表雄酮和去氫表雄酮糖基化衍生物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥及其制備和應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種表雄酮糖基化衍生物 和去氫表雄酮糖基化衍生物及其制備方法和在制備抗乳腺癌藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤細(xì)胞的代謝比正常細(xì)胞旺盛，尤其是惡性腫瘤更為明顯。腫瘤細(xì)胞代謝的異 常使其對糖等物質(zhì)的需求更為迫切。糖綴合物的糖鏈大多存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞分泌的 蛋白上，與細(xì)胞通訊、信號傳遞密切相關(guān)。同時，糖類化合物對某些細(xì)胞具有特異性尋靶作 用，能夠進(jìn)行藥物的定向轉(zhuǎn)運。糖基部分可以通過增加藥物的溶解性，提高其與腫瘤細(xì)胞 結(jié)合的特異性，從而改變母體藥物的藥理活性。有研究表明在kryptogenin的C-3位和 C-26位通過糖苷鍵同時引入單糖得到糖基化修飾的留體衍生物如式A和式B所示，其對宮 頸癌HeLa細(xì)胞株表現(xiàn)出優(yōu)于母體10倍的抑制作用，半數(shù)抑制濃度IC 5。分別為4. 25 y M和 8. 36 y M(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters, 2007, 17 (1):156-160);留體糖衍生 物具有強效的廣譜抗腫瘤活性，甚至對于白血病耐藥細(xì)胞以及各種肺癌細(xì)胞株同樣有效。
[0004]如式C所示化合物，其抗腫瘤活性（IC5。）是一些常規(guī)臨床抗癌藥如嘧 P比霉素C、阿霉素、喜樹堿以及紫杉醇等的10至100倍（Carbohydrate Resear ch，2002, 337 (14) : 1269-1274)。構(gòu)效關(guān)系分析表明留體母核以及糖基結(jié)構(gòu)是該類化合物保 持高效抗腫瘤活性的關(guān)鍵。
[0005] 去氫表雄酮是人體外周循環(huán)中的最常見的內(nèi)源性留體激素，其主要由腎上腺皮質(zhì) 分泌，是生物合成雄激素和雌激素的重要前體物質(zhì)。表雄酮是去氫表雄酮在人體代謝過程 中的重要中間產(chǎn)物之一。作為合成各種留體激素類藥物的重要中間體，去氫表雄酮和表雄 酮及其衍生物的抗腫瘤活性在近些年來受到了越來越多的關(guān)注。有研究表明，體內(nèi)去氫表 雄酮具有廣泛的生物學(xué)活性。目前，從去氫表雄酮的衍生物阿比特龍（Abiraterone)已成 為治療去勢抵抗性前列腺癌的重要藥物；近期中國專利（專利【申請?zhí)枴?01410682215. 6)報 道了表雄酮C-16、C-17位稠合噻二唑環(huán)衍生物（CH21)和去氫表雄酮C-16、C-17位稠合噻 二唑環(huán)衍生物（CH12)具有較好的抑制乳腺癌細(xì)胞株T47D增殖活性。
[0006]以CH12和CH21作為先導(dǎo)化合物，并引入糖基結(jié)構(gòu)改善其水溶性，進(jìn)而增強其抗腫 瘤活性及選擇性，對開發(fā)新的抗腫瘤藥物的具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提出了一種表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖 基化衍生物及其制備方法，將苯甲酰保護(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯與CH21或CH12為原料，形 成糖苷鍵；然后脫除糖環(huán)的苯甲?；Ｗo(hù)基，得到所述的表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄 酮糖基化衍生物。本發(fā)明的制備方法簡單，合成路線短，原料簡單易得，適合工業(yè)化的大規(guī) 模生產(chǎn)。
[0008] 本發(fā)明提出了一種表雄酮糖基化衍生物，其結(jié)構(gòu)如式（1)所示：
[0012] 四種中的一種。
[0013] 本發(fā)明還提出的一種去氫表雄酮糖基化衍生物，所述去氫表雄酮糖基化衍生物結(jié) 構(gòu)如式⑵所示：
[0017] 四種中的一種。
[0018] 本發(fā)明還提出一種表雄酮糖基化衍生物的制備方法，所述方法包括：（1)偶聯(lián)反 應(yīng)：將苯甲酰保護(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯與式（m)所示的表雄酮C-16、C_17位稠合噻二唑 環(huán)衍生物CH21在溶劑二氯甲烷中，在三氟甲磺酸三甲基硅脂的催化下室溫進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng) 6-12小時，形成糖苷鍵，其中，苯甲?；Ｗo(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯作為單糖活性給體，結(jié) 構(gòu)如式（A-3)、（B-3)、（C-3)或（D-3)所示；（2)脫保護(hù)：在體積比為1 :1的無水四氫呋喃 和甲醇的混合溶劑中，甲醇鈉為堿水解苯甲?；覝貤l件下反應(yīng)3-6小時，脫除糖環(huán)苯甲 酰基保護(hù)基得到一類如式（1)所示的表雄酮糖基化衍生物；
[0019] 其中，優(yōu)選地，所述表雄酮糖基化衍生物的結(jié)構(gòu)式如式（A-5-1)、式（B-5-1)、式 (C-5-1)和或式（D-5-1)所示。
[0022] 其中，苯甲酰基保護(hù)的D-葡萄糖三氯乙酰亞胺酯（A-3)、苯甲?；Ｗo(hù) 的D-甘露糖三氯乙酰亞胺酯（B-3)、苯甲?；Ｗo(hù)的D-鼠李糖三氯乙酰亞胺酯 (C-3)和苯甲酰基保護(hù)的D-半乳糖三氯乙酰亞胺酯（D-3)的制備過程可參照文獻(xiàn) Journal of Shenyang Pharmaceutical University, 2005, 22(5) :352-354 ；Tetrahedr on, 2008, 64(30-31) :7386-7399 !Tetrahedron Letters, 2005, 46(31):2445-2448。
[0023] 其中，CH21化合物的制備過程為：以表雄酮為原料，經(jīng)羥基保護(hù)、縮合反 應(yīng)、關(guān)環(huán)反應(yīng)、羥基脫保護(hù)反應(yīng)得到如下式，制備過程參照中國專利（專利【申請?zhí)枴?201410682215. 6)〇
[0024]
[0025] 本發(fā)明還提出的一種去氫表雄酮糖基化衍生物的制備方法，所述方法包括：（I) 偶聯(lián)反應(yīng)：將苯甲酰保護(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯與式（n)所示的去氫表雄酮C-16、C_17位 稠合噻二唑環(huán)衍生物CH12在溶劑二氯甲烷中，在三氟甲磺酸三甲基硅脂的催化下進(jìn)行偶 聯(lián)反應(yīng)6-8小時，形成糖苷鍵，其中，苯甲酰基保護(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯作為單糖活性給 體，結(jié)構(gòu)如式（A-3)、（B-3)、（C-3)或（D-3)所示；（2)脫保護(hù)：在體積比為1 :1的無水四氫 呋喃和甲醇的混合溶劑中，甲醇鈉為堿水解苯甲酰基，室溫條件下反應(yīng)3-6小時，脫除糖環(huán) 苯甲酰基保護(hù)基得到一類如式（2)所示的去氫表雄酮糖基化衍生物；
[0026] 其中，優(yōu)選地，所述去氫表雄酮糖基化衍生物的結(jié)構(gòu)式如式（A-5-2)、式（B-5-2)、 式（C-5-2)或式（D-5-2)所示。
[0029] 其中，CH12化合物的制備過程為：以去氫表雄酮為原料，經(jīng)羥基保護(hù)、縮合 反應(yīng)、關(guān)環(huán)反應(yīng)、羥基脫保護(hù)反應(yīng)得到如下式，制備過程參照中國專利（專利【申請?zhí)枴?201410682215. 6)〇
[0030]
[0031] 本發(fā)明制備方法中，以上反應(yīng)采用薄板層析法來跟蹤監(jiān)測反應(yīng)的完成程度，反應(yīng) 完畢后采用濃縮、萃取、柱層析分離等對合成產(chǎn)物進(jìn)行后處理，最終產(chǎn)物通過核磁共振譜。
[0032] 本發(fā)明還提供了表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化衍生物在制備抗乳腺 癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明表雄酮和去氫表雄酮衍生物在抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、迀移和克隆 形成方面具顯著效果，且對于乳腺癌細(xì)胞（T47D)與正常的成纖維細(xì)胞（HAF)具有較好的選 擇性。
[0033] 本發(fā)明抗乳腺癌的表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化衍生物及其制備方 法的優(yōu)點包括，將苯甲酰保護(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯分別與CH21及CH12反應(yīng)，形成糖苷 鍵，然后脫除糖環(huán)苯甲?；Ｗo(hù)基分別得到一類表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化 衍生物。本發(fā)明制備方法的反應(yīng)條件溫和、所用試劑價格便宜、環(huán)境友好、合成路線短，合成 方法簡便。
[0034] 本發(fā)明制備方法中，將表雄酮和去氫表雄酮的C-16、C-17位分別引入噻二唑環(huán)得 到CH21和CH12,分別與苯甲酰保護(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯形成糖苷鍵，然后脫除糖環(huán)苯甲 酰基保護(hù)基分別得到一類表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化衍生物。抗腫瘤活性測 試結(jié)果如圖1所示，圖1和表明本發(fā)明所制備的表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化 衍生物均具有抗腫瘤活性，特別是表雄酮糖基化衍生物C-5-1和去氫表雄酮糖基化衍生物 C-5-2分別在I. 0 y M濃度和0. 2 y M濃度時表現(xiàn)出比其母體化合物CH21和CH12更強的抑 制T47D細(xì)胞增殖的活性；，表1表示本發(fā)明表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化衍生 物對人源乳腺癌細(xì)胞株T47D及人源成纖維細(xì)胞HAF (正常細(xì)胞）的半數(shù)抑制濃度；由表1 可以看出本發(fā)明的化合物C-5-1和C-5-2表現(xiàn)出比母體化合物CH21更強的抑制T47D細(xì)胞 增殖活性，并且具有對腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的殺傷選擇性；并且這種增殖抑制作用還具有 對腫瘤細(xì)胞的明顯選擇性，特別是化合物表雄酮糖基化衍生物C-5-1 (ICMHAF/ICMT47D = 1247,其中HAF為正常細(xì)胞，T47D為乳腺癌細(xì)胞）。同時C-5-1還在較低濃度下表現(xiàn)出了 顯著的對乳腺癌細(xì)胞克隆的抑制活性（IC 5。= 0. 1360 yM)和對乳腺癌細(xì)胞迀移的抑制活性 (IC5。= 9. 478 yM)。本發(fā)明所制備的表雄酮糖基化衍生物和去氫表雄酮糖基化衍生物可作 為潛在腫瘤治療藥物，特別是某一特定類型乳腺癌的治療藥物，具有良好應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0035] 圖1表示本發(fā)明表雄酮糖基化衍生物、去氫表雄酮糖基化衍生物在0.2yM濃度 和I. 0 y M濃度時分別對人源乳腺癌細(xì)胞系T47D的體外細(xì)胞毒活性即增殖抑制活性；結(jié)果 表明化合物 A-5-l、B-5-l、C-5-l、D-5-l、A-5-2、B-5-2、C-5-2、D-5-2 對人源乳腺癌細(xì)胞系 T47D均有一定的增殖抑制活性，其中的化合物C-5-1和C-5-2對人源乳腺癌細(xì)胞株T47D的 抑制活性相對各自母體化合物CH21和CH12均有明顯提高。
[0036] 圖2表示表雄酮糖基化衍生物C-5-1對人源乳腺癌細(xì)胞株T47D細(xì)胞迀移活性的 抑制。結(jié)果表明化合物C-5-1能夠在較低濃度下顯著抑制人源乳腺癌細(xì)胞株T47D的迀移。
[0037] 圖3表示表雄酮糖基化衍生物C-5-1對人源乳腺癌細(xì)胞株T47D克隆形成的抑制。 結(jié)果表明C-5-1能夠在較低濃度下顯著抑制T47D的克隆形成。
【具體實施方式】
[0038] 結(jié)合以下具體實施例和附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容 不局限于以下實施例。在不背離發(fā)明構(gòu)思的精神和范圍下，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到的變 化和優(yōu)點都被包括在本發(fā)明中，并且以所附的權(quán)利要求書為保護(hù)范圍。
[0039] 實施本發(fā)明的過程、條件、試劑、實驗方法等，除以下專門提及的內(nèi)容之外，均為本 領(lǐng)域的普遍知識和公知常識，本發(fā)明沒有特別限制內(nèi)容。下述實施例中，化合物結(jié)構(gòu)由核 磁共振儀測定；試劑主要由上海國藥化學(xué)試劑公司提供；產(chǎn)品純化主要通過柱色譜，硅膠 (200-300)由青島海洋化工廠生產(chǎn)。
[0040] 實施例1 :苯甲?；Ｗo(hù)的單糖三氯乙酰亞胺酯單糖的制備（制備過程參照文 南犬 Journal of Shenyang Pharmaceutical University, 2005, 22(5):352-354 ；Tetrahedr on, 2008, 64(30-31):7386-7399 tetrahedron Letters, 2005, 46(31):2445-2448)
[0041 ]
[0042]【式（A-I)所示化合物】將 D-葡萄糖（900mg, 5mmol)，DMAP(244mg, 2mmol)溶解 在無水吡啶（30mL)中，加入苯甲酰氯（5mL)，室溫反應(yīng)6小時。反應(yīng)完全后，向反應(yīng)液中 加入稀鹽酸（100ml)，乙酸乙酯（30mlX3)萃取，合并有機(jī)相，飽和食鹽水（30mlX2)洗 滌，無水Na2S04干燥，濃縮，硅膠柱層析（PE :EA = 3 :1)純化，得如式（A-I)所示的白 色固體（3. 36g，96 % )。IH NMR(400MHz，CDC13) S 8. 18(d，J = 7. 4Hz，2H)，8. 04(d，J = 7. 5Hz, 2H), 7. 96 (d, J = 7. 5Hz, 2H), 7. 89 (d, J = 7. 9Hz, 4H), 7. 67 (t, J = 7. 4Hz, 1H) ,7.59-7. 50(m, 4H), 7. 44(dd, J = 12. 3, 7. 2Hz, 3H), 7. 37 (dd, J = 14. 4, 6. 7Hz, 3H), 7. 31 (t, J