一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，包括以下步驟：將海水真空抽濾，然后pH調(diào)至2-4，再次真空抽濾得到預(yù)處理后的海水；用HLB固相萃取柱，海水過柱，萃取完成后用去離子水淋洗，負(fù)壓抽干，分2-5次洗脫，洗脫液在氮吹儀內(nèi)于30-35℃水浴中，氮?dú)獯蹈?，殘余物用乙醇?fù)溶，微孔納濾，濾液備用；使用高效液相色譜儀檢測氧氟沙星對映體的濃度。本發(fā)明對固相萃取條件進(jìn)行了優(yōu)化，使得固相萃取的時(shí)間縮短、效率變高，而高效液相色譜方法分析氧氟沙星對映體的濃度精度高，速度快，操作簡單、成本較低；檢測方法對目標(biāo)化合物的線性關(guān)系好，回收率高，相對偏差小，使用的試劑低毒，使用量少，對環(huán)境友好。
【專利說明】
一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種快速高效檢測海水中氧氟沙星對映體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]氧氟沙星是一種人工合成的廣譜抗菌藥，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、支原體、衣原體和軍團(tuán)桿菌等都有很好的抑制作用，此外，氧氟沙星還具有吸收良好、抑菌濃度低、抗菌活性高、不易產(chǎn)生耐藥菌、低毒等優(yōu)點(diǎn)，目前已在水產(chǎn)養(yǎng)殖中普遍使用。氧氟沙星是一種手性藥物，含有一個(gè)手性中心兩個(gè)手性對映體。已有研究表明，氧氟沙星的兩個(gè)對映體中左氧氟沙星是主要的活性成分，而右氧氟沙星的活性很低;另外，左氧氟沙星的抗菌活性也高于氧氟沙星外消旋體，而且更易溶于水，其水溶性是外消旋體的8倍。由于氧氟沙星的廣泛使用，對氧氟沙星的手性研究也較多，如曾蘇等以L-苯丙氨酸為配合劑，以Cu2+為配合離子，建立了一種簡便的手性配合交換反向高效液相色譜法拆分氧氟沙星對映體，該法已用于人尿中氧氟沙星對映體的分析;俞犄等以環(huán)糊精為拆分試劑，建立了一種高效毛細(xì)管電泳法拆分氧氟沙星對映體;邵兵等利用手性柱對氧氟沙星對映體進(jìn)行分離，并將此法應(yīng)用于水樣中氧氟沙星對映體的檢測。這些分離方法的建立，為氧氟沙星在生物體內(nèi)及環(huán)境中的選擇性行為研究提供了便利。
[0003]目前手性藥物對映體的常用分離方法有結(jié)晶法、動(dòng)力學(xué)方法、酶拆分法和色譜法等，這些方法應(yīng)用廣泛，促進(jìn)了手性藥物的研究和發(fā)展。然而，這些方法也存在一些不足之處，如結(jié)晶法操作繁瑣、分離時(shí)間長、適用性窄，酶拆分法對酶的專一性有較高要求，分離成本較高，而色譜拆分法是目前應(yīng)用最廣泛的一種方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于為了解決現(xiàn)有結(jié)晶法檢測氧氟沙星對映體成本高、分離時(shí)間長，適用性窄，操作復(fù)雜，精度不高的缺陷而提供一種快速、精度高，操作簡單、成本較低的檢測海水中氧氟沙星對映體的方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，包括以下步驟:
1)預(yù)處理:將海水真空抽濾，然后pH調(diào)至2-4，再次真空抽濾，0-4°C下保存，得到預(yù)處理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_對甲基二苯甲酰酒石酸，含檸檬酸銨的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步驟I)預(yù)處理后的海水過柱，萃取完成后用去離子水淋洗，負(fù)壓抽干，分
2-5次洗脫，洗脫液在氮吹儀內(nèi)于30-350C水浴中，氮?dú)獯蹈?，殘余物用乙醇?fù)溶，微孔納濾，濾液備用；
3)檢測:將步驟2)得到的濾液定量檢測氧氟沙星對映體的濃度。在本技術(shù)方案中，本發(fā)明所用的萃取方法效果好，時(shí)間短，降低了試劑的消耗量。
[0006]作為優(yōu)選，步驟2)中草酸水溶液中草酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-6.5%，梓檬酸錢的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.2-0.33 %。
[0007]作為優(yōu)選，步驟2)中海水過柱的流速為6-9mL/min。
[0008]作為優(yōu)選，步驟2)中洗脫液流速為1.2-1.5mL/min。
[0009 ] 作為優(yōu)選，步驟2)中洗脫液為含體積分?jǐn)?shù)10-13 %的甲醇溶液。
[0010]作為優(yōu)選，步驟3)是采用高效液相色譜儀檢測氧氟沙星對映體的濃度。
[0011 ]作為優(yōu)選，高效液相色譜的條件為:色譜柱:CHIRALCEL 0D-H;流動(dòng)相:正己烷-乙醇(20:80，v/v，乙醇中含有體積比為0.4 %的冰乙酸和0.5 %的三乙胺)；流速:0.7mL/min ；檢測波長:294nm ；進(jìn)樣量:20yL ；柱溫:25 °C。
[0012]本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明對固相萃取條件進(jìn)行了優(yōu)化，使得固相萃取的時(shí)間縮短、效率變高，而高效液相色譜方法分析氧氟沙星對映體的濃度精度高，速度快，操作簡單、成本較低;檢測方法對目標(biāo)化合物的線性關(guān)系好，回收率高，相對偏差小，使用的試劑低毒，使用量少，對環(huán)境友好。
【附圖說明】
[0013]圖1為對比試驗(yàn)的色譜圖。
[0014]圖中，A為S-(-)-0FL色譜圖；BSR-( + )-0FL色譜圖；C為空白海水色譜圖；D為氧氟沙星消旋體色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面通過【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
[0016]在本發(fā)明中，若非特指，所有設(shè)備和原料均可從市場購得或是本行業(yè)常用的，下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域常規(guī)方法。
[0017]高效液相色譜儀AgiIent 1200購自安捷倫(中國)科技有限公司；水浴氮吹儀WD-12購自河南天馳儀器設(shè)備有限公司；固相萃取儀HSE-12B購自天津市恒奧科技發(fā)展有限公司；固相萃取柱Waters Oasis HLB購自杭州伽鈦科學(xué)儀器有限公司；冰乙酸(分析純)、三乙胺(分析純)購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；S-(-)-0FL、R-( + )-0FL購自大賽璐藥物手性技術(shù)(上海)有限公司。
[0018]高效液相色譜的條件為:色譜柱:CHIRALCEL OD-H;流動(dòng)相:正己烷-乙醇(20:80，v/v，乙醇中含有體積比為0.4%的冰乙酸和0.5%的三乙胺)；流速:0.7mL/min;檢測波長:294nm ；進(jìn)樣量:20yL ；柱溫:25 °C。
[0019]實(shí)施例1
一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，包括以下步驟:
1)預(yù)處理:將海水真空抽濾，然后pH調(diào)至2，再次真空抽濾，0-4°C下保存，得到預(yù)處理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_對甲基二苯甲酰酒石酸，含檸檬酸銨的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步驟I)預(yù)處理后的海水過柱，過柱的流速為6mL/min，萃取完成后用去離子水淋洗，負(fù)壓抽干，分2次使用含體積分?jǐn)?shù)10 %的甲醇溶液洗脫，洗脫液流速為1.2mL/min，洗脫液在氮吹儀內(nèi)于30 0C水浴中，氮?dú)獯蹈?，殘余物用乙醇?fù)溶，0.2Ιμπι微孔納濾，濾液備用;草酸水溶液中草酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%，朽1檬酸錢的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%。
[0020]3)檢測:使用高效液相色譜儀檢測氧氟沙星對映體的濃度。
[0021]實(shí)施例2
一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，包括以下步驟:
1)預(yù)處理:將海水真空抽濾，然后pH調(diào)至3，再次真空抽濾，0-4°C下保存，得到預(yù)處理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_對甲基二苯甲酰酒石酸，含檸檬酸銨的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步驟I)預(yù)處理后的海水過柱，過柱的流速為7mL/min，萃取完成后用去離子水淋洗，負(fù)壓抽干，分3次使用含體積分?jǐn)?shù)12 %的甲醇溶液洗脫，洗脫液流速為1.3mL/min，洗脫液在氮吹儀內(nèi)于33 °C水浴中，氮?dú)獯蹈桑瑲堄辔镉靡掖紡?fù)溶，0.22μπι微孔納濾，濾液備用;草酸水溶液中草酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5.5%,檸檬酸銨的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.25 %。
[0022]3)檢測:使用高效液相色譜儀檢測氧氟沙星對映體的濃度。
[0023]實(shí)施例3
一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，包括以下步驟:
1)預(yù)處理:將海水真空抽濾，然后pH調(diào)至4，再次真空抽濾，0-4°C下保存，得到預(yù)處理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_對甲基二苯甲酰酒石酸，含檸檬酸銨的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步驟I)預(yù)處理后的海水過柱，過柱的流速為9mL/min，萃取完成后用去離子水淋洗，負(fù)壓抽干，分5次使用含體積分?jǐn)?shù)13 %的甲醇溶液洗脫，洗脫液流速為1.5mL/min，洗脫液在氮吹儀內(nèi)于35 °C水浴中，氮?dú)獯蹈?，殘余物用乙醇?fù)溶，0.23μπι微孔納濾，濾液備用;草酸水溶液中草酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6.5%,檸檬酸銨的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.33%。
[0024]3)檢測:使用高效液相色譜儀檢測氧氟沙星對映體的濃度。
[0025]分別稱取Img S-(-)-0FL、R-( + )-0FL和氧氟沙星消旋體，置于10mL容量瓶中，用空白海水定容，超聲搖勻后，實(shí)施例1的步驟經(jīng)高效液相色譜儀檢測后，所得色譜圖示于圖1；結(jié)果表明，S-(-)-OFL和R-( +)-OFL的色譜峰峰形良好，二者達(dá)到了基線分離，S_( -)-OFL和1?-( + )-0?1^的保留時(shí)間分別為11.21^11和15.11^11，分離度為1.56，海水中的雜質(zhì)不干擾氧氟沙星對映體的測定。對比圖1中A、B和D，確定圖D中的峰I為S-(-)-0FL，峰2為lH + )-0FL。
[0026]S-(- )-0FL 和R-( + )-0FL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別為y= 127.672x+4.27841 和y= 126.5752x+4.76896，R2分別為0.99908和0.99847，在0.05mg/L至5mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)預(yù)處理:將海水真空抽濾，然后pH調(diào)至2-4，再次真空抽濾，0-4°C下保存，得到預(yù)處理后的海水； 2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_對甲基二苯甲酰酒石酸，含檸檬酸銨的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步驟I)預(yù)處理后的海水過柱，萃取完成后用去離子水淋洗，負(fù)壓抽干，分2-5次洗脫，洗脫液在氮吹儀內(nèi)于30-350C水浴中，氮?dú)獯蹈?，殘余物用乙醇?fù)溶，微孔納濾，濾液備用； 3)檢測:將步驟2)得到的濾液定量檢測氧氟沙星對映體的濃度。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，步驟2)中草酸水溶液中草酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5-6.5%，朽1檬酸錢的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2-0.33%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，步驟2)中海水過柱的流速為6-9mL/min。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，步驟2)中洗脫液流速為1.2-1.5mL/min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，步驟2)中洗脫液為含體積分?jǐn)?shù)10-13%的甲醇溶液。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，步驟3)是采用高效液相色譜儀檢測氧氟沙星對映體的濃度。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種檢測海水中氧氟沙星對映體的方法，其特征在于，高效液相色譜的條件為:色譜柱:CHIRALCEL OD-H;流動(dòng)相:正己烷-乙醇(20:80，v/v，乙醇中含有體積比為0.4%的冰乙酸和0.5%的三乙胺)；流速:0.7 mL/min ；檢測波長:294 nm;進(jìn)樣量:20(L;柱溫:25 °C。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105823851SQ201510938597
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2015年12月15日
【發(fā)明人】歐陽小琨, 楊立業(yè), 王艷飛, 王陽光, 高小峰
【申請人】浙江海洋學(xué)院