雞肉中8種糖皮質激素類藥物殘留檢測的前處理方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學的前處理領域，更具體涉及一種雞肉中8種糖皮質激素檢測 的前處理方法。
【背景技術】
[0002] 糖皮質激素屬于類固醇激素（留體激素)，糖皮質激素在體內作用廣泛，不僅為糖、 蛋白質、脂肪代謝的調控所必需，且具有調節(jié)鉀、鈉和水代謝的作用，對維持機體內外環(huán)境 平衡起重要作用。
[0003] 糖皮質激素屬于畜產品常用的藥物，它常被用于治療家畜的炎癥反應、免疫性疾 病、牛的酮病等。合成類糖皮質激素普遍的非法用途是用于增加家畜的飼料攝入量從而使 其達到增重的目的。畜牧業(yè)中使用該激素已有60年的歷史，在特定的飼養(yǎng)條件下，它可以 提高飼料轉化率，但同時也會造成激素在食品中的殘留，從而對人類健康構成危險，如果 長期攝入該類藥物會導致內分泌紊亂和性早熟，大大增加致癌、致畸的風險。作為生長促 進劑已被歐盟禁用并且建立最大殘留限量的有地塞米松、倍他米松(肝臟：2yg/kg ;肌肉： 0. 75 y g/kg ;牛奶：0. 3 y g/L)，甲基潑尼松龍(肌肉，脂肪，肝臟，腎臟：10 y g/kg)及潑尼 松龍(肌肉，脂肪：4 y g/kg ;牛奶：6 y g/L ;肝臟，腎臟：10 y g/kg)。2008年，國家農業(yè)部將 "動物源性食品中糖皮質激素類藥物多殘留檢測"立項，該標準同時測定8種糖皮質激素， 規(guī)定檢出限潑尼松、潑尼松龍、甲基潑尼松龍、地塞米松、倍他米松(肌肉，雞蛋：〇. 5 y g/kg， 肝臟：1 y g/kg ;牛奶：0. 2 y g/L)，倍氯米松、氟氫可的松(肌肉，雞蛋y g/kg，肝臟：2 y g/ kg ;牛奶：0. 4 y g/L)，氫化可的松(肌肉，雞蛋：2 y g/kg，肝臟：4 y g/kg ;牛奶：0. 8 y g/L)。
[0004] 鑒于上述原因，有必要研宄糖皮質激素多殘留的有效檢測方法，達到有效監(jiān)控其 在食品中殘留，減少對人類健康的危害?，F(xiàn)階段對于糖皮質激素多殘留的檢測方法多樣，但 都包含了樣品前處理過程。前處理過程包括液液萃取、旋轉蒸發(fā)、固相萃取、氮氣吹干等步 驟。前處理過程中多需要使用有機溶劑反復多次萃取，之后使用硅膠柱等固相萃取柱除去 雜質和油脂的干擾，洗脫液還得氮氣吹干，最后才能定容上機測定。此類前處理技術的關鍵 缺點是反復萃取損失大、處理過程耗時長、經濟成本高、過程繁瑣。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種操作簡單、耗時短的雞肉中8 種糖皮質激素類藥物檢測的前處理方法，經該方法處理后的待測樣品能夠直接用液相色 譜-串聯(lián)質譜法進行檢測。
[0006] 本發(fā)明的雞肉中8種糖皮質激素類藥物殘留檢測的前處理方法包括以下步驟： (1)準確稱取樣品2.00 g，精確至0.01 g，置于50 mL離心管中，加入15 mL乙酸乙醋， 漩渦混合，4000 r/min離心15 min，移取乙酸乙酯層；于殘渣中加入0. 1 mol/L氫氧化鈉溶 液10 mL，混勾，加乙酸乙醋20 mL，漩禍混合，4000 r/min離心15 min，移取乙酸乙醋層；合 并兩次提取液置于雞心瓶中，40 °C旋轉蒸至近干； (2)往雞心瓶中加入2 mL體積分數(shù)為10°/『50%的乙腈水溶液和2 mL正己烷，漩渦混 合，靜置分層，移取下層溶液，過〇. 22 y m微孔濾膜，所得濾液即可上機測試。
[0007] 所述雞肉樣品中8種糖皮質激素類藥物殘留包括潑尼松、潑尼松龍、氫化可的松、 甲基潑尼松、地塞米松、倍他米松、倍氯米松、氟氫可的松乙酸鹽。
[0008] 步驟（2)中乙腈水溶液的體積分數(shù)為20%。
[0009] 本發(fā)明的前處理方法與現(xiàn)有國標方法農業(yè)部1031號公告-2-2008相比，具有操作 簡單有效、耗時短、成本低、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，具有很強的可操作性。
[0010] 本發(fā)明的顯著優(yōu)點為： 1) 目前報導的大部分糖皮質激素類藥物的提取方法是針對牛奶、化妝品、飼料等而設 計，而本方法是針對雞肉中8種糖皮質激素類藥物殘留檢測的一種提取方法； 2) 目前報道的前處理方法都需要使用Silica固相萃取柱將8種糖皮質激素類藥物從 基質中分離出來凈化，而本方法不需要使用固相萃取柱從而節(jié)省了前處理成本、簡化了分 離步驟、節(jié)省了分析時間； 3) 國標方法采用氮氣吹干的方法進行濃縮富集，耗時較長，而本方法采用最佳分配比 的溶劑20%乙腈/水和正己烷達到既能出去雜質、油脂的目的，又能很好得將目標物溶解出 來。本方法耗時少，操作方便，有機提取劑用量少。
【附圖說明】
[0011] 圖1為本發(fā)明方法的流程圖。
【具體實施方式】
[0012] 本發(fā)明用下列實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于下列實 施例。
[0013] 按照本發(fā)明的
【發(fā)明內容】
實施本發(fā)明，所需試劑溶液的配制方法如下： 0. 1 mol/L氫氧化鈉溶液：4. 0 g氫氧化鈉溶于1000 mL去離子水中，超聲脫氣； 20 %乙腈/水：200 mL乙腈與800 mL去離子水混勾，超聲脫氣； 標準工作液：取1. 0 y g/mL標準中間液1. 0 mL用20 %乙腈/水稀釋至50 mL，得到 20 yg/L工作液； 定量曲線：用20 %乙腈/水配置定量曲線標液，各個組分的濃度為0. 0005 y g/mL、 0.001 yg/mL、0. 002 yg/mL、0. 005 yg/mL、0. 010 yg/mL; 基質混合校準曲線：分別取2.00 mL濃度為0.0005 yg/mL、0. 001 yg/mL、0. 002 yg/ mL、0. 005 y g/mL、0. 010 y g/mL的標準溶液對空白樣品進行洗脫，20 %乙腈/水溶液定容， 過濾得基質混合校準溶液。
[0014] 溶劑的最佳分配比見表1，本方法對空白雞肉中8種糖皮質激素藥物殘留的檢出 限見表2，達到國內外檢測的要求。
[0015]表1溶劑的最佳分配比
【主權項】
1. 一種雞肉中8種糖皮質激素類藥物殘留檢測的前處理方法，其特征在于：具體包括 以下步驟： (1) 準確稱取雞肉樣品2.00g，置于50 mL離心管中，加入15 mL乙酸乙醋，漩禍混合， 4000 r/min離心15 min，移取乙酸乙醋層；于殘澄中加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL， 混勾，加乙酸乙醋20 mL，漩禍混合，4000r/min離心15min，移取乙酸乙醋層；合并兩次提取 液置于雞心瓶中，40°C旋轉蒸至近干； (2) 往雞心瓶中加入2 mL體積分數(shù)為10°/『50%的乙腈水溶液和2 mL正己烷，漩渦混 合，靜置分層，移取下層溶液，過〇. 22 y m微孔濾膜，所得濾液即可上機測試。
2. 根據(jù)權利要求1中所述的雞肉中8種糖皮質激素類藥物殘留檢測的前處理方法， 其特征在于：所述雞肉樣品中8種糖皮質激素類藥物殘留包括潑尼松、潑尼松龍、氫化可的 松、甲基潑尼松、地塞米松、倍他米松、倍氯米松、氟氫可的松乙酸鹽。
3. 根據(jù)權利要求1中所述的雞肉中8種糖皮質激素類藥物殘留檢測的前處理方法，其 特征在于：步驟（2)中乙腈水溶液的體積分數(shù)為20%。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種雞肉中8種糖皮質激素藥物殘留檢測的前處理方法,該方法包括待測樣品的稱量、液液萃取、旋轉蒸發(fā)等操作；所用儀器包括恒溫振蕩器、離心機等；用本前處理方法制備出的樣品溶液可以直接用液相色譜-串聯(lián)質譜法進行檢測。該前處理方法與現(xiàn)有方法相比,具有操作簡單有效、耗時少、成本低、重現(xiàn)性好等優(yōu)點，具有很強的可操作性，有望在環(huán)保、商檢及出入境檢驗檢疫等行業(yè)大規(guī)模推廣應用，具有顯著的經濟效益。
【IPC分類】G01N1-28
【公開號】CN104849119
【申請?zhí)枴緾N201510284891
【發(fā)明人】肖光參, 邱彬, 林振宇, 郭隆華, 陳國南
【申請人】福州大學
【公開日】2015年8月19日
【申請日】2015年5月29日