的培養(yǎng)
幼胚的培養(yǎng)基為DKW(Driver and Kuniyuki，1984)培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA(6-芐氨基嘌呤)1.0mg/L，IBA(吲哚丁酸)0.01mg/L。首先在4°C冰箱中放3周，然后在25°C條件下暗培養(yǎng)3周。這時(shí)幼胚已經(jīng)萌發(fā)，長出胚根和嫩莖，將胚根切去，僅留嫩莖，放培養(yǎng)室光照下培養(yǎng)，每天光照時(shí)間16小時(shí)，溫度25°C ;
(4)胚培苗的繼代
將高約3_4cm的胚培苗，截成1.5-2.0cm長的莖段，進(jìn)行繼代，繼代培養(yǎng)基以DKW為基本培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑BA 2.0mg/L，IBA 0.0lmg/L。培養(yǎng)條件:光照下培養(yǎng)，每天光照時(shí)間16小時(shí)，溫度25°C。
[0012](5)胚培苗的生根誘導(dǎo)
將高約5-6cm的繼代胚培苗，插入生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為DKW培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑IBA 10mg/L，培養(yǎng)條件:暗培養(yǎng)一周，溫度25°C。
[0013](6)胚培苗的生根和煉苗
將生根誘導(dǎo)后的嫩莖，移栽到生根基質(zhì)中?；|(zhì)配比如下，泥炭:珍珠巖:蛭石為3:1:1。將移栽好的苗盤，放入濕度100%的迷霧小棚中，保持2周直到嫩莖生根，且根長3cm以上，每個(gè)苗至少有3條根以上。將達(dá)到這一標(biāo)準(zhǔn)的幼苗移栽到濕度為85%的迷霧小棚中繼續(xù)煉苗I周，然后逐漸降低濕度，直到可以適應(yīng)普通大棚中的環(huán)境。
[0014](7)胚培苗的移栽
將煉好苗的胚培苗移栽到營養(yǎng)缽中，正常管理，當(dāng)胚培苗長高到50cm以上，移栽到大田。并按大田日常管理程序進(jìn)行即可。
[0015]特別注意的是，步驟(I)中雜交幼果的獲取時(shí)間很重要，過早幼胚培養(yǎng)不容易成功;過晚，幼果容易脫落。幼果消毒后，在超凈工作臺(tái)上準(zhǔn)備取出幼胚前，一定要在5%的次氯酸鈉中浸泡，不能只用無菌水，以確保幼果無菌。步驟(3)中獲得的幼胚必須在4°C冰箱中放3周，否則胚萌發(fā)很慢，且萌發(fā)不一致，畸形苗多。步驟(5)中，胚培苗莖段在生根誘導(dǎo)階段，必須暗培養(yǎng)一周，這是誘發(fā)根原基的基本條件，否則很難發(fā)根。
[0016]上述方法將幼胚培養(yǎng)技術(shù)同常規(guī)育種程序相結(jié)合，借助幼胚培養(yǎng)技術(shù)可以克服遠(yuǎn)緣雜交中胚敗育，能夠縮短育種周期的特性，迅速選育出抗性強(qiáng)的核桃砧木新品種，是一種高效的核桃砧木種間雜交新技術(shù)，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了核桃雜交種的快速繁殖及縮短雜交育種的周期，克服了傳統(tǒng)核桃種間遠(yuǎn)緣雜交后雜種胚的敗育問題，提供了新的有效育種途徑。
[0017]最后應(yīng)說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照本發(fā)明實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，都不脫離本發(fā)明的技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種核桃與核桃楸種間雜交幼胚培養(yǎng)的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)、雜交果的獲得及其無菌化處理 以優(yōu)良核桃為父本，核桃楸為母本，進(jìn)行雜交，雜交60天后取幼果，并進(jìn)行無菌化處理； (2)幼胚的獲得 在超凈工作臺(tái)上，將幼果用無菌紙包裹，然后打開果核后，看到置于核桃頂端、夾在兩片子葉間的幼胚，將幼胚取出放入有培養(yǎng)基的試管中，進(jìn)行培養(yǎng)； (3)幼胚的培養(yǎng) 幼胚的培養(yǎng)基為DKW培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA 1.0mg/L,IBA 0.0lmg/ L;培養(yǎng)條件:首先在4°C冰箱中放3周，然后在25°C條件下暗培養(yǎng)3周；待幼胚萌發(fā)，長出胚根和嫩莖，將胚根切去，僅留嫩莖，放培養(yǎng)室光照下培養(yǎng)，每天光照時(shí)間16小時(shí)，溫度25°C ； (4)胚培苗的繼代 將高為3-4cm的胚培苗截成1.5-2.0cm長的莖段，進(jìn)行繼代，繼代培養(yǎng)基以DKW為基本培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑BA 2.0mg/ L和IBA 0.0 lmg/ L;培養(yǎng)條件:光照下培養(yǎng)，每天光照時(shí)間16小時(shí)，溫度25°C; (5)胚培苗的生根誘導(dǎo) 將高為5_6cm繼代胚培苗，插入生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基以DKW為基本培養(yǎng)基，附加植物生長調(diào)節(jié)劑IBA 10mg/L，培養(yǎng)條件:暗培養(yǎng)一周，溫度25°C ; (6)胚培苗的生根和煉苗 將生根誘導(dǎo)后的嫩莖，移栽到生根基質(zhì)中；將移栽好的苗盤，放入濕度100%的環(huán)境中，直到嫩莖生根，且根長3cm以上，每個(gè)苗至少有3條根以上;將達(dá)到這一標(biāo)準(zhǔn)的幼苗移栽到濕度為85%的環(huán)境中繼續(xù)煉苗I周，然后逐漸降低濕度，直到可以適應(yīng)普通大棚中的環(huán)境； (7)胚培苗的移栽 將煉好苗的胚培苗移栽到營養(yǎng)缽中，正常管理，當(dāng)胚培苗長高到50cm以上，移栽到大田，并按大田日常管理程序進(jìn)行即可。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核桃與核桃楸種間雜交幼胚培養(yǎng)的方法，其特征在于:步驟(I)中，無菌化步驟為:將幼果用流水沖洗干凈；用70%酒精浸泡30秒，在20%次氯酸鈉溶液中浸泡20分鐘，然后浸泡在5%的次氯酸鈉溶液中，放在超凈工作臺(tái)上備用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核桃與核桃楸種間雜交幼胚培養(yǎng)的方法，其特征在于:步驟(6)中，生根基質(zhì)配比如下，泥炭:珍珠巖:蛭石為3:1:1。
【專利摘要】本發(fā)明為一種核桃與核桃楸種間雜交幼胚培養(yǎng)的方法，解決了核桃雜交種的快速繁殖及縮短雜交育種的周期，并為克服核桃種間遠(yuǎn)緣雜交后雜種胚的敗育提供了新的有效育種途徑。具體步驟如下：1）雜交果的獲得及其無菌化處理；2）幼胚的獲得；3）幼胚的培養(yǎng)；4）胚培苗的繼代；5）胚培苗的生根誘導(dǎo)；6）胚培苗的生根和煉苗；7）胚培苗的移栽。本發(fā)明方法是將幼胚培養(yǎng)技術(shù)同常規(guī)育種程序相結(jié)合，借助幼胚培養(yǎng)技術(shù)可以克服遠(yuǎn)緣雜交中胚敗育，能夠縮短育種周期的特性，迅速選育出抗性強(qiáng)的核桃砧木新品種，是一種高效的核桃砧木種間雜交新技術(shù)。
【IPC分類】A01H1/02, A01H4/00
【公開號(hào)】CN105638482
【申請?zhí)枴?br>【發(fā)明人】王國平, 陳秋芳, 史華平, 喬永勝, 張擁兵, 樊新萍, 田鑫, 茹慧玲
【申請人】山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年3月25日