液（l〇〇〇mg/L):準(zhǔn)確稱取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并 定容，使丙烯酰胺濃度為l〇〇〇mg/L，置-20°C冰箱保存。
[0032]②丙烯酰胺中間溶液（100mg/L):移取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液lml，加甲醇稀釋至 l〇ml，使丙烯酰胺濃度為100mg/L，置-20°C冰箱保存。
[0033] ③丙烯酰胺工作溶液I(10mg/L):移取丙烯酰胺中間溶液lml，加0.1%甲酸稀釋至 l〇ml，使丙烯酰胺濃度為10mg/L，置-20°C冰箱保存。
[0034]④丙烯酰胺工作溶液II (lmg/L):移取丙烯酰胺工作溶液I lml，加0.1 %甲酸稀釋 至10ml，使丙稀酰胺濃度為lmg/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。
[0035] ⑤取6個10ml容量瓶，分別移取0 · lml、0 · 5ml、lml丙烯酰胺工作溶液II和0 · 5ml、 lml和3ml丙烯酰胺工作溶液I用甲酸稀釋至刻度。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度分別為lug/L、10ug/L、 50ug/L、100ug/L、500ug/L、1000ug/L、3000ug/L?，F(xiàn)配現(xiàn)用。
[0036] b.色譜條件
[0037] 柱子：Diamonsil C18 250X4.6mm，5ym
[0038] 流動相：甲醇:0 · 1 %甲酸:水=10:90( V/V)
[0039] 流速:0.3ml/min
[0040] 進(jìn)樣量:20μ1
[0041 ] 出峰時間：5.2min左右
[0042] 檢測波長：198-210nm
[0043] 柱溫：25°C
[0044] c.質(zhì)譜條件
[0045] 在micrOTOF-Q II質(zhì)譜儀上測定，得到分析物的子離子。
[0046]質(zhì)譜條件：
[0047]檢測方式:選擇反應(yīng)監(jiān)測EIC;
[0048] 掃描寬度(m/z):0.002;
[0049] 掃描時間（s):0.500;
[0050] 掃描事件數(shù)：1;
[0051] 峰寬Ql(FWHM) :0.70;
[0052] 進(jìn)樣方式:部分體積；
[0053] 其他質(zhì)譜參數(shù)見下表1和表2。
[0054] 表1.質(zhì)譜參數(shù)
[0055]
[0056]表2.分析物質(zhì)譜分析參數(shù)
[0057]
[0058] 實(shí)施例2:
[0059] 牛干巴分別于120、140、160、170、180、190°C油炸4min后，分別稱取不同溫度油炸 下的牛干巴樣品2g于燒杯中，按照上述實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，測定不同溫度油炸下牛干巴中 丙烯酰胺的含量。經(jīng)檢測油炸120、140、160、170、180、190°C油炸后的牛干巴中丙烯酰胺含 量分別為 10.136yg/kg、34.137yg/kg、103.5249yg/kg、145.676yg/kg、81.6158yg/kg、8.288 yg/kg。
[0060] 實(shí)施例3:
[0061] 直接稱取電烤雞樣品2g于燒杯中，按照上述實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，測定電烤雞樣品 中丙烯酰胺的含量。經(jīng)檢測烤雞腿中丙烯酰胺含量為158.37yg/kg。
[0062] 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù) 人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是本發(fā)明 的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和 改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明要求的保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其 等同物界定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:包括以下步驟： 步驟1:稱取粉碎后的熱加工肉制品樣品l-5g置于離心管中； 步驟2:將步驟1中的肉制品樣品加入提取溶劑，取3ml上清液加熱水浴離心； 步驟3:取上清液加卡瑞試劑1、2各100μΙ離心； 步驟4:取上清液加7.5ml正己烷，振蕩2min，移去上層正己烷； 步驟5:水浴氮吹干，加入lml蒸餾水振蕩2min，過柱收集過濾后樣液，將樣液過濾膜收 集備測； 步驟6:色譜測定。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 1中所述的樣品為熱加工后的肉制品，包括油炸牛干巴、燒雞、烤鴨中的一種或幾種組合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 2中所述的提取溶劑為0.1 %的甲酸水溶液，提取溫度為60°C;提取時間為60min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 3 所述的離心為 1000-5000r/min，8-12min。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 5中所述的氮吹干溫度為50°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 5中所述的固相萃取小柱為C18，流動相為甲醇:0.1 %甲酸:水=5:95。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 5中所述的收集洗脫液過濾優(yōu)選為用0.45um的過濾膜過濾。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 6中所述的色譜測定采用高效液相色譜-四級桿串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀中采用正離子電 離模式和多反應(yīng)監(jiān)測模式進(jìn)行檢測。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，其特征在于:步驟 6中所述的色譜測定的色譜柱為超高效液相色譜專用C18色譜柱;流動相為：甲醇:0.1%甲 酸水=10:90V/V，電離模式為ESI+;檢測波長:205nm;柱溫:25°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種熱加工肉制品中丙烯酰胺含量的檢測方法，包括以下步驟:步驟1：稱取粉碎后的熱加工肉制品樣品1-5g置于離心管中；步驟2：將步驟1中的肉制品樣品加入提取溶劑，取3ml上清液加熱水浴離心；步驟3：取上清液加卡瑞試劑1、2各100μl離心；步驟4：取上清液加7.5ml正己烷，振蕩2min，移去上層正己烷；步驟5：水浴氮吹干，加入1ml蒸餾水振蕩2min，過柱收集過濾后樣液，將樣液過濾膜收集備測；步驟6：色譜測定。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：本方法排除檢測中雜質(zhì)的干擾，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確、更可靠。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105572287
【申請?zhí)枴緾N201610063717
【發(fā)明人】胡永金, 葛長榮, 谷大海, 普岳紅, 和勁松, 丁曉倩, 楊立亭, 王雪峰, 范江平
【申請人】云南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2016年1月29日