50mL離心管中，加入5mL水混勾，放置30min，準(zhǔn)確加入 20mL乙腈，均質(zhì)提取2min，加入3g無(wú)水硫酸鎂和2g氯化鈉，禍旋lmin后，7000r/min離心 5min。離心后，取8mL乙腈提取液于40°C旋蒸或氮?dú)獯抵良slmL，待凈化。
[0055] 凈化 用5mL乙腈預(yù)洗C18/PSA固相萃取柱，當(dāng)液面到達(dá)吸附劑的頂部時(shí)，將上述提取溶液轉(zhuǎn) 入柱中，用2mL乙腈洗滌試管，并將洗滌液移入SPE柱中，待溶液達(dá)到吸附劑頂部時(shí)，加入4mL 乙腈至柱子上進(jìn)行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，氮?dú)獯蹈珊笥皿w積比為1/1的丙 酮/正己烷混合溶劑定容至lmL，過(guò)0.22μπι濾膜后，待GC-EI-MS測(cè)定。
[0056] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將lOOOyg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑稀釋成lOyg/mL標(biāo)準(zhǔn)中 間液，將l〇yg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋配成5、2、1、0.5、0.2、0. lyg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。將不含氟唑菌苯胺 的豬肉空白樣品按上述前處理步驟處理，得樣品提取凈化殘?jiān)?，在此殘?jiān)屑尤?00yL體積 比為1 /1的丙酮/正己烷混合溶劑和1 OOyL上述標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配成10、20、50、100、 200、500yg/L基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0057] (3)氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜法(GC-EI-MS)測(cè)定操作步驟、色譜和質(zhì)譜條 件與上述小麥樣品中氟唑菌苯胺的測(cè)定一致。
[0058]定性鑒定:同上述小麥樣品中氟挫菌苯胺的測(cè)定一致。
[0059]線性關(guān)系： 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線為 Υ = 993 · 51X-1288 · 3，相關(guān)系數(shù)為 0 · 9993。
[0060] 加標(biāo)回收率和重復(fù)性：
[0061]在不含氟唑菌苯胺的豬肉中加入10、20和200yg/kg 3個(gè)濃度水平的氟唑菌苯胺標(biāo) 準(zhǔn)溶液，待農(nóng)藥添加30min后按上述處理步驟進(jìn)行殘留量測(cè)定，將測(cè)定濃度與農(nóng)藥理論添加 濃度進(jìn)行比較，得到農(nóng)藥添加回收率，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6次，得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，測(cè)定 結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可以看出，在3個(gè)加標(biāo)水平上，氟唑菌苯胺的平均回收率為77.0%~ 88.6 %，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.9 %~7.4 %，說(shuō)明本發(fā)明方法的回收率高，重復(fù)性好。
[0062] 表3氟唑菌苯胺的回收率和重復(fù)性(n = 6)
[0063] 檢出限：
[0064] 將不同濃度的氟唑菌苯胺基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液注入GC-EI-MS，以最低濃度基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過(guò)程的濃縮倍數(shù)(豬肉的濃縮倍數(shù)為2.0倍)計(jì)算檢出 限，氟唑菌苯胺的檢出限為2.92yg/kg。
[0065]以上的實(shí)施例僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行 限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神的前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作出 的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： (1) 提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加適量水后，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)或 振蕩超聲提取后，加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無(wú)水硫酸鎂，劇烈渦旋lmin后離心； (2) 凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至lmL左右，經(jīng)C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收集 洗脫液，濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過(guò)膜后，待氣相色 譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜(GC-EI-MS)檢測(cè)； (3) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含氟唑菌苯胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，渦旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的氟唑菌苯胺系列標(biāo)準(zhǔn)工 作液； (4) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-EI-MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-EI-MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中氟唑菌苯胺的色譜峰面積，代入基質(zhì)標(biāo) 準(zhǔn)工作曲線，得到樣品液中氟唑菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到 樣品中氟唑菌苯胺殘留量;若上機(jī)溶液中氟唑菌苯胺殘留量超過(guò)線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，其特征在于，步 驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤(rùn)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，其特征在于，步 驟（1)中采用乙腈提取時(shí)需加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)需加入乙酸 鈉鹽析。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，其特征在于，步 驟⑵中進(jìn)行(WPSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時(shí)，洗脫體積為6~8mL。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，其特征在于，步 驟(4)中GC-EI-MS分析條件為:色譜柱:HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm，膜厚 0. 25μπι;進(jìn)樣口溫度250.0°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：lyL;恒流模式，流速 1. OmL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:280°C;電 離模式：電子轟擊電離，即EI模式，能量70eV;離子源溫度150°C ;掃描方式:選擇離子監(jiān)測(cè) (SHO模式，監(jiān)測(cè)的離子為：141、274、317。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-EI-MS測(cè)定方法，該方法主要用于測(cè)定糧谷、動(dòng)物源性食品等復(fù)雜基質(zhì)食品農(nóng)產(chǎn)品中殘留的氟唑菌苯胺含量的方法。用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取樣品中殘留的氟唑菌苯胺，C18/PSA固相萃取柱凈化濃縮后，氣相色譜-電子轟擊離子源-質(zhì)譜（GC-EI-MS）檢測(cè)，采用不含待測(cè)農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液建立校正的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，外標(biāo)法定量。本方法平均回收率為77.0%～88.6%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.3%～7.4%，檢出限低于2.92μg/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、去雜效果好、靈敏度高、特征性強(qiáng)、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。能滿足美國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全及對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【IPC分類】G01N30/88
【公開(kāi)號(hào)】CN105548440
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610065813
【發(fā)明人】崔淑華
【申請(qǐng)人】崔淑華
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年1月30日