專利名稱：安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及花卉快速繁殖技術(shù)；特別是一種安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法。由愈傷組織直接誘導(dǎo)球型胚團，再利用同一培養(yǎng)基使球型胚團長出5-300株幼苗來進行快繁，它的優(yōu)點是快繁材料選材方便、準(zhǔn)確、快速、快繁苗量大、穩(wěn)定、簡便，避免了體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的繁雜技術(shù)程序和過程。其植株繁殖數(shù)量可進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，且價格低廉，操作方便，實用于企業(yè)。
背景技術(shù)：
安祖花(anthurium)又名紅掌、花燭、火鶴花等，栽培品種主要是由andreanum和scherzerianum兩個種經(jīng)雜交選育而成，屬于天南星科花燭屬，多年生常綠草本植物，可常年開花，一般植株長到一定時期，每個葉腋處都能抽生花蕾并開花。紅掌常采用異花授粉，授粉方式主要借助于昆蟲，如蜜蜂、蝴蝶、飛蛾等。安祖花原產(chǎn)于哥斯達(dá)黎加、哥倫比亞等熱帶雨林區(qū)，常附生在樹上，有時附生在巖石上或直接生長在地上，性喜溫暖、潮濕、半陰的環(huán)境，忌陽光直射。
現(xiàn)有的安祖花繁殖方法主要有四種組培苗、切株、穴盤苗和盆栽苗。一個基本的原則越小的植株，栽培難度越大。切株、穴盤苗和盆栽苗法進行安祖花繁殖，繁殖率極低，播種繁殖所需時間長，且易產(chǎn)生變異。最先進、科學(xué)、快速的方法是利用組織培養(yǎng)進行快速繁殖，即將安祖花的外植體在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通過誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織、發(fā)芽、生根、移植栽培等過程進行快速繁殖。
中國專利200310109713.3公開了安祖花體細(xì)胞胚誘導(dǎo)快速繁殖方法，安祖花組織一步誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提出一種安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法。本發(fā)明的快繁方法可用同一種培養(yǎng)基將愈傷組織誘導(dǎo)、球型胚團形成、幼苗分化等一步完成，解決目前尚無用安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快速繁殖安祖花的問題，是一種安祖花組織一步誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，特點為安祖花快繁材料選材方便、準(zhǔn)確、快速、快繁苗量大、穩(wěn)定、簡便，避免了體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的繁雜技術(shù)程序和過程、便于花卉企業(yè)進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的快速繁殖方法。
本發(fā)明安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，其特征在于它包含下列各步驟1)取安祖花外植體，活體滅菌5-10分鐘，在無菌室或超凈工作臺上，將上述組織利用剪刀剪碎，放入球型胚團誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，溫度20-30℃，培養(yǎng)基25-70天；
2)更換培養(yǎng)基，在光照下進行培養(yǎng)，每天光照7-15小時，光強為20000-35000勒克斯，最大光照強度不可長期超過35000勒克斯，25-70天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直至愈傷組織團長至較大形成小型球型胚團；每塊球型胚團能夠長出5-300株幼苗不等。
3)將球型胚團組織塊換瓶，25-70天更換培養(yǎng)基，直至球型胚團長出幼苗；4)將幼苗切下放入生根培養(yǎng)基中，長成完整的植株。
所述的安祖花外植體是安祖花的嫩葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、氣生根尖、火焰苞、火焰苞基；以及幼苗的葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、莖節(jié)或莖部分。
所述的步驟2)的愈傷組織切分成多塊愈傷組織塊培養(yǎng)。
所述的誘導(dǎo)球型胚團的培養(yǎng)基配方為1/2MS(或MS)(基本培養(yǎng)基)+BA(6-芐基腺嘌呤)0-2.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0-1mg/L+KT(N6-呋喃甲基腺嘌呤)0-2.5mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0-1mg/L+3％蔗糖或葡萄糖。所述生根培養(yǎng)基配方濃度為1/2MS(基本培養(yǎng)基)+IBA(3-吲哚丁酸)0-1mg/L+NAA(α-萘乙酸)0-1mg/L+3％蔗糖。
本發(fā)明的技術(shù)方案詳細(xì)描述如下成熟植株組織培養(yǎng)取材組織的特征成熟植株可從溫室或市售花獲得，實驗表明紅花、粉花、白花等各種類型安祖花都可作為組織培養(yǎng)取材材料。取材組織包括嫩葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、氣生根尖、火焰苞、火焰苞基等都可取材來誘導(dǎo)愈傷組織。莖軸、莖尖的取材是將葉片從根部扒掉，去除，再取莖軸、莖尖，這種操作需要破壞部分甚至整個植株。嫩葉、葉片柄端、葉柄、氣生根尖、火焰苞、火焰苞基等組織取材比較簡單，直接將所述組織取下進行組織滅菌即可，具體取材組織部位見圖1、2。圖1火焰苞、火焰苞基的取材；圖2嫩葉、葉片柄端的取材。
幼小植株(花苗)組織培養(yǎng)取材組織部位的特征幼苗的葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、莖節(jié)、莖等部分組織都可作為外植體進行取材，無菌苗也可取材，并可省略組織滅菌這一道操作，植株特征見圖3，4，幼小植株組織圖。幼小植株組織比較薄弱，操作時應(yīng)盡量溫柔，以免傷及細(xì)胞。
植物組織材料滅菌取圖1、圖2中所述植物組織塊作為外植體進行組織培養(yǎng)，首先要進行組織滅菌，一般用的滅菌液有乙醇(75％)、升汞(0.1％)、次氯酸鈉(20％)等，這三種滅菌液任何一種都可起到活體組織滅菌作用。按要求取下盡量大的組織塊，先用自來水洗凈，再用蒸餾水沖洗3次，之后放入75％乙醇中1分鐘，用無菌水沖洗2次，用上述升汞、或次氯酸鈉浸泡5-10分鐘，取出，再用無菌水沖洗3次，即可備用作組織培養(yǎng)材料。
誘導(dǎo)球型胚團及形成幼苗(圖5、圖6))在無菌室或超凈工作臺上，將上述組織利用剪刀剪碎，放入球型胚團誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)直至愈傷組織團長至較大形成小型球型胚團；每塊球型胚團能夠長出5-300株幼苗不等。
剪下幼苗生根(圖7、圖8)將幼苗在球型胚團上剪下，放入上述生根培養(yǎng)基中，生根。
移栽可供產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)(圖9)。
本發(fā)明通過培養(yǎng)基控制愈傷組織發(fā)育過程，由愈傷組織直接誘導(dǎo)球型胚團，再利用同一培養(yǎng)基使球型胚團長出5-300株幼苗來進行快繁，它的優(yōu)點是快繁材料選材方便、準(zhǔn)確、快速、快繁苗量大、穩(wěn)定、簡便，避免了體細(xì)胞胚誘導(dǎo)的繁雜技術(shù)程序和過程。利用本簡單適用的安祖花組織一步誘導(dǎo)球型胚團快繁的方法，進行快速繁殖，其植株繁殖數(shù)量可進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，且價格低廉，操作方便，實用于企業(yè)。


圖1、火焰苞、火焰苞基的取材部位。
圖2、嫩葉、葉片柄端的取材部位。
圖、3、4幼小植株組織圖。
圖5、圖6球型胚團形成幼苗圖。
圖7、圖8剪下幼苗生根圖。
圖9、移栽可供產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)幼苗。
圖、10-12，嫩葉、葉片柄端組織培養(yǎng)形成愈傷組織及球型胚團。
圖、13-15莖軸、莖尖、莖節(jié)組織培養(yǎng)形成愈傷組織及球型胚團。
圖、16-18葉柄、氣生根尖組織培養(yǎng)形成愈傷組織及球型胚團。
具體實施例方式
實施例1葉片、葉片柄端組織培養(yǎng)形成球型胚團及幼苗取安祖花(取自吉林省長春市國聯(lián)花卉基地售花處溫室)成熟植株嫩葉或幼小植株(花苗)的葉片，如上所述滅菌(先用自來水洗凈，再用蒸餾水沖洗3次，之后放入75％乙醇中1分鐘，用無菌水沖洗2次，用升汞、或次氯酸鈉浸泡5-10分鐘，取出，再用無菌水沖洗3次，即可備用作組織培養(yǎng)材料)，在無菌條件下將其剪碎如圖10，放入上述培養(yǎng)基1/2MS(基本培養(yǎng)基)+BA(6-芐基腺嘌呤)0.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0.1mg/L+KT(N6-呋喃甲基腺嘌呤)0mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0mg/L+3％蔗糖。在光照下進行培養(yǎng)，每天光照7-15小時，光強為30000勒克斯，70天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直至愈傷組織團長至較大形成小型球型胚團；每塊球型胚團能夠長出5-300株幼苗不等，將幼苗剪下，移置于生根培養(yǎng)基，所述的生根培養(yǎng)基配方為1/2MS(基本培養(yǎng)基)+NAA(α-萘乙酸)0.5mg/L+IBA(3-吲哚丁酸)0mg/L+3％蔗糖，直至長成完整植株。見圖10-12，葉片柄端組織培養(yǎng)形成愈傷組織、球型胚團及幼苗。
實施例2莖軸、莖尖、莖節(jié)組織培養(yǎng)形成球型胚團及幼苗取安祖花(取自吉林省長春市國聯(lián)花卉基地售花處溫室)成株或幼苗，去其葉取其莖軸、莖尖、莖節(jié)，如上所述滅菌(先用自來水洗凈，再用蒸餾水沖洗3次，之后放入75％乙醇中1分鐘，用無菌水沖洗2次，用升汞、或次氯酸鈉浸泡5-10分鐘，取出，再用無菌水沖洗3次，即可備用作組織培養(yǎng)材料)，在無菌條件下將其切碎如圖13，放入上述培養(yǎng)基中1/2MS(基本培養(yǎng)基)+BA(6-芐基腺嘌呤)1mg/L+NAA(α-萘乙酸)0.1mg/L+KT(N6-呋喃甲基腺嘌呤)0.1mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0mg/L+3％蔗糖或葡萄糖放入上述培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)3-7天，之后在光照下進行培養(yǎng)，每天光照7-15小時，光強為25000勒克斯，25天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直至愈傷組織團長至較大形成小型球型胚團；每塊球型胚團能夠長出5-300株幼苗不等，將幼苗剪下，移置于生根培養(yǎng)基，所述的生根培養(yǎng)基配方為1/2MS(基本培養(yǎng)基)+NAA(α-萘乙酸)0.5mg/L+3-吲哚丁酸(IBA)0mg/L+3％蔗糖，直至長成完整植株。圖13-15是莖軸、莖尖、莖節(jié)組織培養(yǎng)形成愈傷組織、球型胚團及幼苗。
實施例3葉柄、氣生根尖組織培養(yǎng)形成球型胚團及幼苗取安祖花(取自長春市花鳥魚蟲批發(fā)市場盆花)成株的葉柄、氣生根尖或幼苗的葉柄，如上所述滅菌(先用自來水洗凈，再用蒸餾水沖洗3次，之后放入75％乙醇中1分鐘，用無菌水沖洗2次，用升汞、或次氯酸鈉浸泡5-10分鐘，取出，再用無菌水沖洗3次，即可備用作組織培養(yǎng)材料)，在無菌條件下將其切成3mm長的段如圖16，放入上述培養(yǎng)基1/2MS(基本培養(yǎng)基)+BA(6-芐基腺嘌呤)1mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0.1mg/L+KT(N6-呋喃甲基腺嘌呤)0mg/L+3％蔗糖，在光照下進行培養(yǎng)，每天光照7-15小時，光強為25000勒克斯，45天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直至愈傷組織團長至較大形成小型球型胚團；每塊球型胚團能夠長出5-300株幼苗不等，將幼苗剪下，移置于生根培養(yǎng)基，所述的生根培養(yǎng)基配方為1/2MS(基本培養(yǎng)基)+3-吲哚丁酸(IBA)0.5mg/L+α-萘乙酸(NAA)0mg/L+3％蔗糖，直至長成完整植株。圖16-18是葉柄、氣生根尖組織培養(yǎng)形成愈傷組織、球型胚團及幼苗。
權(quán)利要求
1.一種安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，其特征在于它包含下列各步驟1)取安祖花外植體，活體滅菌5-10分鐘，在無菌室或超凈工作臺上，將上述組織利用剪刀剪碎，放入球型胚團誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，溫度20-30℃，培養(yǎng)25-70天；2)更換培養(yǎng)基，在光照下進行培養(yǎng)，每天光照7-15小時，光強為20000-35000勒克斯，25-70天更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)直至愈傷組織團長至較大形成小型球型胚團；3)將球型胚團組織塊換瓶，25-70天更換培養(yǎng)基，直至球型胚團長出幼苗；4)將幼苗其基部切下放入生根培養(yǎng)基中，長成完整的植株。
2.按照權(quán)利要求1所述的安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，其特征在于所述的安祖花外植體是安祖花的嫩葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、氣生根尖、火焰苞或火焰苞基；或幼苗的葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、莖節(jié)或莖部分。
3.按照權(quán)利要求1所述的安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，其特征在于所述的步驟2)的愈傷組織切分成多塊愈傷組織塊培養(yǎng)。
4.按照權(quán)利要求1所述的安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，其特征在于所述的誘導(dǎo)球型胚團的培養(yǎng)基配方為1/2MS或MS(基本培養(yǎng)基)+BA(6-芐基腺嘌呤)0-2.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0-1mg/L+KT(N6-呋喃甲基腺嘌呤)0-2.5mg/L+2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)0-1mg/L+3％蔗糖或葡萄糖。
5.按照權(quán)利要求1所述的安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法，其特征在于所述的生根培養(yǎng)基配方為1/2MS(基本培養(yǎng)基)+IBA(3-吲哚丁酸)0-1mg/L+NAA(α-萘乙酸)0-1mg/L+3％蔗糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團的快繁方法。應(yīng)用安祖花的組織包括商品安祖花嫩葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、氣生根尖、火焰苞、火焰苞基、以及幼苗的葉、葉片柄端、葉柄、莖軸、莖尖、莖節(jié)、莖等部分組織作為外植體，通過培養(yǎng)基控制愈傷組織發(fā)育過程，由愈傷組織直接誘導(dǎo)球型胚團，利用球型胚團來進行快繁，它的優(yōu)點是快繁材料選材方便、準(zhǔn)確、快速，快繁苗量大、穩(wěn)定、簡便。利用安祖花組織直接誘導(dǎo)球型胚團快繁的方法，進行快速繁殖，其植株繁殖數(shù)量可進行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，是一種價格低廉，操作方便而實用的方法。
文檔編號A01G7/00GK1695428SQ20051001349
公開日2005年11月16日 申請日期2005年5月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月12日
發(fā)明者季靜, 王罡, 姚振, 孫文君, 王萍 申請人:天津龍康泰生物技術(shù)有限公司