專利名稱：一種南方紅豆杉胚離體成苗技術及其所用的培養(yǎng)基的制作方法
技術領域：
本發(fā)明南方紅豆杉胚離體成苗技術屬于生物技術領域，涉及一種南方紅豆杉胚的離體培養(yǎng)技術及其所用的培養(yǎng)基。
背景技術：
南方紅豆杉(Taxus chinensis var. Maire ),為我國特有的第三紀子遺樹種。在自然狀態(tài)下，由于單性花、雌雄異株、異花授粉等原因，形成的種子數(shù)量較少；且種子休眠期長，自然條件下需兩冬一夏才能萌芽，萌發(fā)率和幼苗成活率低；再加上其生長緩慢(一棵樹成材需60年)，在種群中生長和競爭能力弱，致使其天然分布越來越少。此外，由于南方紅豆杉具有特殊的材用和藥用價值，20世紀80年代以來其資源遭到毀滅性的破壞，現(xiàn)存資 源很少，處于瀕危狀態(tài)，1992年國家林業(yè)局將其列為一級保護樹種。因此，尋找快速、有效的南方紅豆杉種苗繁殖方法對于保護和合理開發(fā)利用南方紅豆杉資源具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決上述的技術問題而提供一種南方紅豆杉胚離體成苗技術。本發(fā)明的技術方案
一種南方紅豆杉胚離體成苗技術，即將胚直接從南方紅豆杉種子中取出，在培養(yǎng)基上進行人工離體無菌培養(yǎng)，打破胚的休眠，促使其在當年萌發(fā)成苗，為南方紅豆杉的大規(guī)模種植提供了快捷的途徑。具體涉及胚的剝離、胚的培養(yǎng)、煉苗及大田種植。一種南方紅豆杉胚離體成苗技術，具體包括如下步驟
(I )、南方紅豆杉種子胚的剝離
將南方紅豆杉種子去掉假種皮，依次用酒精、次氯酸鈉消毒，去掉堅硬的外種皮，取出胚，并將胚在無菌水中沖洗干凈；
(2)、南方紅豆杉胚的培養(yǎng)
將步驟(I)所得的胚接種于培養(yǎng)基上，先在20-22°C條件下暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光照強度約1500 lx，光照12h/d的光下條件進行培養(yǎng)至根長出，即得南方紅豆杉試管苗；
所用試管培養(yǎng)基配方按每升計算，由400mg NH4N03>556mg Ca(NO3)2. 4H20、990 mgK2SO4^ 96 mg CaCl2. 2H20、170 mg KH2P04、0. 25 mg Na2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mgMnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mg FeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2_EDTA、100 mg肌醇、I. Omg維生素B1、0. 5 mg煙酸、0.5 mg維生素B6、2. 0 mg甘氨酸、0. 5mg赤霉素(GA)、0.5mg吲哚乙酸(IAA)、0.5mg 6-芐基嘌呤(6_BA)、20 g蔗糖、6g瓊脂及Ig活性炭和余量的水組成；
(3)、瓶內(nèi)煉苗
將步驟(2)所得的南方紅豆杉試管苗置于溫度25°C、光強15001x、光照12h/d、RH 80%左右的環(huán)境中，打開瓶蓋，使之適應環(huán)境7d，即可完成瓶內(nèi)煉苗；(4)、瓶外基質(zhì)煉苗
將步驟(3)完成瓶內(nèi)煉苗的試管苗取出，栽植于基質(zhì)中，所述的基質(zhì)配方按質(zhì)量比計算，即草碳蛭石山泥為2:2:6，煉苗室白天溫度為20-25°C，晚間為15_18°C、午間光強25-40klx、RH 70% - 85%，經(jīng)25d即可完成瓶外基質(zhì)煉苗；
(5)、移栽大田
將步驟(4)完成瓶外基質(zhì)煉苗的植株種植到大田中即可。
本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術，由于采用了將胚從種子中分離并進行離體培養(yǎng)的技術方案，因此能夠避免胚乳中的萌發(fā)抑制物對種子萌發(fā)的抑制作用，使胚能夠在當年萌發(fā)成苗。即解決了南方紅豆杉種子采收后需經(jīng)兩冬一夏才能自然萌發(fā)的限制，為紅豆杉種苗的快速繁殖提供了快捷的方法。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進一步闡述，但并不限制本發(fā)明。本發(fā)明的實施例中的南方紅豆杉種子采自安徽旌德廟首林場 實施例I
一種南方紅豆杉胚離體成苗技術，具體包括如下步驟
(1)、南方紅豆杉種子的消毒
將當年采收的種子去假種皮，用蒸餾水浸泡24h，依次用70%的酒精消毒2min、5%次氯酸鈉消毒30min，無菌水沖洗干凈備用；
(2)、南方紅豆杉種胚剝離
將滅菌后的種子放置無菌濾紙上，去掉堅硬的外種皮，在顯微鏡下去除胚乳，并將胚在無菌水中沖洗干凈；
(3)、南方紅豆杉胚的培養(yǎng)
將步驟(2)所得的胚接種于試管培養(yǎng)基上，首先在20-22°C條件下暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光照強度約1500 lx，光照12h/d的光下進行培養(yǎng)至根長出，即得南方紅豆杉試管苗；
所用的試管培養(yǎng)基配方，按每升計算，由0. 5mgGA、0. 5mg IAA、0. 5mg6_BA、400mgNH4NO3,556mg Ca (NO3) 2. 4H20、990 mg K2SO4,96 mg CaCl2. 2H20、170 mg KH2PO4、0. 25 mgNa2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mg MnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mg FeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2-EDTAUOO mg肌醇、I. Omg維生素B1、0. 5 mg煙酸、0. 5 mg維生素B6、2.0 mg甘氨酸、20 g蔗糖、6g瓊脂、Ig活性炭和余量的水組成，用IM NaOH或IMHCI 調(diào)至 pH5. 6 ；
(4)、瓶內(nèi)煉苗
將步驟(3)所得的南方紅豆杉試管苗置于溫度25°C、光強15001x、光照12h/d、RH 80%左右的環(huán)境中，打開瓶蓋，使之適應環(huán)境7d，即可完成；
(5)、瓶外基質(zhì)煉苗
將步驟(4)完成瓶內(nèi)煉苗的試管苗取出，栽植于基質(zhì)中，基質(zhì)煉苗室內(nèi)白天溫度為20-25°C，晚間為 15-18°C、午間光強 25-40klx、RH 70 % - 85 %，經(jīng) 25d 即可完成；
所述基質(zhì)配方按質(zhì)量比計算，即草碳蛭石山泥為2:2:6 ；(6)、大田移植
將完成瓶外基質(zhì)煉苗的植株種植到大田中，最終成活率為95%。綜上所述，本發(fā)明的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術通過將南方紅豆杉胚從種子中取出后進行體外培養(yǎng)，打破了胚乳對胚的萌發(fā)限制，胚可在種子采收當年萌發(fā)，并生長成為健康的幼苗，經(jīng)煉苗、大田移植后，成活率達95%。本發(fā)明操作簡單，成本低，可作為紅豆杉種苗的快速繁殖的方法。
上述內(nèi)容僅為本發(fā)明構思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技術方案所作的任何等效變換，均應屬于本發(fā)明的保護范圍。
權利要求
1.一種南方紅豆杉胚離體成苗技術，其特征在于具體包括如下步驟 (1 )、南方紅豆杉種子胚的剝離 將南方紅豆杉種子去掉假種皮，先用蒸餾水浸泡，然后依次用酒精、次氯酸鈉消毒，去掉堅硬的外種皮，取出胚，并將胚在無菌水中沖洗干凈； (2)、南方紅豆杉胚的培養(yǎng) 將步驟(1)所得的胚接種于試管培養(yǎng)基上，先在20 _22°C條件下暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光照強度約1500 lx，光照12h/d的條件下培養(yǎng)至根長出，即得到南方紅豆杉試管苗； 所用試管培養(yǎng)基配方，按每升計算，由400mg NH4N03>556mg Ca(NO3)2. 4H20、990 mgK2SO4>96 mg CaCl2. 2H20、170 mg KH2PO4^ 0. 25 mg Na2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mgMnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mg FeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2-EDTA>100 mg 肌醇、I. Omg 維生素 B1、0. 5 mg 煙酸、0.5 mg 維生素 B6、2.0 mg 甘氨酸、0.5mg GA、0.5mg IAA、0. 5mg 6_BA、20 g鹿糖、6g瓊脂及Ig活性炭和余量的水組成; (3)、瓶內(nèi)煉苗 將步驟(2)所得的南方紅豆杉試管苗置于溫度25°C、光強15001x、光照12h/d、RH 80%左右的環(huán)境中，打開試管瓶蓋，使之適應環(huán)境7d，即可完成瓶內(nèi)煉苗； (4)、瓶外基質(zhì)煉苗 將步驟(3)完成瓶內(nèi)煉苗的試管的苗取出，栽植于基質(zhì)煉苗室的基質(zhì)中經(jīng)25d即可完成瓶外基質(zhì)煉苗； 所述的基質(zhì)配方按質(zhì)量比計算，即草碳蛭石山泥為2:2:6 ； 所述的基質(zhì)煉苗室白天溫度為20-25°C，晚間為15-18°C、午間光強25-40klx、相對濕度為 70% -85% ； (5)、移栽大田 將步驟(4)完成瓶外基質(zhì)煉苗的植株種植到大田中即可。
2.如權利要求I所述的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術，其特征在于步驟(I)中所述的紅豆杉種子去假種皮后，先用蒸餾水浸泡24h，然后依次用70%的酒精消毒2min、5%次氯酸鈉消毒30min。
3.如權利要求I或2所述的一種南方紅豆杉胚離體成苗技術所用的紅豆杉胚試管培養(yǎng)基，其特征在于所用的紅豆杉胚試管培養(yǎng)基，按每升計算，由400mg NH4NO3^556mgCa (NO3) 2. 4H20、990 mg K2SO4>96 mg CaCl2. 2H20> 170 mg KH2PO4>0. 25 mg Na2MoO4. 2H20、370 mg MgSO4. 7H20、22. 4mg MnSO4. H20、8. 6mg ZnSO4. 7H20、0. 25mg CuSO4. 5H20、27. 8 mgFeSO4. 7H20、37. 3 mg Na2-EDTAUOO mg 肌醇、I. Omg 維生素 B1、0. 5 mg 煙酸、0.5 mg 維生素B6、2.0 mg 甘氨酸、0. 5mg GA、0. 5mg IAA、0. 5mg 6_BA、20 g 鹿糖、6g 瓊脂及 Ig 活性炭和余量的水組成。
4.如權利要求3所述的紅豆杉胚試管培養(yǎng)基，其特征在于紅豆杉胚試管培養(yǎng)基的pH為.5.60
全文摘要
本發(fā)明公開一種南方紅豆杉胚離體成苗技術。即將南方紅豆杉種子去掉假種皮，依次用酒精、次氯酸鈉消毒，去掉堅硬的外種皮，取出胚并在無菌水中沖洗干凈后接種于特定的試管培養(yǎng)基上，先暗培養(yǎng)，萌發(fā)后移至光下培養(yǎng)至成苗后，將試管苗置于溫度25℃、光強1500lx、光照12h/d、RH80%左右的環(huán)境中7d，完成瓶內(nèi)煉苗，隨后將試管苗栽植于特定基質(zhì)中，控制晝夜溫度20-25℃/15-18℃、午間光強25-40klx、RH70%-85%，經(jīng)25d完成瓶外基質(zhì)煉苗，最后再移栽大田即可。本發(fā)明的南方紅豆杉胚離體成苗技術，使南方紅豆杉胚在當年萌發(fā)成苗，為紅豆杉種苗的快速繁殖和資源保護提供了快捷的方法。
文檔編號A01H4/00GK102657091SQ20121015658
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月21日 優(yōu)先權日2012年5月21日
發(fā)明者侯梅芳, 姜育龍, 宋麗莉, 張妤萍, 趙華強 申請人:上海應用技術學院