一種威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1：將威靈仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步驟2：將萃取液離心分離后，得到上清液；步驟3：將上清液采用液相色譜法進(jìn)行分析。本發(fā)明提供了一種威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，該方法操作簡單，檢測精度高，能夠有效的同時測定威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的含量。
【專利說明】
-種威靈仙中齊澈果酸和常春藤皂昔元的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及實(shí)驗(yàn)室檢測領(lǐng)域，特別是一種威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測 定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 2010年藥典記錄了提取威靈仙中常春藤皂巧元的方法:取本品粉末(過四號篩)約 4g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙酸乙醋適量，加熱回流3小時，棄去乙酸乙醋液，藥渣揮 干溶劑，連同濾紙筒轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放 冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置水浴上蒸 干，殘渣加2mol/L鹽酸溶液30ml使溶解，加熱回流2小時。立即冷卻，移入分液漏斗中，用水 IOml分次洗涂容器，洗液并入分液漏斗中。加乙酸乙醋振搖提取3次，每次15ml，合并乙酸乙 醋液，70°C W下濃縮至近干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0003] 其用液相色譜儀測定的方法為：W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；W乙臘-水 (90:10)為流動相;檢測波長為205nm。理論板數(shù)按齊墳果酸峰和常春藤皂巧元峰計算均應(yīng) 不低于3000。
[0004] 為了解決藥典方法中操作過于復(fù)雜的問題，我們通過大量實(shí)驗(yàn)得到了一種通過 ASE快速萃取法來分離和測試威靈仙中的齊墳果酸，具體來說，其萃取過程中分為除雜和提 取步驟，除雜步驟中溶劑為乙酸乙醋，提取步驟中的溶劑為稀乙醇，其能夠非常好的測定威 靈仙中的齊墳果酸，其與藥典方法測定的精度一致，但是在實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)，采用該ASE快 速萃取法來同時測定常春藤皂巧元時，其測定濃度偏低，雖然常春藤皂巧元和齊墳果酸的 化學(xué)簡式均為C30化8化，但是在提取過程中，還需要進(jìn)一步調(diào)整提取溶劑，才能同時測定常春 藤皂巧元和齊墳果酸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法，該方法 操作簡單，檢測精度高，能夠有效的同時測定威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的含量。
[0006] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法， 包括W下步驟：
[0007] 步驟1:將威靈仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[000引其中，所述的步驟1具體為：
[0009] Sll:將將威靈仙粉碎后與適量的石英砂混合；
[0010] S12:向鋪設(shè)有娃藻±的萃取池內(nèi)加入Sll中的混合物，然后加入石英砂使萃取池 內(nèi)的固體達(dá)到萃取池的池口，蓋上萃取池的蓋子進(jìn)行萃取;收集萃取液；
[0011] 萃取時分為兩步進(jìn)行，即脫脂步驟和提取步驟；
[0012] 所述的脫脂步驟時控制參數(shù)為：萃取溶劑為乙酸乙醋和乙酸甲醋；萃取溫度110 °C;靜態(tài)萃取時間3min;沖洗體積100%;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)1次；乙酸乙醋和乙酸甲醋的體積比 為 1:1;
[0013] 所述的提取步驟時控制參數(shù)為：萃取溶劑為乙醇、甲醇、水的混合溶液;萃取溫度 120°C;靜態(tài)萃取時間5min;沖洗體積100%;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)2次；乙醇、甲醇、水的混合溶液中 包括30wt %乙醇、15wt %甲醇和余量的水混合而成；
[0014] 步驟2:將萃取液離屯、分離后，得到上清液；
[0015] 步驟3:將上清液采用液相色譜法進(jìn)行分析；
[0016] 其中，液相色譜法的分析條件為：
[0017] a)儀器:雙立元液相色譜儀
[001引 b)色譜柱規(guī)格:碳30色譜柱2.1*150mm 3皿
[0019] C)柱溫：2(TC
[0020] d)流速:0.5mL/min
[0021] e)流動相：乙臘-水，體積比62:38
[0022] f)檢測波長:205nm。
[0023] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，所述的萃取池的體積 為10ml。
[0024] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，所述的脫脂步驟和提 取步驟中的操作壓力均為ISOOpsi。
[0025] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，所述的脫脂步驟和提 取步驟中的吹掃時間為60s。
[0026] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，步驟2具體為:將萃取 液置水浴上蒸干，殘渣加2mol/L鹽酸溶液30ml使溶解，加熱回流2小時;立即冷卻，移入分液 漏斗中，用水IOml分次洗涂容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙醋振搖提取3次，每次 15ml，合并乙酸乙醋液，70°C W下濃縮至近干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻 度，搖勻，在1500化/min下離屯、3min，取上清液。
[0027] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，所述的儀器為化ermo U3000UHPLC液相色譜儀。
[0028] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，所述的色譜柱為 Thermo Acclaim C30。
[0029] 在上述的威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法中，所述的ASE萃取法所 采用的儀器為ASE350快速溶劑萃取儀。
[0030] 本發(fā)明在采用上述技術(shù)方案后，其具有的有益效果為：
[0031 ]本發(fā)明的檢測方法操作簡單，精度與藥典方法的精度一致，重復(fù)性好，能夠有效的 同時測定威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的含量。
【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對 本發(fā)明的任何限制。
[0033] 實(shí)施例1:
[0034] -種威靈仙中齊墳果酸和常春藤皂巧元的測定方法，包括W下步驟：
[0035] 步驟I:將威靈仙粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0036] 其中，所述的步驟1具體為：
[0037] Sl 1:將將Ig威靈仙粉碎后與2g石英砂混合；
[0038] S12:向鋪設(shè)有Ig娃藻±的萃取池內(nèi)加入Sll中的混合物3g，然后加入石英砂使萃 取池內(nèi)的固體達(dá)到萃取池的池口，蓋上萃取池的蓋子進(jìn)行萃取;收集萃取液；
[0039] 萃取時分為兩步進(jìn)行，即脫脂步驟和提取步驟;脫脂步驟得到的溶液舍棄，提取步 驟得到的溶液作為萃取液；
[0040] 所述的脫脂步驟時控制參數(shù)為：萃取溶劑為乙酸乙醋和乙酸甲醋；萃取溫度110 °C ;靜態(tài)萃取時間3min ;沖洗體積100 % ;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)1次；操作壓力ISOOpsi ;吹掃時間 60s;乙酸乙醋和乙酸甲醋的體積比為1:1;
[0041] 所述的提取步驟時控制參數(shù)為：萃取溶劑為乙醇、甲醇、水的混合溶液;萃取溫度 120°C ;靜態(tài)萃取時間5min;沖洗體積100% ;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)2次;操作壓力ISOOpsi ;吹掃時間 60s;乙醇、甲醇、水的混合溶液中包括30wt %乙醇、15wt %甲醇和余量的水混合而成；
[0042] 步驟2:將萃取液置水浴上蒸干，殘渣加2mol/L鹽酸溶液30ml使溶解，加熱回流2小 時;立即冷卻，移入分液漏斗中，用水IOml分次洗涂容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙醋 振搖提取3次，每次15ml，合并乙酸乙醋液，70°C W下濃縮至近干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至IOml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在1500化/min下離屯、3min，取上清液；需要說明的是，本實(shí)施 例中所有設(shè)及體積比的參數(shù)均為20°C的條件下的體積比。
[0043] 步驟3:將上清液采用液相色譜法進(jìn)行分析；
[0044] 其中，液相色譜法的分析條件為：
[0045] a)儀器:Thermo U3000UHPLC雙S元液相色譜儀
[0046] b)色譜柱規(guī)格：ThermoAcclaimC30 2.1*150mm3um，即碳30色譜柱，直徑2.1mm， 長度 15〇111111，粒徑311111;
[0047] 。）柱溫：20。[
[004 引 d)流速:0.5mL/min
[0049] e)流動相：乙臘-水，體積比62:38
[(K)加]f)檢測波長：205nm。
[00引]對比例1
[0052]威靈仙樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過=號篩，約Ig,精密稱定，與適量石英砂混合均勻，待 用，在預(yù)先放好過濾膜的ASEKlOml萃取池中先加入Ig娃藻±，后加入混合均勻的樣品，再 加入適量石英砂，輕輕振搖使之與池口在同一水平線下2mm處，梓緊萃取池上蓋。萃取(包括 除雜和提取2步，見表1的A沈條件方法)結(jié)束后，置水浴上蒸干，殘渣加2mol/L鹽酸溶液30ml 使溶解，加熱回流2小時。立即冷卻，移入分液漏斗中，用水IOml分次洗涂容器，洗液并入分 液漏斗中。加乙酸乙醋振搖提取3次，每次15ml，合并乙酸乙醋液，70°C W下濃縮至近干，加 甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在1500化/min下離屯、3min，取上清液， 進(jìn)入LC測定即得。
[0化3] 表1
[0化4]
[0化5]
[0056] 1.1實(shí)施例1的萃取方法的重現(xiàn)性驗(yàn)證：
[0057] 取相同批號的樣品（批號：150410(Z))0.5g，共6份，精密稱定，按ASE提取方法提取 供試品溶液，進(jìn)樣量為化L，W上述的色譜條件平行試驗(yàn)，測得樣品中威靈仙的齊墳果酸和 常春藤皂巧元含量見表2，RSD為2%和1.68%，試驗(yàn)表明ASE提取方法重復(fù)性良好，結(jié)果詳見 表2;
[0化引 親2 [0化9]
[0060] 1.2實(shí)施例1的萃取方法的精確度測試
[0061] 采用實(shí)施例1的ASE萃取和檢測方法、對比例1的萃取和檢測方法W及藥典的萃取 和檢測方法對威靈仙進(jìn)行萃取和檢測，威靈仙為3批，批號分別為150410(Y)，1510124， 150410(Z);檢測結(jié)果如下表3;
[0062] 表 3
[0063]
[0064] W上所述的僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任 何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1:將威靈仙粉碎后米用ASE萃取法萃取得到萃取液； 其中，所述的步驟1具體為： Sl 1:將將威靈仙粉碎后與適量的石英砂混合； S12:向鋪設(shè)有硅藻土的萃取池內(nèi)加入SI 1中的混合物，然后加入石英砂使萃取池內(nèi)的 固體達(dá)到萃取池的池口，蓋上萃取池的蓋子進(jìn)行萃取;收集萃取液； 萃取時分為兩步進(jìn)行，即脫脂步驟和提取步驟； 所述的脫脂步驟時控制參數(shù)為：萃取溶劑為乙酸乙酯和乙酸甲酯；萃取溫度110°c;靜 態(tài)萃取時間3min;沖洗體積100%;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)1次；乙酸乙酯和乙酸甲酯的體積比為1:1; 所述的提取步驟時控制參數(shù)為：萃取溶劑為乙醇、甲醇、水的混合溶液；萃取溫度120 °C ;靜態(tài)萃取時間5min;沖洗體積100% ;靜態(tài)循環(huán)次數(shù)2次；乙醇、甲醇、水的混合溶液中包 括30wt %乙醇、15wt %甲醇和余量的水混合而成； 步驟2:將萃取液離心分離后，得到上清液； 步驟3:將上清液采用液相色譜法進(jìn)行分析； 其中，液相色譜法的分析條件為： a) 儀器:雙三元液相色譜儀 b) 色譜柱規(guī)格:碳30色譜柱2.1*150mm 3um d) 流速:0 · 5mL/min e) 流動相：乙腈-水，體積比62:38 f) 檢測波長：205nm〇2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 所述的萃取池的體積為l〇ml。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 所述的脫脂步驟和提取步驟中的操作壓力均為1500psi。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 所述的脫脂步驟和提取步驟中的吹掃時間為60s。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 步驟2具體為：將萃取液置水浴上蒸干，殘渣加2mol/L鹽酸溶液30ml使溶解，加熱回流2小 時;立即冷卻，移入分液漏斗中，用水IOml分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中；加乙酸乙酯 振搖提取3次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，70°C以下濃縮至近干，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至IOml 量瓶中，加甲醇至刻度，搖勾，在15000r/min下離心3min，取上清液。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 所述的儀器為Thermo U3000UHPLC液相色譜儀。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 所述的色譜柱為Thermo Acclaim C30〇8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的威靈仙中齊墩果酸和常春藤皂苷元的測定方法，其特征在于， 所述的ASE萃取法所采用的儀器為ASE350快速溶劑萃取儀。
【文檔編號】G01N30/02GK105954383SQ201610254599
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月22日
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 歐妮, 陳翠玲, 鐘水橋, 李仁喬
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所