一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，包括粉碎、酸浸、清洗、提取、高效液相色譜檢測(cè)步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)本發(fā)明所述方法通過(guò)對(duì)中藥飲片進(jìn)行預(yù)處理，使得真菌壁得到破碎，從而提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性；(2)本發(fā)明所述方法檢測(cè)黃曲霉毒素效率高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，設(shè)及一種真菌毒素檢測(cè)方法，尤其設(shè)及一種中藥飲片 中黃曲霉素的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 真菌毒素是真菌產(chǎn)生的有毒次生代謝產(chǎn)物，種類(lèi)繁多，廣泛污染農(nóng)作物、食品及飼 料等，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康，已經(jīng)引起了全球的廣泛關(guān)注。
[0003] 黃曲霉毒素(aflatoxins，簡(jiǎn)稱(chēng)AF)是由黃曲霉、寄生曲霉等多種菌株產(chǎn)生的一組 化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似的二巧喃香豆素類(lèi)真菌毒素。至今已分離出的黃曲霉毒素及其衍生物有二十 多種，主要包括黃曲霉毒素 Bl(AFBl)、黃曲霉毒素 B2(AFB2)、黃曲霉毒素 Gl(AFGl)和黃曲霉 毒素 G2(AFG2)等。黃曲霉毒素具有很強(qiáng)的肝毒性，其中WAFB1的毒性最強(qiáng)，1993年被世界衛(wèi) 生組織的癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC)劃定為I類(lèi)致癌物。目前，世界上已有六十多個(gè)國(guó)家對(duì)其進(jìn)行 限量控制，如歐盟規(guī)定直接供人類(lèi)食用的食物及組成食品組分中的AFB1含量不得大于化g/ kg; AFB1，AFB2，AFG巧日AFG2的總量不得大于化g/kg。
[0004] 中藥及其相關(guān)產(chǎn)品種類(lèi)繁多，藥材種植地區(qū)廣泛，在生產(chǎn)、加工、運(yùn)輸、膽存過(guò)程 中，很容易發(fā)生霉變而污染各種真菌，產(chǎn)生對(duì)人體有害的真菌毒素，中藥真菌毒素污染問(wèn)題 也引起了業(yè)內(nèi)人±的重視。2001年，中華人民共和國(guó)商務(wù)部公布了《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào) 綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》，規(guī)定黃曲霉毒素 B1限量應(yīng)小于等于扣g/kg?！吨袊?guó)藥典》2010年版一部收錄 了中藥中黃曲霉毒素 B1，B2，G1，G2的高效液相色譜巧光檢測(cè)方法，對(duì)桃仁、胖大海、陳皮等 中藥規(guī)定了 AFB1最高限量為扣g/kg，AF(Bl+B2+Gl+G2)最高限量為10yg/kg。因此，無(wú)論從保 障中藥及其相關(guān)產(chǎn)品的安全性，還是中藥進(jìn)出口的管理方面，均有必要建立一個(gè)真菌毒素 多殘留污染檢測(cè)的技術(shù)平臺(tái)，進(jìn)一步完善中藥及其產(chǎn)品的質(zhì)量管理規(guī)范。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中，常采用高效液相色譜巧光檢測(cè)方法來(lái)檢測(cè)黃曲霉毒素的含量，但是 該方法存在W下不足:首先黃曲霉毒素是一種真菌毒素，而真菌破壁較難，所W能夠檢測(cè)到 的毒素含量要低于實(shí)際含量，因而不利于檢測(cè)人員準(zhǔn)確判斷結(jié)果;其次，單純采用高效液相 色譜巧光檢測(cè)方法效率不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，獲得一種能夠準(zhǔn)確測(cè)定中 藥飲片中黃曲霉毒素含量，且檢測(cè)效率高的方法，本發(fā)明提供了一種中藥飲片中黃曲霉素 的檢測(cè)方法。
[0007] 技術(shù)方案:一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，包含W下步驟：
[000引（1)將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.3~1.7kW/h、轉(zhuǎn)速為2800~3200轉(zhuǎn)/分鐘、 每小時(shí)投入飲片量為2~化g，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為200~400目；
[0009] (2)將步驟（1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為0.5%~2.5%的乙酸中浸潤(rùn)0.5~3小 時(shí)，用蒸饋水沖洗至中性，并置于烘箱中在56~78Γ條件下烘干；
[0010] (3)將步驟(2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度78~84%乙臘提取，提取液振蕩10~25分 鐘，在4°C、6000~8000轉(zhuǎn)/分鐘條件下離屯、5~10分鐘，取上清液；
[0011] (4)采用高效液相色譜檢測(cè)步驟(3)中的上清液，流動(dòng)相為3~5mol/L的醋酸錠與 0.1~0.3%的乙酸按體積比1~3:1混合，流速為0.3~0.8mL/min，柱溫為24~28°C，樣品溫 度為4~6°C，進(jìn)樣體積為5~10化。
[0012] 優(yōu)選的，步驟（1)中將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.5kW/h、轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分 鐘、每小時(shí)投入飲片量為3.化g，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為300目。
[001引優(yōu)選的，步驟(2)中將步驟（1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為1.7%的乙酸中浸潤(rùn)2小 時(shí)，用蒸饋水沖洗至中性，并置于烘箱中在6%~條件下烘干。
[0014] 優(yōu)選的，步驟(3)中將步驟(2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度81%乙臘提取，提取液振 蕩20分鐘，在4°C、7000轉(zhuǎn)/分鐘條件下離屯、8分鐘，取上清液。
[0015] 優(yōu)選的，步驟(4)中將采用高效液相色譜檢測(cè)步驟(3)中的上清液，流動(dòng)相為4mol/ L的醋酸錠與0.2%的乙酸按體積比2:1混合，流速為0.6mL/min，柱溫為26°C，樣品溫度為5 °C，進(jìn)樣體積為化L。
[0016] 有益效果：（1)本發(fā)明所述方法通過(guò)對(duì)中藥飲片進(jìn)行預(yù)處理，使得真菌壁得到破 碎，從而提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性；（2)本發(fā)明所述方法檢測(cè)黃曲霉毒素效率高。
【具體實(shí)施方式】 [0017]實(shí)施例1
[001引一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，包含W下步驟：
[0019] (1)將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.3kw/h、轉(zhuǎn)速為2800轉(zhuǎn)/分鐘、每小時(shí)投入 飲片量為化g，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為200目；
[0020] (2)將步驟(1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為0.5% %的乙酸中浸潤(rùn)0.5小時(shí)，用蒸饋 水沖洗至中性，并置于烘箱中在56Γ條件下烘干；
[0021] (3)將步驟（2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度78%乙臘提取，提取液振蕩10分鐘，在4 °C、6000轉(zhuǎn)/分鐘條件下離屯、5分鐘，取上清液；
[0022] (4)采用高效液相色譜檢測(cè)步驟（3)中的上清液，流動(dòng)相為3mol/L的醋酸錠與 0.1 %的乙酸按體積比1:1混合，流速為0.3mL/min，柱溫為24°C，樣品溫度為4°C，進(jìn)樣體積 為化L。實(shí)施例2
[0023] -種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，包含W下步驟：
[0024] (1)將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.5kW/h、轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘、每小時(shí)投入 飲片量為3.化g，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為300目；
[0025] (2)將步驟(1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為1.7%的乙酸中浸潤(rùn)2小時(shí)，用蒸饋水沖 洗至中性，并置于烘箱中在6%~條件下烘干；
[0026] (3)將步驟（2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度81 %乙臘提取，提取液振蕩20分鐘，在4 °C、7000轉(zhuǎn)/分鐘條件下離屯、8分鐘，取上清液；
[0027] (4)采用高效液相色譜檢測(cè)步驟（3)中的上清液，流動(dòng)相為4mol/L的醋酸錠與 0.2%的乙酸按體積比2:1混合，流速為0.6mL/min，柱溫為26°C，樣品溫度為5°C，進(jìn)樣體積 為化L。實(shí)施例3
[002引一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，包含W下步驟：
[0029] (1)將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.7kW/h、轉(zhuǎn)速為3200轉(zhuǎn)/分鐘、每小時(shí)投入 飲片量為化g，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為400目；
[0030] (2)將步驟(1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為2.5%的乙酸中浸潤(rùn)3小時(shí)，用蒸饋水沖 洗至中性，并置于烘箱中在78Γ條件下烘干；
[0031] (3)將步驟（2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度84%乙臘提取，提取液振蕩25分鐘，在4 °C、8000轉(zhuǎn)/分鐘條件下離屯、10分鐘，取上清液；
[0032] (4)采用高效液相色譜檢測(cè)步驟（3)中的上清液，流動(dòng)相為5mol/L的醋酸錠與 0.3 %的乙酸按體積比3:1混合，流速為0.8mL/min，柱溫為28°C，樣品溫度為6°C，進(jìn)樣體積 為10化。
[0033] 采用上述實(shí)施例1~3所述的檢測(cè)方法對(duì)中藥飲片中的黃曲霉毒素進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果 如下表所示：
[0034]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，其特征在于，包含以下步驟： (1) 將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.3~1.7kW/h、轉(zhuǎn)速為2800~3200轉(zhuǎn)/分鐘、每小 時(shí)投入飲片量為2~5kg，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為200~400目； (2) 將步驟（1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為0.5 %~2.5 %的乙酸中浸潤(rùn)0.5~3小時(shí)，用 蒸餾水沖洗至中性，并置于烘箱中在56~78°C條件下烘干； (3) 將步驟（2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度78~84%乙腈提取，提取液振蕩10~25分鐘， 在4°C、6000~8000轉(zhuǎn)/分鐘條件下離心5~10分鐘，取上清液； (4) 采用高效液相色譜檢測(cè)步驟(3)中的上清液，流動(dòng)相為3~5mo 1/L的醋酸銨與0.1~ 0.3%的乙酸按體積比1~3:1混合，流速為0.3~0.8mL/min，柱溫為24~28°C，樣品溫度為4 ~6°C，進(jìn)樣體積為5~10yL。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟 (1) 中將中藥飲片加入粉碎機(jī)中，功率為1.5kW/h、轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分鐘、每小時(shí)投入飲片量 為3.5kg，粉碎研磨至粉狀，粉末粒徑為300目。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟 (2) 中將步驟(1)獲得的粉末置于質(zhì)量濃度為1.7%的乙酸中浸潤(rùn)2小時(shí)，用蒸餾水沖洗至中 性，并置于烘箱中在69 °C條件下烘干。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟 (3) 中將步驟(2)烘干后的粉末用質(zhì)量濃度81 %乙腈提取，提取液振蕩20分鐘，在4°C、7000 轉(zhuǎn)/分鐘條件下離心8分鐘，取上清液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥飲片中黃曲霉毒素的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟 (4) 中將采用高效液相色譜檢測(cè)步驟(3)中的上清液，流動(dòng)相為4mol/L的醋酸銨與0.2%的 乙酸按體積比2:1混合，流速為0.6mL/min，柱溫為26°C，樣品溫度為5°C，進(jìn)樣體積為6yL。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK105823844SQ201610272125
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】李建華
【申請(qǐng)人】蘇州市天靈中藥飲片有限公司