一種牡蠣多糖及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種牡蠣多糖及其應(yīng)用，該多糖由牡蠣經(jīng)水提醇沉法提取、分離純化而成。在仔豬上的應(yīng)用表明牡蠣多糖可以促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，改善免疫應(yīng)激仔豬的腸道健康，可在仔豬上應(yīng)用于動(dòng)物保健品的研制。牡蠣多糖目前未有報(bào)道具有促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，改善免疫應(yīng)激仔豬腸道健康的作用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)牡蠣多糖能促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，改善免疫應(yīng)激仔豬腸道健康，與現(xiàn)有豬的其他保健品相比，毒副小，無(wú)不良反應(yīng)，且還有抗氧化、提高機(jī)體免疫力等作用，可長(zhǎng)期使用；牡蠣原料易得，價(jià)廉，提取分離工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)方便，開發(fā)價(jià)值高。
【專利說(shuō)明】一種牡蠣多糖及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于畜牧業(yè)領(lǐng)域，具體涉及一種牡蠣多糖及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 多糖（Polysaccharide)又叫多聚糖，是自然界中分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜且龐大的一類生 物，是由多個(gè)（10個(gè)以上到上萬(wàn)個(gè)）單糖分子或單糖衍生物縮合、失水、通過糖苷鍵連接 而成的高分子化合物。從1936年至今，隨著世界各國(guó)學(xué)者逐步深入的研究，多糖的生物 活性漸漸出現(xiàn)在人們視野中。近年來(lái)，各國(guó)學(xué)者從各種生物體內(nèi)提取并研究了大量的生 物活性多糖，人類醫(yī)學(xué)研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)多糖具有免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤；抗血栓；抗 病毒；降血脂、降血糖、保肝護(hù)肝、修復(fù)組織；抗氧化和抗衰老；抗寄生蟲、抗?jié)?、抗輻射?調(diào)節(jié)造血功能、保肝護(hù)肝、修復(fù)組織以及改善動(dòng)物生產(chǎn)性能等一系列作用。其中多糖的免 疫調(diào)節(jié)作用是主要的功能。多糖是國(guó)際上公認(rèn)的天然優(yōu)良的免疫調(diào)節(jié)劑，因此又叫生物 反應(yīng)調(diào)節(jié)劑（Biological response modifier, BRM)、生物活性多糖（Biological active polysaccharide, BAP)或免疫活性多糖（Immunological active polysaccharide)等。
[0003] 應(yīng)激，是指動(dòng)物機(jī)體受到刺激后，發(fā)生的全身適應(yīng)性的反應(yīng)，故又稱全身適應(yīng)綜合 征，它是非特異性應(yīng)答反應(yīng)的總和，最早是由Hans Selye在論文"各種不同有害因素產(chǎn)生 的綜合征"和"機(jī)體胸腺和腎上腺對(duì)外傷和中毒的反應(yīng)"中提出的，其中應(yīng)激原包括環(huán)境溫 度、各種病原微生物及毒素等各種對(duì)機(jī)體有害的物質(zhì)。Johnson認(rèn)為，不良飼養(yǎng)環(huán)境中的病 原體能激活動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。而動(dòng)物免疫應(yīng)激是指病原微生物、疫苗或 異源蛋白等抗原通過刺激動(dòng)物機(jī)體，激活免疫系統(tǒng)，使后者產(chǎn)生了免疫應(yīng)答，并導(dǎo)致動(dòng)物群 體中少數(shù)動(dòng)物采食量下降，生長(zhǎng)緩慢的一種普遍現(xiàn)象。免疫應(yīng)激在畜牧業(yè)的生產(chǎn)實(shí)踐中普 遍存在，誘因主要包括疫苗的使用不當(dāng)，免疫程序不合理，生產(chǎn)環(huán)境惡劣而使病原微生物滋 生等。張建峰等曾報(bào)告了秦川牛注射口蹄疫油乳劑滅活苗后，部分牛出現(xiàn)精神萎靡不振，體 溫升高，采食量下降，瘤胃蠕動(dòng)減弱的癥狀；劉建明等也報(bào)告過羊群在注射?？谔阋擤栃兔?后出現(xiàn)精神不振，食欲減退甚至廢絕等異常癥狀，之后有母羊和小羊出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象。上述 實(shí)例充分說(shuō)明，由于疫苗的安全性不高或者個(gè)別畜禽對(duì)其反映強(qiáng)烈，部分畜禽在免疫后產(chǎn) 生應(yīng)激反應(yīng)，出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢，采食量下降，體溫升高等應(yīng)激癥狀，有的甚至出現(xiàn)個(gè)別畜禽死 亡的現(xiàn)象。由此可知，免疫應(yīng)激已對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展造成了一定的影響。
[0004] 腸道屏障分別由腸黏膜機(jī)械屏障、化學(xué)屏障、生物屏障和免疫屏障組成。當(dāng)外來(lái)抗 原侵襲時(shí)，各個(gè)屏障通過自身的分子調(diào)控機(jī)制和生物學(xué)功能協(xié)同抵抗。動(dòng)物機(jī)體和外界環(huán) 境接觸面積最大的是腸黏膜。其屏障功能由特異性免疫效應(yīng)和非特異性屏障組成 [15]。特 異性免疫屏障是指由腸黏膜介導(dǎo)的體液和細(xì)胞免疫系統(tǒng)，即腸黏膜免疫系統(tǒng)，包括腸相關(guān) 淋巴組織、免疫效應(yīng)分子、細(xì)胞因子和彌散免疫細(xì)胞。腸黏膜免疫系統(tǒng)既要忙碌于對(duì)營(yíng)養(yǎng)物 質(zhì)的消化吸收以維持機(jī)體的需要,又要對(duì)抗外來(lái)抗原物質(zhì)的侵入,產(chǎn)生正確的免疫應(yīng)答。
[0005] 應(yīng)激會(huì)使與大分子營(yíng)養(yǎng)代謝和細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)量明顯下降，而與氧化應(yīng) 激和免疫激活相關(guān)的基因的表達(dá)量顯著上升，刺激仔豬腸道炎性細(xì)胞因子如IL-I、IL-6、 IL-12等的過量表達(dá)，從而引起腸黏膜代謝和生理紊亂，導(dǎo)致腸道損傷。免疫應(yīng)激會(huì)抑制仔 豬和雞的食欲；降低日增重和日采食量；肌肉組織、脂肪組織、體蛋白質(zhì)和體脂肪的生長(zhǎng)或 沉積速度降低 目前已有200多種多糖被發(fā)現(xiàn)具有增強(qiáng)免疫的功能。關(guān)于多糖的生物學(xué)活性和功能性 研究的逐漸深入，越來(lái)越多的多糖產(chǎn)品被開成為具有使用價(jià)值的美容和醫(yī)藥產(chǎn)品。通過與 淋巴細(xì)胞的相互影響發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，多糖更是成為現(xiàn)今免疫學(xué)研究的寵兒。
[0006] 牡販為牡販科動(dòng)物長(zhǎng)牡販（Ostrea gigas thunb)或近江牡販（Ostrea rivularis gould)等的肉。別名牡蛤《名醫(yī)別錄》，蠣蛤《神農(nóng)本草經(jīng)》，蠣房、蠔莆《本草圖經(jīng)》，左殼《中 藥志》，蠔《本草綱目》。牡蠣生于江河流入大海處，系雜食性動(dòng)物，以細(xì)小的浮游生物為食。 牡蠣在世界各國(guó)如中國(guó)、日本、美國(guó)等地都有生產(chǎn)，生長(zhǎng)于沿海、河口及內(nèi)灣?！睹耖g獸醫(yī)本 草》中記載：牡蠣味咸澀，性涼。斂陰潛陽(yáng)，止汗?jié)??！稁熁拾搀K集》:"味咸，微寒。下焦?jié)?感，汗多出，陰下濕氣，泄精，心脅痞熱用之良。"《抱犢集》："補(bǔ)腎，補(bǔ)大腸，補(bǔ)小腸。"《獸醫(yī) 藥性賦》："固澀軟堅(jiān)散陰結(jié)。" 牡販粗多糖（Oyster polysaccharides, 0PS)是從牡販中提取出來(lái)的有效活性成分之 一。它可以通過不同的方式抑制病毒的增殖和腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)，也可以通過T淋巴細(xì)胞的 活性介導(dǎo)免疫應(yīng)答，參與免疫反應(yīng)。李志研究表明，牡蠣粗多糖中可得到OPS- I和OPS-II 兩種多糖，同時(shí)對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)中表明其具有較好的抗氧化作用，且腹腔注射3mg/ml牡蠣粗多 糖能提高正常小鼠免疫功能，有效增加脾淋巴細(xì)胞和碳廓清潔力。其它研究表明，牡蠣粗提 液具有抗腫瘤，抗氧化衰老，抗菌抗病毒，以及提高機(jī)體免疫功能等作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于提供一種牡蠣多糖及其應(yīng)用，牡蠣多糖是從牡蠣中提取出來(lái)的 有效活性成分之一。它可以通過不同的方式抑制病毒的增殖和腫瘤細(xì)胞的增長(zhǎng)，也可以通 過T淋巴細(xì)胞的活性介導(dǎo)免疫應(yīng)答，參與免疫反應(yīng)。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種牡蠣多糖，由葡萄糖單糖組成，由牡蠣經(jīng)水提醇沉法提取、分離純化而獲得。
[0009] 一種牡蠣多糖在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中的應(yīng)用。
[0010] 所述牡蠣多糖在日糧中的含量為〇· 5-1. 2%。
[0011] 未見其具有促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，改善免疫應(yīng)激仔豬腸道健康作用的有文獻(xiàn)報(bào)道。
[0012] 牡蠣多糖的提取方法及其理化特性由于已經(jīng)發(fā)表，故不作為專利保護(hù)。具體方法 見李志的碩士論文《牡蠣多糖的分離純化及生物學(xué)活性研究》。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于： 1、牡蠣多糖目前未有報(bào)道具有促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，改善免疫應(yīng)激仔豬腸道健康的作用。本 發(fā)明發(fā)現(xiàn)牡蠣多糖能促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)，改善免疫應(yīng)激仔豬腸道健康，與現(xiàn)有豬的其他保健品 相比，毒副小，無(wú)不良反應(yīng)，且還有抗氧化、提高機(jī)體免疫力等作用，可長(zhǎng)期使用；2、牡蠣 原料易得，價(jià)廉，提取分離工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)方便，開發(fā)價(jià)值高。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1十二指腸(左)、空腸（中）和回腸(右）HE染色圖。

【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明： 實(shí)施例1牡蠣多糖的提取與純化 利用水提醇沉法提取牡蠣粗多糖，在單因素分析（提取時(shí)間、料液比、提取溫度）的 基礎(chǔ)上進(jìn)行正交分析，優(yōu)化提取條件。正交試驗(yàn)結(jié)果顯示，多糖提取的最佳工藝為溫度為 90°C，料液比為1 :80,時(shí)間為3 h。采用苯酚一硫酸法測(cè)得牡蠣粗多糖總糖含量為72. 43%。 牡蠣粗多糖經(jīng)除蛋白、透析、DEAE-52離子交換柱和Sephadex G-100凝膠層析柱，得到 OPSII和OPSIIb兩種多糖組分。紫外光譜分析（UV)顯示，在260 m和280 nil 1均無(wú)核酸 和蛋白質(zhì)吸收峰。高效液相色譜（HPLC)法檢測(cè)OPSIIb，有一個(gè)吸收峰，說(shuō)明OPSIIb為均一 多糖，可對(duì)其進(jìn)行組成和結(jié)構(gòu)分析。OPSIIb通過高效液相色譜（HPLC)、氣相色譜（GC)、紅外 光譜（IR)、薄層色譜（TLC)和其他物理化學(xué)分析方法初步鑒定多糖的理化性質(zhì)，結(jié)果表明 OPSIIb具有多糖的特征吸收峰而且OPSIIb是由葡萄糖一種組分組成。
[0016] 實(shí)施例2牡蠣粗多糖對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響 1材料和方法 1. 1材料 LPS (大腸桿菌血清型 055 :B5，Sigma 公司），ELISA 試劑盒（Cusabio Biotech Co. , LTD) ； Trizol Prime Script? RT reagent Kit Perfect Real Time (TaKaRa Biotechnology Co. , Ltd),突光試劑盒(北京百泰克生物技術(shù)有限公司），瓊脂糖。
[0017] 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì) 選取體重相近的30頭日齡在（28±l)d的斷奶杜洛克X長(zhǎng)白X大白三元已閹割公仔 豬，隨機(jī)分為空白對(duì)照組（A組)，應(yīng)激對(duì)照組（B組)，牡蠣粗多糖高（C組)、中（D組)、低劑量 (E組）組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭豬?？瞻讓?duì)照組和免疫應(yīng)激組飼喂基礎(chǔ)日糧，牡蠣 粗多糖高、中、低劑量組分別飼喂含有I. 2%、0. 8%、0. 5%牡蠣粗多糖的基礎(chǔ)日糧，飼喂周期 為30d。試驗(yàn)前12h斷水?dāng)嗔希囼?yàn)各組腹腔注射100μ g/kg BW LPS，空白對(duì)照組注射等量 生理鹽水。于注射3h后采血，剖檢。
[0018] 測(cè)定方法 (1) 生長(zhǎng)性能指標(biāo) 始重：試驗(yàn)期第一天所稱的重量（kg) 末重：結(jié)束試驗(yàn)當(dāng)天所稱的重量（kg) 平均日增重（ADG):(末重-始重）（g)/試驗(yàn)天數(shù)（d) 平均日采食量(ADFI):全期采食量（g) /試驗(yàn)天數(shù)（d) 料肉比（F/G):飼料消耗（kg) /增重（kg) (2) 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS13. 0統(tǒng)計(jì)軟件Compare Means中的單因素方差分析，用LSD和S-N-K進(jìn)行方 差異顯著性分析，結(jié)果采用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差（Mean土S.D)表示。本試驗(yàn)各實(shí)施例數(shù)據(jù)都按 如上統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行分析。
[0019] 結(jié)果分析 2. 1仔豬生長(zhǎng)性能 表1仔豬生長(zhǎng)性能結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種牡蠣多糖，其特征在于：所述牡蠣多糖由葡萄糖單糖組成，由牡蠣經(jīng)水提醇沉 法提取、分離純化而獲得。
2. -種如權(quán)利要求1所述的一種牡蠣多糖在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種牡蠣多糖在斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中的應(yīng)用，其特征在于： 所述牡蠣多糖在日糧中的含量為〇. 5-1. 2%。
【文檔編號(hào)】A23K1/16GK104311694SQ201410576493
【公開日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月24日
【發(fā)明者】黃志堅(jiān), 殷光文, 江和基, 陳騰騰, 羅剛, 李志
申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)