專利名稱：用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基及該培養(yǎng)基的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基及該培養(yǎng)基的制備方法。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛又稱黑節(jié)草，屬蘭科附生蘭類，為多年生草本植物。鐵皮石斛是石斛中的極品，因其表皮呈鐵綠色而得名，是著名的觀賞兼藥用蘭花；現(xiàn)有技術(shù)中，對鐵皮石斛的培養(yǎng)階段中，大多對外植體原球莖進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖、分化、生化培養(yǎng)，得到小苗，但是對后期的試管結(jié)實的研究比較少；鐵皮石斛對生境條件要求苛刻，難結(jié)實，因此，對鐵皮石斛結(jié)實的培養(yǎng)對提高植物結(jié)實機理研究具有非常重要的意義；而現(xiàn)有的鐵皮石斛結(jié)實過程中，授粉后植株一般沒有單獨特殊的營養(yǎng)供應(yīng)導(dǎo)致營養(yǎng)元素不充足，直接影響果實發(fā)育，造成果夾小，結(jié)實率低；
并且，通常情況下，培養(yǎng)基的制備過程中一般采用熱灌裝的方式，即白糖和瓊脂粉均是經(jīng)加熱煮沸后倒入灌裝機中灌裝，該方法制備出的培養(yǎng)基營養(yǎng)元素流失嚴(yán)重，灌裝不均勻，不便于結(jié)實的培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基及該培養(yǎng)基的制備方法，該培養(yǎng)基克服現(xiàn)有技術(shù)中鐵皮石斛結(jié)實階段營養(yǎng)不良導(dǎo)致結(jié)實率低、果夾小的問題，誘導(dǎo)鐵皮石斛結(jié)實，提高鐵皮石斛結(jié)實率。為了達(dá)到 上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:提供一種用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基，其特征在于:包括
改良 MS+ 白糖 25 40g/L+ 瓊脂粉 5.5 10 g/L+NAA 0.2 0.5mg/L+ 土豆汁 30 50ml/L+紅薯汁3(T50ml/L+活性炭粉0.5 0.8g/L ;其中，改良MS培養(yǎng)基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量為MS培養(yǎng)基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余組分含量不變。本發(fā)明的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基，包括
改良 MS+ 白糖 25g/L+ 瓊脂粉 5.5g/L+NAA 0.2mg/L+ 土豆汁 30ml/L+ 紅薯汁 30ml/L+活性炭粉0.5g/L ;其中，改良MS培養(yǎng)基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量為MS培養(yǎng)基中ΚΝ03、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余組分含量不變。本發(fā)明的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基中，每升改良MS培養(yǎng)基中含有的組分及各組分的重量如下:NH4N03165mg、KNO3 5700mg、CaCl2.2H20 440mg、MgSO4.7H20370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4.H2O 16.9mg、ZnSO4.7H20 8.6mg、Na2MoO4.2H20 0.25mg、CuSO4.5H20 0.025mg、CoCl2.6H20 0.025mg、FeSO4.7H20 27.8mg、Na2-EDTA.2Η20 37.3mg、肌醇100 mg、煙酸0.5 mg、鹽酸卩比P多醇0.5 mg、鹽酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg ;這種改良的MS培養(yǎng)基通過將NH4N03、KH2PO4和H3BO3的用量增加，使氮和磷的元素含量大大增加，更有利地促進(jìn)果實的發(fā)育。
上述用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基的配制方法包括以下步驟:
a、首先將白糖和瓊脂粉進(jìn)行預(yù)處理:將白糖和瓊脂粉混合，再加入蒸餾水溶解，靜置4飛小時；其中，混合后的白糖和瓊脂粉與蒸餾水的重量比為1:10 ；
b、改良MS培養(yǎng)基母液的配制，包括母液A1、母液A2、母液A3、母液A4、母液B、母液C和母液D的配制，其中
母液Al的配制:稱取255g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A2的配制:稱取2850g KNO3置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A3的配制:稱取825g NH4N03、185g MgSO4.7H20置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙猓ㄈ葜?000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液A4的配制:稱取220mg CaCl2.2H20置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 B 的配制:分別稱量 0.83g ΚΙ、18.6g H3BO3'16.9g MnSO4.Η20、8.6g ZnSO4.7Η20、0.25g Na2MoO4.2Η20、0.025g CuSO4.5H20 和 0.025g CoCl2.6H20，加入燒杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液C的配制:分別稱量100 g肌醇、0.5 g煙酸、0.5 g鹽酸吡哆醇、0.1 g鹽酸硫胺素和2 g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 D 的配制:分別稱量 27.8g FeSO4.7Η20、37.3g Na2-EDTA.2H20 分別加入 1500ml蒸餾水溶解，然后將兩種溶液 混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攪拌，充分螯合，再定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
C、分別稱取土豆和紅薯，洗凈，削皮，切片，加入水煮沸20分鐘，并不斷攪拌，過濾取其汁液，分別得到土豆汁和紅薯汁，冷卻至40°C以下備用；
d、將預(yù)處理的白糖和瓊脂水溶液、IOml母液A1、A2、A3、A4和5 ml母液B、C、D分別倒入灌裝機中，再加入NAA、土豆汁、紅薯汁及活性炭粉，加水定容，并攪拌，調(diào)節(jié)pH值至5.8，攪拌15min后灌裝，在121°C、0.16MPa的條件下滅菌25分鐘，冷凝后制得；其中，灌裝時間為Ils,間歇時間為0.8s。本發(fā)明的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基通過采用特定含量的鐵皮石斛改良MS培養(yǎng)基、NAA、土豆汁和紅薯汁的共同協(xié)同作用，不僅為鐵皮石斛的結(jié)實培養(yǎng)提供豐富的氮、磷等營養(yǎng)元素，成本低，并且顯著激活鐵皮石斛結(jié)實的關(guān)鍵因子，從而大大提高鐵皮石斛的結(jié)實率；本發(fā)明提供的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基的制備方法通過將瓊脂粉及白糖進(jìn)行預(yù)處理及采用冷灌裝方式，可大大減少微量元素、維生素及植物激素等營養(yǎng)元素的損失，并且制備的培養(yǎng)基硬度適中，顏色白中透亮，為鐵皮石斛結(jié)實提供了關(guān)鍵的培養(yǎng)基條件；經(jīng)該培養(yǎng)基培養(yǎng)后的鐵皮石斛果夾直徑可達(dá)0.8^1cm,結(jié)實率高達(dá)90%。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述，但它們不是對本發(fā)明的進(jìn)一步限制。實施例1
該用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基的配方為:改良MS+白糖25g/L+瓊脂粉5.5g/L+NAA 0.2mg/L+ 土豆汁 30ml/L+ 紅薯汁 30ml/L+ 活性炭粉 0.5g/L ；
其中，每升改良MS培養(yǎng)基中含有的組分及各組分的重量如下=NH4NO3 165mg、KN035700mg、CaCl2.2H20 440mg、MgSO4.7H20 370mg、KH2PO4 5IOmg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4.H2O 16.9mg、ZnSO4.7H20 8.6mg、Na2MoO4.2H20 0.25mg、CuSO4.5H20 0.025mg、CoCl2.6Η20 0.025mg、FeSO4.7H20 27.8mg、Na2-EDTA.2H20 37.3mg、肌醇 100 mg、煙酸 0.5mg、鹽酸卩比卩多醇0.5 mg、鹽酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。上述用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基的配制過程為:
(1)首先將白糖和瓊脂粉進(jìn)行預(yù)處理:將白糖和瓊脂粉混合，再加入10倍重量的蒸餾水溶解，靜置4小時；
(2)改良MS培養(yǎng)基母液的配制，包括母液Al、母液A2、母液A3、母液A4、母液B、母液C和母液D的配制，其中
母液Al的配制:稱取255g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A2的配制:稱取2850g KNO3置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中；
母液A3的配制:稱取825g NH4NO3^ 185mg MgSO4.7H20置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?，定容?000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液A4的配制:稱取220mg CaCl2.2H20置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 B 的配制:分別稱量 0.83g ΚΙ、18.6g H3BO3'16.9g MnSO4.Η20、8.6g ZnSO4.7Η20、0.25g Na2MoO4.2Η20、0. 025g CuSO4.5H20 和 0.025g CoCl2.6H20，加入燒杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液C的配制:分別稱量100 g肌醇、0.5 g煙酸、0.5 g鹽酸吡哆醇、0.1 g鹽酸硫胺素和2 g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
母液 D 的配制:分別稱量 27.8g FeSO4.7Η20、37.3g Na2-EDTA.2H20 分別加入 1500ml蒸餾水中溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攪拌，充分螯合，再定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；
(3)分別稱取土豆和紅薯，洗凈，削皮，切片，加入水煮沸20分鐘，并不斷攪拌，過濾取其汁液，分別得到土豆汁和紅薯汁，冷卻至40°C以下備用；
(4)將預(yù)處理的白糖和瓊脂水溶液、IOml母液A1、A2、A3、A4和5ml母液B、C、D分別倒入灌裝機中，再加入NAA、土豆汁、紅薯汁及活性炭粉，加水定容，并攪拌，調(diào)節(jié)pH值至5.8，攪拌15min后進(jìn)行冷灌裝，在121°C、0.16MPa的條件下滅菌25分鐘，冷凝后制得該培養(yǎng)基；其中，灌裝時間為11s，間歇時間為0.8s。采用本發(fā)明的方法制備的培養(yǎng)基與白糖瓊脂粉未預(yù)處理制備的培養(yǎng)基及采用熱灌裝的方式制備的培養(yǎng)基的性能對比如表1:
權(quán)利要求
1.一種用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基，其特征在于:包括改良 MS+ 白糖 25 40g/L+ 瓊脂粉 5.5 10 g/L+NAA 0.2 0.5mg/L+ 土豆汁 30 50ml/L+紅薯汁3(T50ml/L+活性炭粉0.5 0.8g/L ;其中，改良MS培養(yǎng)基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量為MS培養(yǎng)基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余組分含量不變。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基，其特征在于:包括 改良 MS+ 白糖 25g/L+ 瓊脂粉 5.5g/L+NAA 0.2mg/L+ 土豆汁 30ml/L+ 紅薯汁 30ml/L+活性炭粉0.5g/L ;其中，改良MS培養(yǎng)基中KN03、KH2PO4和H3BO3用量為MS培養(yǎng)基中ΚΝ03、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余組分含量不變。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基，其特征在于:每升改良MS培養(yǎng)基中含有的組分及各組分的重量如下=NH4NO3 165mg、KN03 5 7 00mg、CaCl2.2Η20440mg、MgSO4.7H20 370mg、KH2PO4 510mg、KI 0.83mg、H3BO3 18.6mg、MnSO4.H2O 16.9mg、ZnSO4.7H20 8 .6mg、Na2MoO4.2H20 0.25mg、CuSO4.5H20 0.025mg、CoCl2.6H20 0.025mg、FeSO4.7H20 27.8mg、Na2-EDTA.2H20 37.3mg、肌醇 100 mg、煙酸 0.5 mg、鹽酸吡哆醇 0.5mg、鹽酸硫胺素0.1 mg、甘氨酸2 mg。
4.一種權(quán)利要求1所述的用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基的配制方法，其特征在于，包括: a、首先將白糖和瓊脂粉進(jìn)行預(yù)處理:將白糖和瓊脂粉混合，再加入蒸餾水溶解，靜置4飛小時；其中，混合后的白糖和瓊脂粉與蒸餾水的重量比為1:10 ； b、改良MS培養(yǎng)基母液的配制，包括母液A1、母液A2、母液A3、母液A4、母液B、母液C和母液D的配制，其中 母液Al的配制:稱取255g KH2PO4置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中； 母液A2的配制:稱取2850gKN03置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至5000ml,保存到棕色磨合瓶中； 母液A3的配制:稱取825g NH4N03、185g MgSO4.7H20置于燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，定容?000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液A4的配制:稱取220mg CaCl2.2H20置于燒杯中，加入蒸懼水?dāng)嚢枞芙?定容至·5·000ml，保存到棕色磨合瓶中；母液 B 的配制:分別稱量 0.83g ΚΙ、18.6g H3BO3'16.9g MnSO4.Η20、8.6g ZnSO4.7Η20、·0.25g Na2MoO4.2Η20、0.025g CuSO4.5H20 和 0.025g CoCl2.6H20，加入燒杯中溶解，定容至·5000ml，保存到棕色磨合瓶中； 母液C的配制:分別稱量100 g肌醇、0.5 g煙酸、0.5 g鹽酸吡哆醇、0.1 g鹽酸硫胺素和2 g甘氨酸，加入燒杯中溶解，定容至5000ml，保存到棕色磨合瓶中；母液 D 的配制:分別稱量 27.8g FeSO4.7Η20、37.3g Na2-EDTA.2H20 分別加入 1500ml蒸餾水溶解，然后將兩種溶液混合，加熱煮沸15分鐘，并不斷攪拌，充分螯合，再定容至·5000ml，保存到棕色磨合瓶中； C、分別稱取土豆和紅薯，洗凈，削皮，切片，加水煮沸20分鐘，并不斷攪拌，過濾取其汁液，分別得到土豆汁和紅薯汁，冷卻至40°C以下備用； d、將預(yù)處理的白糖和瓊脂水溶液、IOml母液A1、A2、A3、A4和5ml母液B、C、D分別倒入灌裝機中，再加入NAA、土豆汁、紅薯汁及活性炭粉，加水定容，并攪拌，調(diào)節(jié)pH值至5.8，攪拌15min后灌裝，在121°C、0.16MPa的條件下滅菌25分鐘，冷凝后制得；其中，灌裝時間為Ils,間歇時間 為0.8s。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于提高鐵皮石斛結(jié)實率的培養(yǎng)基，其特征在于包括改良MS+白糖25~40g/L+瓊脂粉5.5~10g/L+NAA0.2~0.5mg/L+土豆汁30~50ml/L+紅薯汁30~50ml/L+活性炭粉0.5~0.8g/L；其中，改良MS培養(yǎng)基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量為MS培養(yǎng)基中KNO3、KH2PO4和H3BO3用量的三倍，其余組分含量不變。該培養(yǎng)基通過采用特定含量的鐵皮石斛改良MS培養(yǎng)基、NAA、土豆汁和紅薯汁的共同協(xié)同作用，不僅為鐵皮石斛的結(jié)實培養(yǎng)提供豐富的氮、磷等營養(yǎng)元素，成本低，并且顯著激活鐵皮石斛結(jié)實的關(guān)鍵因子，從而大大提高鐵皮石斛的結(jié)實率。
文檔編號A01H4/00GK103120123SQ20131004181
公開日2013年5月29日 申請日期2013年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月4日
發(fā)明者林忠全 申請人:四川深達(dá)生物科技有限公司