專利名稱：草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物復(fù)配制劑的制備，特別是指一種草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法。
背景技術(shù)：
草莓漿果鮮紅艷麗，芳香多汁，甜酸可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，被視為果中珍品。目前全國(guó)已有栽培草莓面積近4萬(wàn)公頃，產(chǎn)量20多萬(wàn)噸。草莓重茬病是草莓生產(chǎn)的重要問(wèn)題，國(guó)內(nèi)外的研究表明，造成作物重茬的主要原因是土壤營(yíng)養(yǎng)元素的缺乏和土傳病害所致，草莓在同一田塊上連作2年一般減產(chǎn)10-15%，連作3年減產(chǎn)20%-25%，連作4年以上減產(chǎn)40%以上， 嚴(yán)重者甚至絕收。草莓種植過(guò)程中，特別是連作種植極易造成土壤的營(yíng)養(yǎng)元素缺乏，合理有效地補(bǔ)充相關(guān)元素是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)種植中的一項(xiàng)重要措施。草莓病害以土傳病害為主，常見(jiàn)的炭疽病、 灰霉病、白粉病和根腐病等都是由細(xì)菌和霉菌傳播的；病毒病主要有草莓斑駁病毒、草莓輕型黃邊病毒、草莓鑲脈病毒等多種植物病毒，主要由蚜蟲(chóng)傳播；草莓的蟲(chóng)害主要的有草莓芽線蟲(chóng)、草莓根腐線蟲(chóng)、紅蜘蛛和蚜蟲(chóng)。目前草莓要連種普遍采用的方法就是化學(xué)熏蒸法。該方法使用成本高達(dá)每公頃一萬(wàn)五千元以上，僅當(dāng)年有效，同時(shí)熏蒸用化學(xué)物質(zhì)大多是劇毒物，對(duì)大氣和土壤都有嚴(yán)重的破壞。在草莓產(chǎn)業(yè)化市場(chǎng)不斷擴(kuò)大的情況下，對(duì)綠色無(wú)公害產(chǎn)品的需求也日益擴(kuò)大。草莓重茬病的生物防治，對(duì)環(huán)保和綠色食品的要求，對(duì)提高草莓國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力都具有非常重要的意義。隨著綠色食品、綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展，生物肥料開(kāi)始大規(guī)模使用于現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)種植上， 在生物肥料中，微生物肥料以其用量少、成本低、作用效果顯著而成為首選。具有解鉀作用的膠質(zhì)芽孢桿菌和具有解磷作用的巨大芽孢桿菌制成的鉀磷復(fù)合肥是近年來(lái)生物肥料市場(chǎng)的廣泛使用的一種微生物活菌制劑。微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，凈化和修復(fù)土壤，降低農(nóng)作物病害發(fā)生，保護(hù)環(huán)境，以及提高農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)和食品安全等方面都表現(xiàn)出了不可替代的作用。細(xì)黃鏈霉菌micrcflav )是一株對(duì)多種病原菌有拮抗作用的抗生性放線菌，用此菌株生產(chǎn)的抗生菌肥，不但能抑制多種病原菌的生長(zhǎng)，還具有刺激作物發(fā)芽、生根等作用。放線菌肥料在多年的使用中，取得了良好的抗病、增產(chǎn)效果。目前用細(xì)黃鏈霉菌生產(chǎn)抗生菌肥有固體和液體發(fā)酵兩種方法，固體發(fā)酵生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定；液體發(fā)酵產(chǎn)品以菌絲體的形式存在，不形成孢子，一方面不利于保藏和貯存，產(chǎn)品保質(zhì)期短，另一方面在應(yīng)用中菌絲體的效果也沒(méi)有孢子好。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，利用液體菌種和固體發(fā)酵相結(jié)合的方法，發(fā)酵生產(chǎn)細(xì)黃鏈霉菌抗生菌肥，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定和大量的孢子形成。根據(jù)草莓的需肥特點(diǎn)添加微量元素，并與具有解磷解鉀功能的微生物菌肥—— 生物磷鉀肥復(fù)配，生產(chǎn)出多功能防治草莓重茬病的生物制劑——草莓專用復(fù)合抗重茬劑， 該產(chǎn)品既可以解決由土傳病菌引起的重茬問(wèn)題，又可以解決由土壤缺素引起的重茬問(wèn)題， 同時(shí)由于加入了解磷解鉀菌株，在植物根部形成了有益微生物菌群，改善了土壤的微生態(tài)環(huán)境，也為草莓生長(zhǎng)提供了磷鉀營(yíng)養(yǎng)元素。本發(fā)明的整體技術(shù)構(gòu)思是
草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，包括如下工藝步驟
A、細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑的制備 Al、液體種子的制備
將原始菌種接種至滅菌后的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)制成液體種子，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘、培養(yǎng)溫度-30°C、培養(yǎng)周期M小時(shí)；接種時(shí)加入約5毫升無(wú)菌水在試管菌種中，用接種針刮起菌苔，制成菌懸液，每支斜面接種3-5個(gè)三角瓶； 上述液體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分比的原料組成 玉米粉1. 8%-2%,豆餅粉2%-2. 5%，淀粉0. 8%-1. 2%，余量為水； 原始菌種選用菌株細(xì)黃鏈霉菌micrcflav )，其保藏編號(hào)為 CGMCC4. 891 ； A2、固體發(fā)酵
A2-1曲盤培養(yǎng)將步驟Al中制備的液體種子接種到滅菌后的曲盤培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，接種量為液體種子與滅菌后的曲盤培養(yǎng)基的質(zhì)量比等于5%-8%，培養(yǎng)條件為溫度-30 濕度50%-70%、培養(yǎng)周期5-6天，待基質(zhì)全部出現(xiàn)粉色孢子，香味濃郁時(shí)出料； 曲盤培養(yǎng)的培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分比的原料組成
豆餅粉4%-5%，石灰1. 5%-2%，甘薯粉12%-15%，鋸末15%_20%，細(xì)土 33%-；35%，余量為水； A2-2后熟出料時(shí)翻動(dòng)并打碎料塊，在40°C _45°C條件下，干燥至含水質(zhì)量百分含量為 10%-15%，粉碎制成細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑；
B、微量元素添加劑的配制
按照NY14^-2007標(biāo)準(zhǔn)《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加劑，其中硼、鋅、 鉬、錳元素含量之和不低于微量元素添加劑總質(zhì)量的10% ；
C、草莓專用復(fù)合抗重茬劑的復(fù)配
按照細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥微量元素添加劑的質(zhì)量比 =30-34 :65-69. 2 :0. 8-1的比例，將上述物料混配均勻制成草莓專用復(fù)合抗重茬劑。本發(fā)明中具體的工藝步驟及技術(shù)參數(shù)是
所述的步驟Al中液體種子培養(yǎng)基的滅菌條件是溫度為121°C，時(shí)間為25-35分鐘。所述的步驟A2-1中曲盤培養(yǎng)基的滅菌條件是溫度為121°C，時(shí)間為50-60分鐘。所述的步驟A2-1的曲盤培養(yǎng)基中鋸末細(xì)度為10目-20目，細(xì)土的顆粒度為50 目-70目，其余固體物料的顆粒度為60目-80目。所述的步驟A2-1中曲盤培養(yǎng)出料前取樣并用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定孢子含量，孢子含量不低于80億個(gè)/克。所述的步驟B的微量元素添加劑中的微量元素可以選用多種溶于水后硼、鋅、鉬、 錳元素以離子形態(tài)的化合物，并不脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。其中較為優(yōu)選的技術(shù)方案是，硼元素選自硼砂或硼酸中的一種，鋅元素選自硫酸鋅或氯化鋅中的一種，鉬元素選自鉬酸銨，錳元素選自硫酸錳。所述的步驟B的微量元素添加劑按照質(zhì)量比為硼砂或硼酸硫酸鋅或氯化鋅鉬酸銨硫酸錳=45-55 25-35 15-25 10-20的比例配制。步驟C中微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥選用執(zhí)行GB2(^87_2006標(biāo)準(zhǔn)，微生物有效菌含量2億個(gè)/克以上的生物鉀磷或磷鉀微生物復(fù)合肥。較為優(yōu)選的是微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥選用河北省微生物研究所生產(chǎn)的“冀微”牌生物鉀磷肥或復(fù)合菌劑、湖南豫園生物科技有限公司生產(chǎn)的“豫園”牌通用型菌種粉、北京世紀(jì)阿姆斯生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 “阿姆斯”牌生物磷鉀肥中的一種。利用本發(fā)明的方法所制備的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
申請(qǐng)人在保定市郊選已經(jīng)種植了二年草莓的連作大棚，進(jìn)行抗重茬劑的使用效果試驗(yàn)。草莓品種為豐香。對(duì)照組Ck用溴甲烷熏蒸，試驗(yàn)組分別按每公頃60 (處理1)和 80 (處理2)公斤施用抗重茬劑，定植前均勻地施入定植穴內(nèi)。在種植和生長(zhǎng)期間管理和施肥都按常規(guī)方法進(jìn)行。分次采收商品果并用電子天平稱重，統(tǒng)計(jì)總產(chǎn)量；用鐵氰化鉀法測(cè)定可溶性糖； 用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定法測(cè)定可滴定酸；用2. 6—二氯靛酚法測(cè)定維生素C的含量；用折射儀法測(cè)定可溶性固形物。其中糖、酸和維生素C的測(cè)定方法均為植物生理生化實(shí)驗(yàn)測(cè)定的常規(guī)方法，可溶性固形物的測(cè)定方法符合GB/T 12295-90《水果、蔬菜制品可溶性固形物含量的測(cè)定一折射儀法》的要求。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1:
表1 草莓專用復(fù)合抗重茬劑對(duì)連作草莓產(chǎn)量和質(zhì)量的影響
權(quán)利要求
1.草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于包括如下工藝步驟A、細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑的制備 Al、液體種子的制備將原始菌種接種至滅菌后的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)制成液體種子，培養(yǎng)條件為轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘、培養(yǎng)溫度-30°C、培養(yǎng)周期M小時(shí)；接種時(shí)加入約5毫升無(wú)菌水在試管菌種中，用接種針刮起菌苔，制成菌懸液，每支斜面接種3-5個(gè)三角瓶； 上述液體培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分比的原料組成 玉米粉1. 8%-2%,豆餅粉2%-2. 5%，淀粉0. 8%-1. 2%，余量為水； 原始菌種選用菌株細(xì)黃鏈霉菌micrcflav )，其保藏編號(hào)為 CGMCC4. 891 ； A2、固體發(fā)酵A2-1曲盤培養(yǎng)將步驟Al中制備的液體種子接種到滅菌后的曲盤培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，接種量為液體種子與滅菌后的曲盤培養(yǎng)基的質(zhì)量比等于5%-8%，培養(yǎng)條件為溫度-30 濕度50%-70%、培養(yǎng)周期5-6天，待基質(zhì)全部出現(xiàn)粉色孢子，香味濃郁時(shí)出料； 曲盤培養(yǎng)的培養(yǎng)基由如下質(zhì)量百分比的原料組成豆餅粉4%-5%，石灰1. 5%-2%，甘薯粉12%-15%，鋸末15%_20%，細(xì)土 33%-；35%，余量為水； A2-2后熟出料時(shí)翻動(dòng)并打碎料塊，在40°C _45°C條件下，干燥至含水質(zhì)量百分含量為 10%—15%，粉碎制成細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑；B、微量元素添加劑的配制按照NY14^-2007標(biāo)準(zhǔn)《微量元素水溶肥料》的要求配制微量元素添加劑，其中硼、鋅、 鉬、錳元素含量之和不低于微量元素添加劑總質(zhì)量的10% ；C、草莓專用復(fù)合抗重茬劑的復(fù)配按照細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥微量元素添加劑的質(zhì)量比 =30-34 :65-69. 2 :0. 8-1的比例，將上述物料混配均勻制成草莓專用復(fù)合抗重茬劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 Al中液體種子培養(yǎng)基的滅菌條件是溫度為121°C，時(shí)間為25-35分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 A2-1中曲盤培養(yǎng)基的滅菌條件是溫度為121°C，時(shí)間為50-60分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 A2-1的曲盤培養(yǎng)基中鋸末細(xì)度為10目-20目，細(xì)土的顆粒度為50目-70目，其余固體物料的顆粒度為60目-80目。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 A2-1中曲盤培養(yǎng)出料前取樣并用平板計(jì)數(shù)法測(cè)定孢子含量，孢子含量不低于80億個(gè)/克。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 B的微量元素添加劑中硼元素選自硼砂或硼酸中的一種，鋅元素選自硫酸鋅或氯化鋅中的一種，鉬元素選自鉬酸銨，錳元素選自硫酸錳。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 B的微量元素添加劑按照質(zhì)量比為硼砂或硼酸硫酸鋅或氯化鋅鉬酸銨硫酸錳=45-55 25-35 15-25 10-20 的比例配制。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟 C中微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥選用執(zhí)行GB2(^87-2006標(biāo)準(zhǔn)，微生物有效菌含量2億個(gè)/ 克以上的生物鉀磷或磷鉀微生物復(fù)合肥。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法，其特征在于所述的步驟C中微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥選用河北省微生物研究所生產(chǎn)的“冀微”牌生物鉀磷肥或復(fù)合菌劑、湖南豫園生物科技有限公司生產(chǎn)的“豫園”牌通用型菌種粉、北京世紀(jì)阿姆斯生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的“阿姆斯”牌生物磷鉀肥中的一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物復(fù)配制劑的制備，特別是指一種草莓專用復(fù)合抗重茬劑的制備方法。包括細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑的制備，微量元素添加劑的配制，將微生物菌肥生物鉀磷復(fù)合肥與細(xì)黃鏈霉菌抗生菌劑和微量元素添加劑按比例復(fù)配制成草莓專用復(fù)合抗重茬劑。本發(fā)明解決了現(xiàn)有技術(shù)存在的采用化學(xué)熏蒸法解決草莓重茬病所帶來(lái)的成本高、毒性大等問(wèn)題，具有改善了土壤的微生態(tài)環(huán)境，為草莓生長(zhǎng)提供了磷鉀營(yíng)養(yǎng)元素。在草莓種植中使用本發(fā)明生產(chǎn)的專用抗重茬劑可以有效地實(shí)現(xiàn)增產(chǎn)，并可提高果品的可溶性固形物、含糖量、糖酸比等品質(zhì)。
文檔編號(hào)C05G3/00GK102424635SQ201110276710
公開(kāi)日2012年4月25日 申請(qǐng)日期2011年9月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月19日
發(fā)明者古述江, 唐兆宏, 李軍, 李賓, 秦艷梅, 章淑艷, 趙從波, 陳文杰, 馬清河, 魏亞新 申請(qǐng)人:河北省微生物研究所