β2-微球蛋白免疫層析定量檢測試紙條的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型屬于免疫檢測領域，具體涉及一種高靈敏度β 2-微球蛋白免疫層析定量檢測試紙條。
【背景技術】
[0002]β 2-微球蛋白(β 2-microglobulin，簡稱β 2-MG)是由淋巴細胞、血小板、多形核白細胞產生的一種小分子球蛋白，分子質量為11800，由99個氨基酸組成的單鏈多肽。廣泛存在于血漿、尿液、腦脊液、唾液以及初乳中。正常人β 2-微球蛋白的合成率及從細胞膜上的釋放量相當恒定，β 2-微球蛋白可以從腎小球自由濾過，99.9%在近端腎小管吸收，在局部被代謝降解為氨基酸，故而正常情況下β 2-微球蛋白的排出是很微量的，每天從腎小球濾過的約為340mg，但尿中每天最大排泄量只有370 μ g，僅占濾過總量的0.1 %。
[0003]血清β 2-微球蛋白的升高可反映腎小球濾過功能受損或濾過負荷是否增加的情況；而尿液中排出β 2-微球蛋白增高，則提示腎小管損害或濾過負荷增加；在急慢性腎盂腎炎時，因腎臟受損，故尿β 2-微球蛋白升高，而膀胱炎患者則β 2-微球蛋白正常；腎移植患者血、尿β 2-微球蛋白明顯增高，提示機體發(fā)生排斥反應，因β2-微球蛋白合成加速，雖腎清除增多，而血β 2-微球蛋白仍增高。因此測定血、尿中β 2-微球蛋白可用于估計肝炎、腎炎、類風濕關節(jié)炎，以及惡性腫瘤、免疫性疾病等疾病的活動程度，并作為觀察藥物療效的一項簡便、精確而又敏感指標。故而β 2-微球蛋白的測定在臨床上是有多種價值的。目前檢測β 2-微球蛋白的常用方法有:
[0004]I顆粒增強免疫比濁法:
[0005]該法樣品中的β 2-微球蛋白與包被膠乳顆粒上的抗人β 2-微球蛋白形成免疫復合物，產生的濁度與樣品中的β 2-微球蛋白含量呈正比，用比濁法進行測定，從而求得樣品中β 2-微球蛋白含量。該法簡便、快速、準確。
[0006]2放射免疫分析法:
[0007]放射免疫分析技術是利用同位素標記的與未標記的抗原，同抗體發(fā)生競爭性抑制反應的方法。該法是一種靈敏度高、較簡便的測量法，但其卻需要具備尖端復雜的設備，且成本也不低。同時，該技術還需要特殊的預防措施，因為其要用到放射性物質，存在放射線輻射和污染等問題。因此，如今放射免疫分析法在很大程度上已經被ELISA所取代。
[0008]3酶聯(lián)免疫吸附分析法:
[0009]該法用β 2-微球蛋白抗體包被微孔板制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入人β 2-微球蛋白，再與辣根過氧化物酶(HRP)標記的β 2-微球蛋白抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色，顏色的深淺和樣品中的β 2-微球蛋白呈正相關。該法具有快速、敏感、簡便、易于標準化等優(yōu)點。
[0010]生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system，BAS)，是一種新型生物反應放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應用于醫(yī)學各領域。將該系統(tǒng)應用于免疫組化，酶聯(lián)免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測技術中，可顯著地提高以上技術方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，使方法更簡便，有助于臨床快速診斷，并利于進行大規(guī)模流行病學調查，成為研宄免疫反應的有力工具。由于BAS檢測系統(tǒng)經濟快速，又無放射物質污染，不需復雜儀器，充分顯示了此系統(tǒng)的巨大潛力和應用的可能性。
[0011]生物素-親和素系統(tǒng)檢測原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎上，結合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個亞單位組成，對生物素有非常高的親和力(結合常數(shù)高達ΙΟ1、—1)。生物素很易與蛋白質(如抗體等)以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學特性的一種蛋白質，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結合一個生物素，因幾乎所有用于標記的物質均可以同親和素或鏈霉親合素結合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制β 2-微球蛋白檢測試快速診斷試劑尚無報道。
【實用新型內容】
[0012]本實用新型的目的，在于提供一種β 2-微球蛋白免疫層析定量檢測試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側向層析和生物素-鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供高靈敏度β 2-微球蛋白免疫層析定量檢測試紙條。使用本實用新型時，提高了檢測靈敏度和檢測穩(wěn)定性，降低了非特異性結合，檢測時間不大于10分鐘，大大提高了診斷效率。
[0013]本實用新型解決其技術問題的解決方案是2-微球蛋白免疫層析定量檢測試紙條，其包括底板，所述底板上依次設有樣品墊、熒光標記物結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標記物結合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標記物結合墊上，所述熒光標記物結合墊上固定有生物素標記的β 2-微球蛋白單克隆抗體和鏈霉親和素標記的熒光蛋白；所述檢測區(qū)內的硝酸纖維素膜上固定識別β 2-微球蛋白另外一個表位的單克隆抗體構成的檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構成的質控線。
[0014]作為上述技術方案的進一步改進，所述熒光標記物結合墊包括層疊的第一熒光標記物結合墊和第二熒光標記物結合墊，所述第一熒光標記物結合墊的一端墊在樣品墊的下方，所述第二熒光標記物結合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0015]作為上述技術方案的進一步改進，所述第一熒光標記物結合墊中插入樣品墊下方的一端設有定位條，所述樣品墊的下端面設有能容納定位條的定位槽。
[0016]作為上述技術方案的進一步改進，還包括卡殼，所述底板、樣品墊、熒光標記物結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內，所述卡殼殼面上對應于硝酸纖維膜的位置設有觀察窗，卡殼殼面上對應于樣品墊的位置設有加樣孔。
[0017]作為上述技術方案的進一步改進，所述觀察窗為矩形孔。
[0018]作為上述技術方案的進一步改進，所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白中的一種。
[0019]作為上述技術方案的進一步改進，所述樣品墊為經表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構件。
[0020]作為上述技術方案的進一步改進，所述底板為聚苯乙烯構件或者聚乙烯構件。
[0021]作為上述技術方案的進一步改進，所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼，所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0022]本實用新型與現(xiàn)有技術相比，具有如下優(yōu)點:
[0023](I)本實用新型將熒光蛋白作為標記物，此標記物穩(wěn)定性良好，有利于提高檢測穩(wěn)定性。
[0024](2)本實用新型通過利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”，提高檢測靈敏度，降低非特異性結合，有利于提高試劑盒性能。
[0025](3)利用本實用新型進行降鈣素原的檢測時間不大于10分鐘，檢測線性范圍為0.10ng/ml?100.00ng/ml，極大地提高了檢測效率。
[0026](4)本實用新型可通過熒光免疫分析儀對結果進行判讀，可實現(xiàn)自動化，減少主觀因素的影響，提供便利、快速、可靠的診斷結果。
[0027](5)本使用新型卡殼設有樣品進入的加樣孔和供觀測結果的觀察窗，根據(jù)分析儀器判定結果，準確可靠。
[0028](6)本實用新型制作方便，體積小、便于攜帶。
[0029](7)本實用新型檢測成本較低。
[0030](8)本實用新型可批量生產，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場快速診斷；易于保存，有利于基層單位推廣。
【附圖說明】
[0031]為了更清楚地說明本實用新型實施例中的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單說明。顯然，所描述的附圖只是本實用新型的一部分實施例，而不是全部實施例，本領域的技術人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設計方案和附圖。
[0032]圖1是本實用新型實施例一的結構示意圖；<