專利名稱：：山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及冷水性魚類遠(yuǎn)緣雜交方法，具體涉及一種利用山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法。技術(shù)背景山女鱒(Oco^ywc/2ws屬鮭禾斗、鮭屬，原產(chǎn)于日本，20世紀(jì)50年代被馴養(yǎng)成家養(yǎng)魚類。我國于1996年由黑龍江水產(chǎn)研究所引進(jìn)，該魚體態(tài)雍容，色彩典雅，肉質(zhì)細(xì)嫩，品味鮮爽，深受人民的珍愛，市場價格較高。但山女鱒屬于小型魚類，性成熟個體小(一般只有300g左右)，并且在池養(yǎng)條件下，山女鱒雌雄成熟不同步，雄魚比雌魚早成熟約半個月，從而導(dǎo)致卵子授精時采用的精子質(zhì)量較差，人工養(yǎng)殖條件下存在出苗率低、抗逆性差、繁殖后親魚死亡率高(親魚雌魚繁殖后死亡率達(dá)40%以上，雄魚達(dá)70%以上)。因此，如何解決山女鱒雌雄同步繁殖、抗逆性差、繁殖后親魚死亡率高等問題成為山女鱒行業(yè)健康、穩(wěn)定、可持續(xù)性發(fā)展的關(guān)鍵所在。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了解決山女鱒在人工養(yǎng)殖條件下存在出苗率低、抗逆性差、繁殖后親魚死亡率高的問題，而提供了山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法。本發(fā)明中山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法是由下述步驟實(shí)現(xiàn)的一、虹鱒與山女鱒分別馴化培育，使虹鱒雌魚和山女鱒雄魚達(dá)到同步性成熟；二、擠出虹鱒雌魚卵子放入授精盆，再將山女鱒雄魚精液擠入裝有卵子授精盆中，用柔軟、干凈的羽毛快速均勻攪拌1分鐘，然后加入孵化用水放置12分鐘，之后用清水洗去多余的精液和破損的卵皮，得到受精卵；三、受精卵放入孵化用水靜置3040分鐘待充分吸水膨脹、卵膜硬化并富有彈性，然后裝入孵化桶中進(jìn)行流水孵化，孵化用水的水溫為413°C，孵化過程中避光，并保持水質(zhì)清新、pH值為68、水流通暢，孵化用水的溶氧量為59mg/L，并且每天用600ppm的福爾馬林溶液消毒，消毒時間為15分鐘，仔魚出膜后即完成山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交。步驟一中山女鱒的馴化培養(yǎng)方法步驟如下8月份起將山女鱒雄魚和雌魚分開喂養(yǎng)，山女鱒雄魚除正常接收日光照射外，每晚增加人工光照35小時，山女鱒雌魚采用遮蓋法把日照時控制在8~10小時/天，魚卵受精后保留上浮苗中的后1/3魚苗進(jìn)行培育。步驟一中虹鱒的馴化培養(yǎng)方法步驟如下8月下旬起控制虹鱒光照時間為8~10小時/天，魚卵受精后保留上浮苗中的前1/3魚苗進(jìn)行培育。本發(fā)明的方法可操作性較強(qiáng)、適配性好，避免了激素誘導(dǎo)方法的局限性。本發(fā)明培育的雜交種子一代生長快、肉質(zhì)細(xì)嫩、抗逆性強(qiáng)、繁育后成活率高，養(yǎng)殖成本相對較低，與山女鱒自交進(jìn)行對比生長速度提高10~15%，成活率提高30%，受精率在90%以上，孵化率在80%以上，死亡率低于8.7%，并且肉色、嫩度、pH值、失水力及系水力指標(biāo)均符合優(yōu)質(zhì)冷水魚品質(zhì)要求，雜交魚的失水力及系水力指標(biāo)均優(yōu)于虹鱒和山女鱒。具體實(shí)施方式具體實(shí)施方式一本實(shí)施方式山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法是由下述步驟實(shí)現(xiàn)的一、虹鱒與山女鱒分別馴化培養(yǎng)，使虹鱒雌魚和山女鱒雄魚達(dá)到同步性成熟；二、擠出虹鱒雌魚卵子放入授精盆，再將山女鱒雄魚精液擠入裝有卵子授精盆中，用柔軟、干凈的羽毛快速均勻攪拌，使精卵充分接觸，然后加入孵化用水放置12分鐘，之后用清水洗去多余的精液和破損的卵皮，得到受精卵；三、受精卵放入孵化用水靜置3040分鐘，待充分吸水膨脹、卵膜硬化并富有彈性，然后裝入孵化桶中進(jìn)行流水孵化，孵化用水的水溫為413°C，孵化過程中避光，并保持水質(zhì)清新、pH值為6~8、水流通暢，孵化用水的溶氧量為59mg/L，并且每天用600ppm的福爾馬林溶液消毒，消毒時間為15分鐘，仔魚出膜后即完成山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交。本實(shí)施方式采用的孵化用水是經(jīng)過過濾的地下涌泉水，具體水質(zhì)指標(biāo)為Fe0.261mg/L、懸浮物2.6mg/L、NHl-N:0.461mg/L、亞硝酸鹽0.00374mg/L。本實(shí)施方式方法得到雜交種的受精率在90%以上，孵化率在80%以上，死亡率低于8.7%，并且生長速度快，與山女鱒自交進(jìn)行對比生長速度提高10~15%(見表l)，本實(shí)施方式方法培育的雜交種一代中雌雄比例約為1:l。表l孵化后仔魚150天生長情況表種類叉長(cm)體重(g)虹鱒自交5.71±0.662.15±0.65山女鱒自交5.68±0.581.90±0.56本實(shí)施方式方法得到的雜交種6.04±0.192.77±0.96采用下述實(shí)驗(yàn)對虹鱒、山女鱒及本實(shí)施方式方法雜交種的肌肉質(zhì)地比較，具體內(nèi)容如下實(shí)驗(yàn)用魚虹鱒、山女鱒及本實(shí)施方式方法雜交種(虹鱒早X山女鱒S)均為黑龍江水產(chǎn)研究所渤海冷水魚實(shí)驗(yàn)場培育的二齡魚，實(shí)驗(yàn)魚在室外培育期間伺育條件基本保持一致，均為10mx2mx0.5m(LxWxH)的水泥池，各池魚投喂同種餌料，投飼率相同，取規(guī)格基本一致的試驗(yàn)魚各30尾進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)方法1、取樣方法分別取虹鱒、山女鱒、本實(shí)施方式方法雜交種各30尾，在背鰭下方、脊椎骨上方部位去鱗、去皮后采樣。嫩度和失水率用取樣器采樣；肉色、PH的肌肉取魚體同側(cè)背鰭下方、脊柱骨上方的肌肉。每尾魚所取部位要求一致。2、肉色的測定肉色測量儀為日產(chǎn)數(shù)字顯示色差計(jì)DF-400，參數(shù)的表示方式為亮度(1值)、紅度(a值)、黃度(b值)。使用時先將色度儀用校正板標(biāo)準(zhǔn)化，然后將鏡頭垂直置于肉樣上，鏡頭口緊扣肉面(不能漏光)，按下攝像按扭，記錄色度參數(shù)，連續(xù)記錄3次數(shù)據(jù)，計(jì)算其平均值。3、嫩度的測定.嫩度的測量采用東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程學(xué)院研制的數(shù)顯式肌肉嫩度儀C-LM3型。測量時用直徑為1.27cm，長度為1.5cm的圓形取樣器沿脊椎骨方向鉆切肉樣塊，剔除肌間刺，隨即肌肉嫩度儀測量剪切力值，每個肉樣剪切3次，計(jì)算平均值。4、pH值的測定pH值的測定采用瑞士產(chǎn)OETA320型酸度計(jì)來進(jìn)行。取背部肌肉5g，剔除肌間刺剪碎，置勻漿管內(nèi)，立即加蒸餾水10ml，勻漿10min，提取上清液，用酸度計(jì)(測量前用PH4和PH7標(biāo)準(zhǔn)液校正)測定pH值，每條魚重復(fù)2次，測量下一個樣本前用蒸餾水沖洗干凈。5、失水率的測定失水率的測定采用的是南京土壤儀器廠生產(chǎn)的應(yīng)變式無側(cè)限壓力儀，WW-2A型。測量時，使用直徑為3.0cm，長度為l.Ocm的圓形取樣器垂直于體軸方向鉆切肉樣塊，用電子分析天平稱重(WD，將肉樣夾在紗布中間，上下各墊16層濾紙，濾紙外層各放一塊硬質(zhì)塑料墊板，然后置于鋼環(huán)允許膨脹儀平臺上，加壓68.66kPa.并保持Smin，撤去壓力后立即測量壓后的肉樣重(W2)，按失水率(。/。)KW!—W2)/W,xl00。/。公式計(jì)算。6、系水力的測定用測失水率后的樣測定各肉樣的含水量(A)，置恒溫箱內(nèi)(烘前將放樣品的培皿烘干)，55。C烘24h，置于干燥皿內(nèi)回潮24h，本實(shí)驗(yàn)前后值相差0.0067g(遠(yuǎn)小于0.5g的標(biāo)準(zhǔn))，再烘2h即可，并利用失水率測定結(jié)果計(jì)算出失水量(B)，然后按系水力(。/。)氣W,A-WiB)/W!Axl00。/。公式計(jì)算。7、數(shù)據(jù)處理采用MicrosoftExcel2003及SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，顯著性檢驗(yàn)采用Dunean法和Test法。上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果見表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由表2和3可見，所得結(jié)果表明本實(shí)施方式方法雜交種肉色介于虹鱒與山女鱒親本之間，其的嫩度與山女鱒親本差異不顯著(/>().05)，而遠(yuǎn)好于虹鱒(;<().01)。本實(shí)施方式方法雜交種的肉色、嫩度、pH值、失水力及系水力指標(biāo)均符合優(yōu)質(zhì)冷水魚品質(zhì)要求，肉質(zhì)較好，雜交種的失水力及系水力指標(biāo)均優(yōu)于虹鱒和山女鱒(/<0.01)。具體實(shí)施方式二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟一中山女鱒的馴化培養(yǎng)方法步驟如下8月份起將山女鱒雄魚和雌魚分開喂養(yǎng)，山女鱒雄魚除正常接收日光照射外，每晚增加人工光照35小時，山女鱒雌魚采用遮蓋法把日照時控制在810小時/天，魚卵受精后保留上浮苗中的后1/3魚苗進(jìn)行培育。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式二不同的是步驟一中山女鱒連續(xù)馴化培育3~6個世代。其它與具體實(shí)施方式二相同。具體實(shí)施方式四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟一中虹鱒的馴化培養(yǎng)方法步驟如下8月下旬起控制虹鱒光照時間為810小時/天，魚卵受精后保留上浮苗中的前1/3魚苗進(jìn)行培育。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式四不同的是步驟一中虹鱒連續(xù)馴化培育36個世代。其它與具體實(shí)施方式四相同。具體實(shí)施方式六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式四不同的是步驟一中虹鱒雌魚選取的是第2次產(chǎn)卵的虹鱒雌魚。其它與具體實(shí)施方式四相同。具體實(shí)施方式七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟一虹鱒雌魚繁殖親本為體重超過平均體重15%20%以上的、繁殖時間比大群體平均繁殖時間提前1020天的虹鱒雌魚得到虹鱒雌魚。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟一中山女鱒雄魚繁殖親本為色彩典雅、幼鮭斑明顯、繁殖后存活60天以上、體重超過平均體重15%~20%以上、繁殖時間比大群體平均繁殖時間推遲1020天的山女鱒雄魚。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中受精卵放入孵化用水中30~40分鐘便充分吸水膨脹、卵膜硬化并富有彈性。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的水溫為61TC。其它與具體實(shí)施方式一相同。本實(shí)施方式水溫更有利于孵化。具體實(shí)施方式十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的水溫為9'C。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十二本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的流速為0.3X10'3m3.S"0.4X10_3m3.s"。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的流速為0.34Xl(r3m3.S"。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的溶氧量為6~8mg/L。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的溶氧量為7mg/L。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的pH值為6.57.5。其它與具體實(shí)施方式一相同。具體實(shí)施方式十七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是步驟三中孵化用水的pH值為7。其它與具體實(shí)施方式一相同。權(quán)利要求1、山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法是由下述步驟實(shí)現(xiàn)的一、虹鱒與山女鱒分別馴化培育，從而實(shí)現(xiàn)虹鱒雌魚和山女鱒雄魚同步性成熟；二、擠出虹鱒雌魚卵子放入授精盆，再將山女鱒雄魚精液擠入裝有卵子授精盆中，用柔軟、干凈的羽毛快速均勻攪拌1分鐘使精卵充分結(jié)合，然后加入孵化用水放置1～2分鐘后用清水洗去多余的精液和破損的卵皮，得到受精卵；三、受精卵放入孵化用水中30～40分鐘，待充分吸水膨脹、卵膜硬化并富有彈性，然后裝入孵化桶中進(jìn)行流水孵化，孵化水溫為4～13℃，孵化過程中避光，并保持水質(zhì)清新、pH值為6～8、水流通暢，溶氧量為5～9mg/L，并且每天用600ppm的福爾馬林溶液消毒，消毒時間為15分鐘，仔魚出膜后即完成山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟一中山女鱒的馴化培養(yǎng)方法步驟如下8月下旬起將山女鱒雄魚和雌魚分開喂養(yǎng)，山女鱒雄魚除正常接收日光照射外，每晚增加人工光照35小時，山女鱒雌魚采用遮蓋法把日照時控制在8~10小時/天，自交魚卵受精后保留上浮苗中的后1/3魚苗進(jìn)行培育。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟一中山女鱒連續(xù)馴化培育3~6個世代。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟一中虹鱒的馴化培養(yǎng)方法步驟如下8月下旬起控制虹鱒光照時間為810小時/天，自交魚卵受精后保留上浮苗中的前1/3魚苗進(jìn)行培育。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟一中虹鱒連續(xù)馴化培育3~6個世代。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟一中虹鱒雌魚要選取第2次產(chǎn)卵的親魚。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟三的孵化用水的水溫為6~irc。8、根據(jù)權(quán)利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟三孵化過程中孵化用水的流速為0.3X10'3m3.s"0.4X10-3m3.s'1。.9、根據(jù)權(quán)利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟三孵化過程中孵化用水的溶氧量為6~8mg/L。10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，其特征在于步驟三孵化過程中孵化用水的pH值為6.5~7.5。全文摘要山女鱒與虹鱒遠(yuǎn)緣雜交方法，它涉及冷水性魚類遠(yuǎn)緣雜交方法。本發(fā)明解決了山女鱒在人工養(yǎng)殖條件下存在的雌雄成熟不同步、出苗率低、抗逆性差、繁殖后親魚死亡率高等問題。本發(fā)明方法步驟如下一、分別培育，使繁殖親本達(dá)到同步性成熟；二、人工受精；三、孵化。本發(fā)明的方法可操作性較強(qiáng)、適配性好，避免了激素誘導(dǎo)方法的局限性。本發(fā)明培育出的雜交種的子一代生長快、肉質(zhì)細(xì)嫩、抗逆性強(qiáng)、繁育后成活率高，養(yǎng)殖成本相對較低，與山女鱒自交進(jìn)行對比生長速度提高10～15％，成活率提高30％，受精率在90％以上，孵化率在80％以上，繁殖后死亡率低于8.7％，并且肉色、嫩度、pH值、失水力及系水力指標(biāo)均符合優(yōu)質(zhì)冷水魚品質(zhì)要求。文檔編號A61D19/00GK101322478SQ20081013686公開日2008年12月17日申請日期2008年8月1日優(yōu)先權(quán)日2008年8月1日發(fā)明者張玉勇,牟振波,白慶利,石連玉申請人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所