胚芽乳酸桿菌cmu995菌株的新用途
【專利摘要】本發(fā)明揭露一種胚芽乳酸桿菌（Lactobacillus?plantarum）CMU995菌株的新用途，其應(yīng)用于保護(hù)肝臟。本發(fā)明另外揭露一種保護(hù)肝臟的方法，包括將上述胚芽乳酸桿菌（Lactobacillus?plantarum）CMU995菌株傳輸至一哺乳動物。本發(fā)明還揭露一種用于保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其包含上述胚芽乳酸桿菌（Lactobacillus?plantarum）CMU995菌株。
【專利說明】胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的新用途
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum) CMU995菌株的新用途,且特別是涉及應(yīng)用于保護(hù)肝臟的胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)CMU995菌株的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]乳酸菌為存在于人類和動物腸道中的主要細(xì)菌，由于其具有許多有益于人體及動物體的生理活性，故常應(yīng)用于各種益生菌(probiotics)產(chǎn)品中。目前已有許多乳酸桿菌于抑制病原菌的應(yīng)用的相關(guān)專利，例如美國專利第5，603，930號中所揭露的約氏乳酸桿菌(Lactobacillus johnsonii)菌株,可抑制腸毒素及腸侵入性病原菌；美國專利第3，953, 609號中所揭露的雷特氏乳酸桿菌菌株(Lactobacillus Iactis)菌株，可抑制消化系統(tǒng)中大腸桿菌的生長；以及美國專利第6，491，956號中所揭露的嗜酸乳酸桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌株,可預(yù)防及治療由幽門螺旋桿菌感染所造成的胃炎、十二指腸潰瘍及胃潰瘍。
[0003]乳酸桿菌若要在動物體內(nèi)有效地發(fā)揮功能，除了需要具備基本的生理或藥理活性外，還需具有兩個重要特性。首先，該乳酸桿菌需對動物腸胃道所分泌的胃酸和膽堿具有耐受性，始可存活于消化系統(tǒng)中而到達(dá)腸道。再者，該乳酸菌對動物宿主的腸道上皮細(xì)胞需有牢固的吸附能力，始可于腸胃道中與病原菌競爭吸附于腸道。兩者兼?zhèn)洳趴砂l(fā)揮高效率以保護(hù)腸道、排除毒素、抑制病原菌的功能。
[0004]本發(fā)明人早期篩選出的腸道吸附型新穎胚芽乳酸桿菌CMU995菌株，經(jīng)由活體內(nèi)及體外的相關(guān)實(shí)驗證實(shí)，此菌株除了對腸道及泌尿道的病原菌具有良好的抑制效果之外，還發(fā)現(xiàn)對腸胃道及泌尿道的上皮細(xì)胞具有優(yōu)異的附著能力，故可持久且有效地保護(hù)腸胃道和泌尿道免于病原菌的感染。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)CMU995菌株具有穩(wěn)定腸道上皮細(xì)胞的功能，且可降低上皮細(xì)胞受到腸內(nèi)毒素的破壞而死亡。在動物活體試驗更發(fā)現(xiàn)，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可抑制酒精所引發(fā)的腸內(nèi)毒素穿越腸道組織進(jìn)入血液中，因此，可抑制酒精或毒素所誘發(fā)的肝臟發(fā)炎及腸道發(fā)炎現(xiàn)象。又以臨床人體試驗發(fā)現(xiàn)，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可有效改善肝癌及肝硬化患者的血液毒素及血氨濃度。因此，CMU995菌株可應(yīng)用于預(yù)防和/或治療因酒精和/或毒素所引發(fā)的相關(guān)疾病。
[0006]本發(fā)明的一個實(shí)施方式，提供一種胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)CMU995菌株的新用途，其應(yīng)用于保護(hù)肝臟。
[0007]前述胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum) CMU995菌株保藏于財團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所，其保藏編號為BCRC 910472，同時也保藏于德國國家菌種保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, DSMZ),其保藏編號為 DSM 23780。
[0008]前述胚芽乳酸桿菌CMU995菌株保護(hù)肝臟的新用途，可用于降低評估肝臟功能指針酶，為天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶Aspartate aminotransferase (AST)和/或丙酸轉(zhuǎn)氨酶Alanineaminotransferase (ALT)。
[0009]前述胚芽乳酸桿菌CMU995菌株保護(hù)肝臟的新用途，可用以降低血液中的脂質(zhì)、膽固醇、內(nèi)毒素、炎性細(xì)胞激素TNF- α和/或酒精含量，也可直接降低肝臟中的膽固醇和/或
內(nèi)毒素含量。
[0010]前述胚芽乳酸桿菌CMU995菌株保護(hù)肝臟的新用途，也可用以預(yù)防酒精、細(xì)胞激素TNF-α和/或內(nèi)毒素所引發(fā)的肝臟發(fā)炎。
[0011]通過上述用途，一方面減輕肝臟代謝的負(fù)擔(dān)，另一方面預(yù)防肝炎的發(fā)生，并降低AST和/或ALT的肝臟功能指數(shù)，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)肝臟的功效。
[0012]根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方式，提供一種能保護(hù)肝臟的方法，包括將前述胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum) CMU995菌株傳輸至一哺乳動物，且哺乳動物可為人類。
[0013]本發(fā)明的一個實(shí)施方式是在提供一種用于保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其包含前述胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)CMU995菌株，其中CMU995菌株的有效濃度范圍為 I X 105CFU/g 至 I X 1012CFU/g 的干燥粉末。
[0014]根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方式，前述保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其為藥品、飼料、飲料、營養(yǎng)補(bǔ)充品、乳制品、食品、健康食品。根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方式，前述保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其形式可為粉劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、安瓿(安瓶；ampoule/ampule)、液劑、噴劑或塞劑等劑型。另外 ，保護(hù)肝臟的益生菌組合物也可用以預(yù)防或治療包括降低酒精及毒素所引發(fā)的全身性發(fā)炎、肝炎、腸炎或腎炎等相關(guān)疾病，并可降低毒素所誘導(dǎo)的臟器病變，例如:腎臟發(fā)炎、腎衰竭或大腸癌生成等的器官病變。
[0015]本發(fā)明的技術(shù)及實(shí)施方式，將描述于以下內(nèi)容中，以供本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員據(jù)以明了本發(fā)明的特征。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]為了使本發(fā)明的上述和其它目的、特征、優(yōu)點(diǎn)與實(shí)施例能更明顯易懂，提供附圖，在附圖中:
[0017]圖1繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)胺酶(AST, aspartateaminotransferase)在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0018]圖2繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT, alanineaminotransferase)在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0019]圖3繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的血清中三酸甘油酯在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0020]圖4繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的血清中總膽固醇在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0021]圖5繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的血清中內(nèi)毒素在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0022]圖6繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的肝臟中內(nèi)毒素在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0023]圖7繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的肝臟中TNF-α的濃度在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0024]圖8繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的大腸中TNF-α的濃度在實(shí)驗期間的濃度變化圖。
[0025]圖9a繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的服用包含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的益生菌組合物的肝硬化患者血液中TNF- α變化數(shù)據(jù)。
[0026]圖9b繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的服用包含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的益生菌組合物的肝硬化患者血液中血氨變化數(shù)據(jù)。
[0027]圖9c繪示本發(fā)明的一個實(shí)施例的服用包含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的益生菌組合物的肝硬化患者血液中內(nèi)毒素變化數(shù)據(jù)。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下述將更詳細(xì)討論本發(fā)明的實(shí)施方式。然而，此實(shí)施方式可為各種發(fā)明概念的應(yīng)用，可被具體實(shí)行在各種不同的特定范圍內(nèi)。特定的實(shí)施方式是僅以說明為目的，且不受限于揭露的范圍。
[0029]本申請新穎用途的胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum),或可稱為植物乳酸桿菌，菌株是本發(fā)明人早期所篩選出，并將之命名為CMU995菌株，其保藏于財團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所，保藏編號為BCRC 910472，以下稱為胚芽乳酸桿菌CMU995菌株。
[0030]經(jīng)由活體內(nèi)及體外的相關(guān)實(shí)驗，上述胚芽乳酸桿菌CMU995菌株，除了具有抑制病原菌活性的功效之外，尚發(fā)現(xiàn)對腸胃道或泌尿道的上皮細(xì)胞具有優(yōu)異的附著能力，故可持久且有效地保護(hù)腸胃道和泌尿道免于病原菌的感染。
[0031]由于胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可持久且有效地保護(hù)腸胃道和/或泌尿道免受病原菌感染，使用胚芽乳酸桿菌CMU995菌株，可降低酒精進(jìn)入生體的血液中，因此可制成具有代謝酒精或抵擋酒精進(jìn)入血液功能的解酒藥品或食品或飲料等制劑，由此運(yùn)用于保護(hù)肝臟。此外，因為酒精也會引發(fā)腸道內(nèi)病原菌及毒素的增加，而胚芽乳酸桿菌CMU995菌株也具有抑制腸內(nèi)毒素產(chǎn)生的功能，故可降低毒素進(jìn)入血液內(nèi)而運(yùn)行至肝臟及其它器官組織。因此，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株具有排除毒素的功效及保護(hù)肝臟的用途。
[0032]本發(fā)明的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株及其益生菌組合物，可制造成藥品、健康食品、營養(yǎng)補(bǔ)充品、飲料、酸奶、一般食品及動物飼料等形式的食用品。再者，前述保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其劑型可為粉劑、膠囊、造粒、微膠囊、錠劑、噴劑、液劑或塞劑等劑型。根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施例的含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的益生菌組合物，其具有預(yù)防或治療疾病的功效，可應(yīng)用于保護(hù)腸道細(xì)胞、降低腸道及血液毒素、抑制酒精吸收，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)肝臟器官的效果。
[0033]現(xiàn)以下列具體實(shí)施例進(jìn)一步例示說明本發(fā)明。下列實(shí)施例僅提供作為說明，而非用以限制本發(fā)明的范疇。
[0034][實(shí)施例1]
[0035]附著力分析
[0036](I)制備乳酸桿菌菌株
[0037]進(jìn)行腸胃道細(xì)胞的附著力分析所使用的乳酸桿菌包括:本發(fā)明的Lactobacillusplantarum CMU995> Lactobacillus rhamnosus GG (LGG,鼠李糖乳酸桿菌，ATCC 53103) >Lactobacillus plantarum 299v 及 Lactobacillus casei strain Shirota0 以 MRS 培養(yǎng)液(Difco)活化所有受試乳酸桿菌兩次后，分別將菌株接種至5毫升的MRS培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。24小時后，取I毫升菌液，并以6000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，以pH 7.2的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)清洗兩次后， 以吸光值600nm調(diào)整濃度至IxlO9個菌落形成單位(Colony-FormingUnit, CFU)/mL以進(jìn)行后續(xù)的吸附試驗。
[0038](2)培養(yǎng)腸胃道細(xì)胞株
[0039]本試驗使用的腸胃道細(xì)胞株為Caco-2 & HT-29人體腸癌細(xì)胞株(human colonadenocarcinoma)及AGS胃癌細(xì)胞株(gastric adenocarcinoma),皆購自臺灣生物資源保存及研究中心(Bioresource Collection and Research Center, BCRC)。Caco-2 & HT-29細(xì)胞的培養(yǎng)基為DMEM培養(yǎng)基，AGS細(xì)胞的培養(yǎng)基為F-12培養(yǎng)基，以上培養(yǎng)基皆需添加10體積％的胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)細(xì)胞經(jīng)活化穩(wěn)定后才進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗。
[0040](3)乳酸桿菌附著性分析
[0041]將實(shí)驗B中制備的細(xì)胞分裝于96孔細(xì)胞培養(yǎng)盤中，每個孔中加入I X IO4個細(xì)胞，每天置換200微升(μ?的新鮮培養(yǎng)基。于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時后，加入20微升實(shí)驗A所制備的不同乳酸菌于細(xì)胞中，進(jìn)行附著I小時后，使用磷酸鹽緩沖溶液清洗3次，以去除未附著的乳酸菌，以10%的福爾馬林液固定細(xì)胞及乳酸菌，30分鐘后，再以磷酸鹽緩沖溶液清洗細(xì)胞3次，最后以100微升結(jié)晶紫進(jìn)行染色5分鐘，再以75%酒精清洗以去除細(xì)胞上的染色劑。利用相差顯微鏡觀察各種乳酸菌對腸胃道上皮細(xì)胞的吸附性，并隨機(jī)在不同的顯微鏡視野下，觀察并計算約50個細(xì)胞的總?cè)樗峋搅?，最后計算每個細(xì)胞的平均吸附菌數(shù)。
[0042]附著力分析的實(shí)驗結(jié)果
[0043]結(jié)果如下列表1所示。由表1結(jié)果可知，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株相較于其它菌株，具有更優(yōu)異的腸胃道上皮細(xì)胞附著能力。
[0044]表1各菌株對不同的腸胃道上皮細(xì)胞的附著能力比較乳酸菌附著數(shù)(菌落形成單位 / 細(xì)胞)(CFU/cell)
[0045]
大腸上皮細(xì)胞株結(jié)腸上皮細(xì)胞株胃上皮細(xì)胞株
菌株種類
Caco-2HT-29AGS
CMU99553.6±6.858.2±10.5M 7±6，
LGG (ATCC 53103)7.5±1.56.7+2.94.4±0.8
LaciohaciIhis casei

3.2 士 3.45.5 土 2.12.8 土 3.0
strain Shirota
LaciohacilIus

15.7=3.516.5:3.212.6 士 2.4
plantarum 299v
[0046][實(shí)施例2]
[0047]動物試驗
[0048](1)實(shí)驗分組
[0049]本試驗的酒精性肝炎模式乃參考Segawa等人(2008)的研究報告。將8周大的C57BL/6J小鼠隨機(jī)分成6組，每組8只，起始體重為23± I克，實(shí)驗分組如下:
[0050]A組；正常對照組(Control):小鼠可任意取食無酒精添加的Lieber-DeCarli流質(zhì)飼料，且每天管灌喂食0.2mL滅菌的生理食鹽水。[0051]B組；陰性對照組(酒精肝損傷組，Alcohol):小鼠可任意取食含酒精的Lieber-DeCarli流質(zhì)飼料,且每天管灌喂食0.2mL滅菌的生理食鹽水。
[0052]C 組；Lactobacillus plantarum CMU995 實(shí)驗組(CMU995):小鼠可任意取食含酒精的Lieber-DeCarli流質(zhì)飼料，且每天管灌喂食0.2mL濃度為2X 1010CFU/mL的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株。
[0053]D組；Lactobacillus rhamnosus GG實(shí)驗組(LGG):小鼠可任意取食含酒精的Lieber-DeCarli流質(zhì)飼料，且每天管灌喂食0.2mL濃度為2X 1010CFU/mL的LGG益生菌。
[0054]E 組；Lactobacillus casei strain Shirota 實(shí)驗組(LC):小鼠可任意取食含酒精的Lieber-DeCarli流質(zhì)飼料，且每天管灌喂食0.2mL濃度為2X1010CFU/mL的Lactobacillus casei strain Shirota 益牛菌。
[0055](2)菌液的制備
[0056]各菌株的實(shí)驗菌粉為菌數(shù)濃度達(dá)I X 10nCFU/g的冷凍干燥粉末，菌粉放置于4°C冰箱中。于每日喂食小鼠前新鮮制備，將菌粉精秤I克裝入無菌離心管中，以滅菌的生理食鹽水充分混合配制成濃度為2X 101(lCFU/mL的菌液。
[0057](3)益生菌喂食與肝炎誘導(dǎo)
[0058]實(shí)驗初期，各組小鼠皆以Lieber-DeCarli流質(zhì)飼料給予自由攝食，待適應(yīng)環(huán)境一周后即開始進(jìn)行實(shí)驗。首先，各組小鼠開始每天管灌喂食0.2mL不同的實(shí)驗樣品，A、B組喂食生理食鹽水，C、D、E組則喂食新鮮制備的益生菌菌液，連續(xù)每天喂食I次至小鼠犧牲為止。肝炎誘導(dǎo)則從益生菌投予的第3天開始進(jìn)行，除了 A組之外，其余B、C、D、E組的小鼠飼料中均添加入酒精，酒精起始濃度為1.25%，以每兩天增加1.25%劑量的酒精濃度于飼料中，最后增加到最高酒精濃度為5%，并持續(xù)喂食此酒精濃度6周，肝炎誘導(dǎo)期共7周。
[0059](4)小鼠犧牲與檢體收集
[0060]本試驗定義在小鼠開始喂食酒精以誘導(dǎo)肝炎之日為實(shí)驗期的第O天，小鼠于第7周結(jié)束后(第49天)犧牲。在小鼠適應(yīng)環(huán)境及肝炎誘導(dǎo)實(shí)驗期間，于實(shí)驗期的第O天及第28天以臉頰采血法收集適量每只小鼠的血液，于犧牲前隔夜禁食，犧牲時以斷頭法收集每只小鼠的全血，并小心解剖后取出小鼠的肝臟及大腸段后，放入_80°C冷凍冰箱中急速冷凍。
[0061](5)血液、肝臟及腸道的分析
[0062]將冰凍的肝臟或大腸段分別取出適當(dāng)重量后放入研缽中，倒入液態(tài)氮研磨檢體后，收集檢體粉末至離心管，秤重后加入定量的HEPES緩沖溶液，混合均勻后準(zhǔn)備進(jìn)行后續(xù)分析工作。血液則以低速離心后取出血清準(zhǔn)備后續(xù)分析。分析以全自動血液分析儀(CobasMira plus, Roche, USA)或酶聯(lián)免疫分析儀進(jìn)行各項生化檢測,項目包含天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、三酸甘油酯、總膽固醇、內(nèi)毒素、TNF-α的濃度測定。
[0063](6)統(tǒng)計分析
[0064]實(shí)驗數(shù)據(jù)使用SAS 統(tǒng)計分析軟件(Statistical Analysis System, V.8.02ForWindows, 2001)進(jìn)行ANOVA分析各組間的差異性,顯著性差異的判斷標(biāo)準(zhǔn)為p < 0.05,實(shí)驗結(jié)果以SigmaPlot 10.0軟件作圖。
[0065]動物試驗的結(jié)果
[0066]參照圖1及圖2，其分別繪示血清中AST及ALT在實(shí)驗期間的濃度變化圖。由圖中可見，喂食胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的小鼠，血液中所檢測到的肝臟功能評估指針酶AST及ALT明顯較其它喂食酒精誘導(dǎo)肝炎的小鼠低，表示胚芽乳酸桿菌CMU995菌株有良好的保護(hù)肝臟效果，可降低酒精對肝臟的傷害。
[0067]參照圖3及圖4，其分別繪示血清中三酸甘油酯以及總膽固醇在實(shí)驗期間的濃度變化。由圖中可見，喂食胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的小鼠，血液中所檢測到的三酸甘油酯及總膽固醇明顯較其它喂食酒精誘導(dǎo)肝炎的小鼠低，表示胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可降低酒精所引發(fā)的聞血脂癥。
[0068]參照圖5及圖6，其分別繪示血清中內(nèi)毒素(Endotoxin)以及肝臟中內(nèi)毒素在實(shí)驗期間的濃度變化。由圖中可見，喂食胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的小鼠，在血液及肝臟中所檢測到的內(nèi)毒素均明顯較其它喂食酒精誘導(dǎo)肝炎的小鼠低，表示胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可降低酒精所引發(fā)的毒素進(jìn)入體內(nèi)。
[0069]參照圖7及圖8，其分別繪示肝臟以及大腸中發(fā)炎細(xì)胞激素TNF-α的濃度在實(shí)驗期間的濃度變化。由圖中可見，喂食胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的小鼠，肝臟及腸道中所檢測到的發(fā)炎細(xì)胞激素TNF-α明顯較其它喂食酒精誘導(dǎo)肝炎的小鼠低，表示胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可降低肝臟及腸道的發(fā)炎現(xiàn)象。
[0070][實(shí)施例3]
[0071]臨床試驗
[0072]試驗規(guī)劃收集肝硬化的患者，完成試驗的受試者共26人。參與研究的受試者于試驗前及服用胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum) CMU995益生菌組合物4周后,分別收集患者的血液及糞便以進(jìn)行檢驗分析。
[0073](1)試驗的主要納入與排除條件:
[0074]A.納入條件:
[0075]1.肝硬化的病患，年齡30-70歲。
[0076]B.排除條件:
[0077]1.其它主要門靜脈高壓癥并發(fā)癥，如肝腎綜合征或細(xì)菌性腹膜炎者。
[0078]2.其它神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者和急性代謝疾病，如中風(fēng)，心臟衰竭或呼吸衰竭或急性腎衰竭或敗血癥者。
[0079]3.嚴(yán)重肝昏迷(心理狀態(tài)等級3-4)者。
[0080]4.同時合并有嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病，包括癌癥、腎臟及心肺功能不全者。
[0081]5.目前服用含有益生菌的相關(guān)組合物或產(chǎn)品者。
[0082]6.女性病患有懷孕及哺乳者。
[0083](2)益生菌組合物:
[0084]臨床試驗所施用的益生菌組合物為胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)CMU995菌株及其它賦形劑所組成。前述益生菌組合物每單位為3克粉末，內(nèi)含總益生菌菌數(shù)為3xl01(lCFU，即菌粉的菌數(shù)濃度為lxl01(lCFU/g。
[0085](3)檢驗分析
[0086]實(shí)驗規(guī)劃共收集26例肝硬化的患者，經(jīng)簽署受試者同意書后給予患者4周份量的益生菌組合物，每日服用一單位，于餐后服用。于服用益生菌組合物前及服用益生菌組合物4周后，采集患者的血液以供檢驗，分析項目包括血清炎性細(xì)胞激素TNF-α、血液內(nèi)毒素及血氨濃度，以評估益生菌治療前后對患者的改善情形。實(shí)驗分析操作步驟皆按照發(fā)明人所在單位的藥學(xué)系微生物實(shí)驗室的微生物標(biāo)準(zhǔn)分析步驟進(jìn)行，血液分析則依照現(xiàn)有商業(yè)試劑盒步驟進(jìn)行檢測，并以其標(biāo)準(zhǔn)品做檢量線。最后所得到的數(shù)據(jù)以SigmaPlotl0.0進(jìn)行作圖及統(tǒng)計分析。
[0087]臨床試驗的結(jié)果
[0088]參照圖9a至圖9c，其分別繪示服用包含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的益生菌組合物的肝硬化患者血液中的炎性細(xì)胞激素TNF-α、血氨及內(nèi)毒素的變化數(shù)據(jù)。由圖中可見，肝硬化的患者每日服用含有胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的益生菌組合物，4周后，血液中的炎性細(xì)胞激素TNF-α、血氨及內(nèi)毒素皆有顯著性降低(a，b英文小寫字母不同表示治療前后有顯著性差異JPP〈0.05)。因此，證明肝硬化的患者服用前述益生菌組合物后，血液確實(shí)有改善的現(xiàn)象。
[0089]由上述本發(fā)明實(shí)施方式可知，應(yīng)用本發(fā)明具有下列優(yōu)點(diǎn):
[0090]1.此胚芽乳酸桿菌CMU995菌株對胃酸及膽鹽具有良好的耐受力，并且對動物宿主的腸道上皮細(xì)胞有牢固的附著能力，因此，可常駐生存于胃腸道消化系統(tǒng)中，進(jìn)而與腸道中的病原菌競爭吸附，達(dá)到排除病原菌的效果。前述胚芽乳酸桿菌CMU995菌株也可牢固地附著于泌尿道的上皮細(xì)胞，故也可與泌尿道中的病原菌競爭吸附，達(dá)到保護(hù)泌尿道的功效。更進(jìn)一步地，經(jīng)由腸道細(xì)胞、動物及人體實(shí)驗證實(shí)，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株對腸道細(xì)胞具有穩(wěn)定的效果，可降低細(xì)胞受到內(nèi)生性或外生性的毒素傷害。再以動物及人體臨床實(shí)驗證實(shí)，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可抑制酒精和/或毒素穿越腸道進(jìn)入人體或動物體內(nèi)，而達(dá)到保護(hù)腸道、肝臟及其它器官的效果。
[0091]2.就預(yù)防應(yīng)用而言，可將胚芽乳酸桿菌CMU995菌株添加于如飼料、飲料、營養(yǎng)補(bǔ)充品、或保健食品中，使此菌株附著及保護(hù)食用者的`腸胃道上皮細(xì)胞，而抑制內(nèi)毒素、酒精、霉菌毒素或細(xì)菌侵入體內(nèi)，而產(chǎn)生保護(hù)肝臟、降低毒素進(jìn)入血液、解酒、排毒、抑制發(fā)炎、降低器官病變及抗癌等的效果。
[0092]3.就治療應(yīng)用方面，當(dāng)人體或動物體的體內(nèi)遭受病原菌產(chǎn)生的毒素、酒精或其它有毒物質(zhì)侵入時，而造成血液異?；蚣膊〔≌鲿r，例如:內(nèi)毒素、血氨等毒化物過高時，可服用包含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的藥物或食品，透過胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的攝取后可達(dá)成降低血液毒素的效果。舉例而言，肝癌或肝炎患者可服用胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的相關(guān)制劑，來降低血氨過高、肝臟發(fā)炎或腸道發(fā)炎的現(xiàn)象。因此，總體來說，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可達(dá)到預(yù)防或治療因毒素或酒精所引發(fā)的腸胃道和肝臟等的相關(guān)疾病。
[0093]4.胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可通過穩(wěn)定腸道細(xì)胞來抑制腸胃道中的毒素轉(zhuǎn)入血液之外，尚可抑制細(xì)菌或毒素在腸道中累積，經(jīng)由此二種排毒機(jī)制的加乘作用來保護(hù)攝取者?！号哦尽灰辉~的『毒』，為有害物質(zhì)、霉菌毒素、致癌物等，例如:腸道內(nèi)毒素、血液毒素、腸道中病原菌、酒精、有毒藥物、化學(xué)性有害物質(zhì)及塑化劑等，這些毒素會進(jìn)入血液而運(yùn)行至動物或人類的全身，而導(dǎo)致肝臟或其它器官的病變和傷害。又，本菌株及其組合物也具有幫助血液或腸道中的有毒物質(zhì)、病原菌或酒精加速從體內(nèi)排除的功效。
[0094]5.由于本發(fā)明菌株的具有抑制毒素進(jìn)入血液及排除毒素的雙重特性，其可廣泛地運(yùn)用于各種醫(yī)療及保健產(chǎn)品中。因此，本發(fā)明也提供一種用以保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其包含胚芽乳酸桿菌CMU995菌株。基于上述胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的特性，前述益生菌組合物可用于抑制各種毒物吸收、抑制酒精吸收或抑制病原菌。
[0095]6.胚芽乳酸桿菌CMU995菌株可用于抑制腸胃道中的各種有害物質(zhì)，舉例而言，可抑制選自以下群組的有害物質(zhì):細(xì)菌產(chǎn)生毒素、霉菌產(chǎn)生毒素、病毒產(chǎn)生毒素、酒精、飲食中的毒素、農(nóng)藥、藥物、食品添加物、化學(xué)性有害物質(zhì)、塑化劑及前述的組合，尤其是用于抑制酒精及微生物所產(chǎn)生的毒素。
[0096]7.本發(fā)明的保護(hù)肝臟的益生菌組合物可呈任何形式，包含:藥品、飼料、飲料、營養(yǎng)補(bǔ)充品、食品、保健食品、乳制品或塞劑。胚牙乳Ife桿囷CMU995囷株也可添加于食品中，例如制成包含此菌株的乳制品等。
[0097]8.另外，也可視需要于本發(fā)明益生菌組合物中添加任何適宜的添加物，而進(jìn)一步加強(qiáng)胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的附著效果，和/或抑制毒素進(jìn)入血液，和/或加速毒素排除的效果。又或可以添加其它營養(yǎng)成分或藥物成分，以增加組合物的運(yùn)用靈活性與調(diào)配度。舉例言之，本發(fā)明的益生菌組合物可另含有一種或多種如綜合維生素，或添加其它益生菌，亦或其它中草藥成分等物質(zhì)，以加強(qiáng)排毒作用或肝臟的代謝，只要添加的該活性成分對胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的效益沒有不利的影響，將可與胚芽乳酸桿菌CMU995菌株混合，用以發(fā)揮協(xié)同或加成的效果。
[0098]9.本發(fā)明的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株及其組合物，具有多種應(yīng)用形式用以保護(hù)腸道細(xì)胞、降低腸道及血液毒素、抑制酒精吸收、保護(hù)肝臟及全身其它器官等的效果。例如，胚芽乳酸桿菌CMU995菌株及其組合物可制造成醫(yī)藥組合物、健康食品、營養(yǎng)補(bǔ)充品、飲料、酸奶、一般食品及動物飼料等型式，以預(yù)防或治療疾病。
[0099]雖然本發(fā)明已以實(shí)施方式揭露如上，然而其并非用以限定本發(fā)明，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，可作各種修改與改變，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書中所界定為準(zhǔn)。`
【權(quán)利要求】
1.一種胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)CMU995菌株的用途,其應(yīng)用于保護(hù)肝臟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該胚芽乳酸桿菌CMU995菌株保藏于財團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所，其保藏編號為BCRC 910472，及保藏于德國國家菌種保藏中心，其保藏編號為DSM23780。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低評估肝臟功能指針天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)和/或丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)以保護(hù)肝臟。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低血液和/或肝臟中的膽固醇以保護(hù)肝臟。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低血液中的血脂以保護(hù)肝臟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低血液中的酒精含量以保護(hù)肝臟。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低血液中的內(nèi)毒素以保護(hù)肝臟。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低肝臟的內(nèi)毒素以保護(hù)肝臟。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以降低血液中的炎性細(xì)胞激素TNF- α以保護(hù)肝臟。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株的用途，其中該應(yīng)用于保護(hù)肝臟是用以預(yù)防酒精、炎性細(xì)胞激素TNF-α或內(nèi)毒素所引發(fā)的肝臟發(fā)炎。
11.一種保護(hù)肝臟的方法，包括將權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌(Lactobacillusplantarum) CMU995菌株傳輸至一哺乳動物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的保護(hù)肝臟的方法，其中該哺乳動物為人類。
13.一種用于保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1的胚芽乳酸桿菌CMU995菌株，其中該胚芽乳酸桿菌CMU995菌株系濃度為I X 105CFU/g至I X 1012CFU/g的干燥粉末。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其作為藥品、飼料、飲料、營養(yǎng)補(bǔ)充品、乳制品、食品、健康食品O
15.根據(jù)權(quán)利要求13的保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其用以預(yù)防或治療包括降低酒精及內(nèi)毒素所引發(fā)的肝臟發(fā)炎，并降低內(nèi)毒素所誘導(dǎo)的病變和/或癌癥的生成。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的保護(hù)肝臟的益生菌組合物，其形式為粉劑、錠劑、造粒、栓劑、微膠囊、安瓿、液劑、噴劑或塞劑。
【文檔編號】A23K1/16GK103655637SQ201210380750
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2012年10月9日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月29日
【發(fā)明者】林文鑫, 吳啟瑞 申請人:中國醫(yī)藥大學(xué)