肌紅蛋白免疫層析定量檢測(cè)試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型屬于免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種高靈敏度肌紅蛋白免疫層析定量檢測(cè)試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]肌紅蛋白(Myoglobin，MYO)，是由一條肽鏈和一個(gè)血紅素輔基組成的結(jié)合蛋白，是肌肉內(nèi)儲(chǔ)存氧的蛋白質(zhì)，也是組成骨骼肌和心肌的主要蛋白質(zhì)。當(dāng)肌肉損傷時(shí)，MYO可以從肌肉組織中漏到循環(huán)血液中，使血清MYO濃度增加，該指標(biāo)用于判斷是否發(fā)生肌肉損傷。測(cè)定血清ΜΥ0，可作為急性心肌梗死(AMI)診斷的早期最靈敏的指標(biāo)，在外科手術(shù)方面也可作為觀察肌肉損傷情況的一個(gè)指標(biāo)。
[0003]目前，檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物諸多方法中均存在不足，如:酶聯(lián)免疫法、固相免疫層吸法、放射免疫分析法，操作繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、結(jié)果重復(fù)性差、核素污染、某些方法只能進(jìn)行定性檢測(cè)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法雖具有準(zhǔn)確、靈敏度高、特異性強(qiáng)、精密度好的優(yōu)點(diǎn)，但其所用儀器價(jià)格昂貴，所用試劑又為進(jìn)口試劑，一般實(shí)驗(yàn)室難以開(kāi)展，并且不適用于急診檢驗(yàn)。
[0004]目前檢測(cè)MYO的常用方法有:
[0005]I膠乳凝集法:
[0006]膠乳凝集法是臨床較常用的血清學(xué)方法，膠乳試劑用純化的抗人MYO抗體致敏，能和病人血清中MYO發(fā)生特異性反應(yīng)，數(shù)分鐘內(nèi)呈現(xiàn)清晰的凝集顆粒，出現(xiàn)凝集者為陽(yáng)性，未出現(xiàn)凝集者為陰性。此方法操作簡(jiǎn)單、快速，敏感性、特異性較高。但易受補(bǔ)體、類風(fēng)濕因子(RF)等因素的干擾，產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。
[0007]2免疫透射比濁法:
[0008]免疫透射比濁法原理是，利用抗原和抗體的特異性結(jié)合形成復(fù)合物，通過(guò)測(cè)定復(fù)合物形成量的多少對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量的方法。該法操作簡(jiǎn)便，適用于普通的自動(dòng)生化分析儀和普通的分光光度計(jì)，幾乎所有的實(shí)驗(yàn)室均能開(kāi)展。不足的是靈敏度和精密度均不夠理想，所需的抗血清量大，檢測(cè)的周期較長(zhǎng)。
[0009]3放射免疫法:
[0010]放射免疫法是最靈敏的血清MYO測(cè)定方法，利用MYO同1251標(biāo)記MYO競(jìng)爭(zhēng)有限的抗體，最低測(cè)定范圍為2ng/ml的水平，由于放射免疫法存在放射性同位素半衰期短，放射性污染不易保存，穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，使用中有諸多不便，尤其是酶免疫法的廣泛應(yīng)用，使該方法現(xiàn)在臨床上已很少采用。
[0011]生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system，BAS)，是一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。將該系統(tǒng)應(yīng)用于免疫組化，酶聯(lián)免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測(cè)技術(shù)中，可顯著地提高以上技術(shù)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，使方法更簡(jiǎn)便，有助于臨床快速診斷。
[0012]生物素-親和素系統(tǒng)檢測(cè)原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測(cè)系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個(gè)亞單位組成，對(duì)生物素有非常高的親和力(結(jié)合常數(shù)高達(dá)ΙΟ1、—1)。生物素很易與蛋白質(zhì)(如抗體等)以共價(jià)鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應(yīng)，既起到了多級(jí)放大作用，又由于酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)的催化作用而呈色，達(dá)到檢測(cè)未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學(xué)特性的一種蛋白質(zhì)，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個(gè)生物素，因幾乎所有用于標(biāo)記的物質(zhì)均可以同親和素或鏈霉親合素結(jié)合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制肌紅蛋白檢測(cè)試快速診斷試劑尚無(wú)報(bào)道。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0013]本實(shí)用新型的目的，在于提供一種肌紅蛋白免疫層析定量檢測(cè)試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供高靈敏度肌紅蛋白免疫層析定量檢測(cè)試紙條。使用本實(shí)用新型時(shí)，提高了檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)穩(wěn)定性，降低了非特異性結(jié)合，檢測(cè)時(shí)間不大于10分鐘，大大提高了診斷效率。
[0014]本實(shí)用新型解決其技術(shù)問(wèn)題的解決方案是:肌紅蛋白免疫層析定量檢測(cè)試紙條，其包括底板，所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測(cè)區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的肌紅蛋白單克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白；所述檢測(cè)區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識(shí)別肌紅蛋白另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測(cè)線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
[0015]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方，所述第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0016]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設(shè)有定位條，所述樣品墊的下端面設(shè)有能容納定位條的定位槽。
[0017]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，還包括卡殼，所述底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi)，所述卡殼殼面上對(duì)應(yīng)于硝酸纖維膜的位置設(shè)有觀察窗，卡殼殼面上對(duì)應(yīng)于樣品墊的位置設(shè)有加樣孔。
[0018]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述觀察窗為矩形孔。
[0019]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白中的一種。
[0020]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
[0021]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0022]作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼，所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0023]本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0024](I)本實(shí)用新型將熒光蛋白作為標(biāo)記物，此標(biāo)記物穩(wěn)定性良好，有利于提高檢測(cè)穩(wěn)定性。
[0025](2)本實(shí)用新型通過(guò)利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”，提高檢測(cè)靈敏度，降低非特異性結(jié)合，有利于提高試劑盒性能。
[0026](3)利用本實(shí)用新型進(jìn)行降鈣素原的檢測(cè)時(shí)間不大于10分鐘，檢測(cè)線性范圍為0.10ng/ml?100.00ng/ml，極大地提高了檢測(cè)效率。
[0027](4)本實(shí)用新型可通過(guò)熒光免疫分析儀對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，減少主觀因素的影響，提供便利、快速、可靠的診斷結(jié)果。
[0028](5)本使用新型卡殼設(shè)有樣品進(jìn)入的加樣孔和供觀測(cè)結(jié)果的觀察窗，根據(jù)分析儀器判定結(jié)果，準(zhǔn)確可靠。
[0029](6)本實(shí)用新型制作方便，體積小、便于攜帶。
[0030](7)本實(shí)用新型檢測(cè)成本較低。
[0031](8)本實(shí)用新型可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場(chǎng)快速診斷；易于保存，有利于基層單位推廣。
【附圖說(shuō)明】
[0032]為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單說(shuō)明。顯然，所描述的附圖只是本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設(shè)計(jì)方案和附圖。
[0033]圖1是本實(shí)用新型實(shí)施例一的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0034]圖2是本實(shí)用新型實(shí)施例二的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0035]圖3是本實(shí)用新型實(shí)施例三的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0036]圖4是本實(shí)用新型實(shí)施例四的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0037]以下將結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本