能夠測定廣泛濃度范圍的生物物質(zhì)濃度的免疫層析條狀傳感器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本專利申請針對2013年11月12日向韓國專利廳提出的韓國特許申請第KRl0-2013-0136906號主張優(yōu)先權(quán)，上述專利申請的公開事項(xiàng)插入于本說明書中作為參考。
[0002]本發(fā)明涉及能夠測定廣泛濃度范圍的生物物質(zhì)濃度的免疫層析條狀傳感器(Lateral Flow Assay Strip Sensor)及使用該免疫層析條狀傳感器測定廣泛濃度范圍的生物物質(zhì)的濃度的方法。
【背景技術(shù)】
[0003]C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)作為眾所周知的急性炎癥的生物標(biāo)記，以正五聚蛋白(pentraxin)的形態(tài)由5個反復(fù)結(jié)構(gòu)形成，若受到白細(xì)胞介素-1及白細(xì)胞介素-6的刺激，則在肝臟中進(jìn)行合成。過去數(shù)十年間，進(jìn)行了如下研究(I?9):通過測定在血漿中的C反應(yīng)蛋白的水平，來將其利用于預(yù)測心肌梗塞、癌癥、心血管疾病、糖尿病的危險程度，或用于抗生素治療指南。在健康的正常成人中，C反應(yīng)蛋白的數(shù)值為平均0.8yg/mL，但若發(fā)生炎癥反應(yīng)，則其數(shù)值增加到100mg/L以上。通常，在輕度炎癥或病毒感染的情況下，C反應(yīng)蛋白的數(shù)值為10?50yg/mL，在活動性炎癥或細(xì)菌感染的情況下，C反應(yīng)蛋白的數(shù)值為50?200yg/mL，在重度炎癥或損傷的情況下，C反應(yīng)蛋白的濃度大于200yg/mL。食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)勸告如下:在20?500yg/mL的濃度范圍的情況下，對炎癥中的C反應(yīng)蛋白進(jìn)行測定，并且，對作為心血管疾病的具有可靠性的生物標(biāo)記且潛在性危險預(yù)測子的高靈敏度C反應(yīng)蛋白(high sensitivity CRP，hs_CRP)進(jìn)行測定。在這種測定中所需的濃度范圍為I?10yg/mLo
[0004]在急性炎癥或第一次診療的情況下，為了迅速的診斷或人體體液內(nèi)C反應(yīng)蛋白水平的連續(xù)的監(jiān)控，需要測定范圍的充足性、迅速性、準(zhǔn)確性、簡便性及低費(fèi)用定量測定等(10?11)。通常，作為迅速的定量性C反應(yīng)蛋白分析，普遍利用具有聚苯乙烯珠的免疫比濁(Immunoturbidimetrie)法或免疫散射比池(Imunonephelometry)法、金納米粒子凝聚(agglomerat1n)分析法等。并且，最近，導(dǎo)入廣泛濃度范圍的C反應(yīng)蛋白測試，從而擴(kuò)張到能夠測定廣泛的濃度。例如，DIAgam XS Card1 NanoGold C反應(yīng)蛋白法的情況下，使用由DIAgam laboratory(法國里爾(LiIIe,France))提供的試劑來可實(shí)現(xiàn)0.42?265yg/mL的范圍為止的測定。就DIAgam試劑而言，經(jīng)過稀釋試樣的步驟，并使用奧林巴斯(Olympus )AU640生化分析儀，來測定0.1?160yg/mL的濃度范圍的全濃度范圍。這些方法使用自動化的分析儀來提供準(zhǔn)確的測定值，但為了進(jìn)行分析工序，需要昂貴的設(shè)備和熟練的人力。作為用于克服這種局限點(diǎn)的方案，提出利用適合現(xiàn)場顯示系統(tǒng)的低費(fèi)用、短的分析時間及簡單的操作技術(shù)檢測C反應(yīng)蛋白的方法。作為迅速且高靈敏度的即時檢驗(yàn)(point of care test，P0CT)技術(shù)中之一，微流控芯片(microfluidic chip)作為用于測定C反應(yīng)蛋白的工具廣泛地得到研究。在由格威斯(Gervais)等進(jìn)行的研究中(12)，微流控芯片對濃度為1ng/mL的C反應(yīng)蛋白可檢測3分鐘，在14分鐘內(nèi)，可檢測濃度為Ing/mL以下的C反應(yīng)蛋白。在由喬斯森(Jonsson)等進(jìn)行的研究中(13)，側(cè)方流動聚合物芯片具有102的動態(tài)范圍，并擁有2.6ng/mL的檢測局限。并且，根據(jù)由格威斯等進(jìn)行的報(bào)告(12)，在0.01?1.0yg/mL范圍下，若C反應(yīng)蛋白濃度增加，則在C反應(yīng)蛋白濃度中，熒光信號強(qiáng)度減少。如在上述研究結(jié)果中所示，微流控芯片非常迅速且在低濃度下可實(shí)現(xiàn)測定，但在高濃度的C反應(yīng)蛋白測定、批量生產(chǎn)及相對費(fèi)用方面具有局限性(14-15)。為了克服這種局限性，開發(fā)了用于C反應(yīng)蛋白分析的垂直流動分析法(vertical flow assay,VFA)(16)。在這種研究中，在I分鐘內(nèi)，使用了比側(cè)方流動分析法(lateral flow assay，LFA)條狀生物傳感器更寬的動態(tài)范圍，但未覆蓋更寬的范圍的C反應(yīng)蛋白。
[0005]側(cè)方流動分析法條狀生物傳感器用于迅速、低費(fèi)用且一步免疫分析法中之一(17)?；贑反應(yīng)蛋白測試條的幾種類型的側(cè)方流動分析儀在商業(yè)上可購買，但在夾心免疫分析法中，由于呈現(xiàn)基于分析物的非常高的濃度的假陰性結(jié)果的鉤狀效應(yīng)(hook effect)，存在無法在人血清內(nèi)覆蓋C反應(yīng)蛋白濃度范圍的缺點(diǎn)(18?19)。因這種理由，大部分的商業(yè)用側(cè)方流動分析法條狀傳感器使用于高靈敏度C反應(yīng)蛋白(hsCRP)或心臟C反應(yīng)蛋白(cCRP)的診斷。但是，在由萊昂(Leung)等進(jìn)行的研究中(20)，在作為指示器使用金納米粒子(AuNPs)的“數(shù)字式”分析法或“條碼式”分析法中提供，在15分鐘內(nèi)，在測試中對紅色線的數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而檢測低濃度的C反應(yīng)蛋白，來預(yù)測初期心血管疾病(CVD)危險度或細(xì)菌及病毒感染的半定量(sem1-quant i tat i ve)側(cè)方流動分析法。這種側(cè)方流動分析法傳感器的測定目的根據(jù)各個疾病而不同，但使用多線測定法來檢測了相同的C反應(yīng)蛋白。需要開發(fā)用于可覆蓋廣泛濃度范圍O?500mg/L的C反應(yīng)蛋白分析的一步免疫傳感器。并且，側(cè)方流動分析法生物傳感器具有用于評價使用便利性、商業(yè)接近簡易性及制造費(fèi)用等迅速的診斷傳感器或即時檢驗(yàn)的質(zhì)量的重要的因素(21)。
[0006]本說明書全文中，參照了多篇論文及專利文獻(xiàn)，并表示了其引用。所引用的論文及專利文獻(xiàn)的公開內(nèi)容全部插入于本說明書作為參照，從而更加明確說明本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的水平及本發(fā)明的內(nèi)容。
[0007]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0008]非專利文獻(xiàn)
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