本發(fā)明屬于植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：
南川木菠蘿(ArtocarpusnanchuanensisS.S.Chang)是多年生高大喬木植物，系?？撇_蜜屬分布在我國(guó)最北端的植物。別名南川面包樹(shù)，水冬瓜，瓜瓢，大楊梅。1989年由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所吳征鎰院士和張秀實(shí)教授在《云南植物研究》11卷第1期上正式發(fā)表定為?？频囊粋€(gè)新種(吳征鎰和張秀實(shí)，1989)。2004年，南川木菠蘿被《中國(guó)物種紅色名錄》確定為“極危”物種，是我國(guó)最為珍稀的特有植物之一(孫容，2011)。目前報(bào)道，主要分布于重慶部分區(qū)縣(羅宏果等，2012)，已發(fā)現(xiàn)并得到良好保護(hù)的野生南川木菠蘿有6個(gè)居群，結(jié)果母樹(shù)100株左右(羅宏果和王紅娟，2012)。南川木菠蘿喜光，耐貧瘠，散生于海拔900m以下的山地、丘陵(羅宏果等，2012)。南川木菠蘿的樹(shù)干直立、粗壯，樹(shù)高可達(dá)25m以上，樹(shù)干胸徑可達(dá)60cm以上，低分枝，樹(shù)葉繁茂。葉革質(zhì)，長(zhǎng)圓形、橢圓形或近圓形，表面光滑，葉綠色或濃綠色，四季常綠。因此，南川木菠蘿表現(xiàn)出樹(shù)形美觀，抗逆性強(qiáng)，病蟲(chóng)害極少，具有較好的園林景觀和生態(tài)效應(yīng)，是難得的行道樹(shù)、庭園綠化的優(yōu)質(zhì)樹(shù)種。2008年重慶市將其確定為主城新城區(qū)9個(gè)基調(diào)樹(shù)種之一(孫容，2011；羅宏果等，2012)。另外，南川木菠蘿果實(shí)形似面包，具有較高的營(yíng)養(yǎng)和醫(yī)用保健價(jià)值，含有人體必須的多種糖、蛋白質(zhì)、氨基酸和酯類(lèi)，以及一些人體所必須的微量元素和多種維生素，可加工調(diào)制出風(fēng)味獨(dú)特、品質(zhì)優(yōu)良的果酒、果汁、果脯及果醬等；通便通氣的效果明顯，對(duì)便秘等腸道疾病具有較好的控制作用，民間使用表明，其樹(shù)皮和樹(shù)根對(duì)人體的皮膚病有較好的療效。其木材紅棕色，紋理細(xì)密、質(zhì)地堅(jiān)硬，用來(lái)可制作家具。因此，南川木菠蘿可以從園林、飲料食品、醫(yī)藥保健、經(jīng)濟(jì)木材等方面進(jìn)行開(kāi)發(fā)利用(羅宏果等，2012)。南川木菠蘿的價(jià)值逐漸引起了相關(guān)單位的關(guān)注并初步展開(kāi)了引種工作。例如，貴州亞熱帶作物生物質(zhì)能源研究所周正邦等研究表明，南川木菠蘿可以成功引種到貴州望謨和興義等地，這對(duì)貴州熱區(qū)生態(tài)建設(shè)、特色農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)等具有重要意義。為增加貴州特色優(yōu)新物種，同時(shí)引種的太平洋面包樹(shù)則不能安全越冬(周正邦等，2012)。但是，南川木菠蘿種子具有休眠特性，少數(shù)休眠期可長(zhǎng)達(dá)1年，發(fā)芽出苗不一致。因此，南川木菠蘿的自然更新和繁衍能力極差。人工繁殖多為播種繁殖，秋播采用隨采隨播，春播需要進(jìn)行沙藏處理?？汕げ宸敝?，但成活率低(羅宏果等，2012)。相關(guān)單位對(duì)這一珍稀物種資源進(jìn)行了多年的調(diào)查研究，南川木菠蘿的種子繁殖技術(shù)取得了某些階段性成果(孫容，2011)，形成了扦插繁殖方法，但扦插成活率僅50％左右(羅宏果等，2013)，其繁殖受到季節(jié)影響，且需要大量土地和人工，不利于規(guī)?；a(chǎn)。因此，建立南川木菠蘿的組織培養(yǎng)體系可很好的保護(hù)南川木菠蘿這一瀕危植物資源，解決產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)所需種苗，同時(shí)為建立遺傳轉(zhuǎn)化體系和進(jìn)一步挖掘相關(guān)資源奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法，旨在解決南川木菠蘿這一瀕危植物的資源保護(hù)和產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)所需種苗，同時(shí)為建立南川木菠蘿的遺傳轉(zhuǎn)化體系和挖掘相關(guān)基因資源奠定基礎(chǔ)。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法，所述南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法建立起南川木菠蘿的組織培養(yǎng)體系；南川木菠蘿組織培養(yǎng)的外植體為帶芽莖段；南川木菠蘿愈傷培養(yǎng)的培養(yǎng)基為WPM+2.0mg/L2，4–D+0.2或0.3mg/L6-BA+3g/LPVP；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+3.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+3g/LPVP；生根培養(yǎng)基為WPM+1.5mg/LIBA+0.1mg/LNAA+3g/LPVP；組培苗煉苗時(shí)長(zhǎng)為6－9天，使用滅菌營(yíng)養(yǎng)土。進(jìn)一步，所述南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法包括以下步驟：步驟一，采集10年以上成年南川木菠蘿樹(shù)上帶芽莖段為外植體；步驟二，選取適度大小的帶有2-3個(gè)芽的莖段，去掉衰老腐化的組織，蒸餾水浸泡5分鐘，流水沖洗15分鐘，用蒸餾水沖洗3-5次，75％乙醇處理30-60秒，無(wú)菌水沖洗3次，2％次氯酸鈉處理10-15分鐘，無(wú)菌濾紙吸干水，接種至相應(yīng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；步驟三，消毒完成的帶芽莖段首先放入枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基，再選取重新生長(zhǎng)出來(lái)的幼葉切割成1-2平方厘米的外植體進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，芽的分化誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)及移栽成苗。進(jìn)一步，所述培養(yǎng)基包括：枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基、愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。進(jìn)一步，所述枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基、愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基采用高壓蒸汽進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌，在121℃、0.105MPa的壓力下，滅菌15min～20min，滅好備用。進(jìn)一步，所述枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基:以WPM為基本培養(yǎng)基，附加3g/L的聚乙烯吡咯烷酮。進(jìn)一步，所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基以WPM為基本培養(yǎng)基，PH＝5.7，附加2.0mg/L2，4–D、0.2或0.3mg/L6-BA和3g/LPVP。進(jìn)一步，所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以WPM為基本培養(yǎng)基，PH＝5.8，附加3.0mg/L6-BA、0.2mg/LNAA和3g/LPVP。進(jìn)一步，所述生根培養(yǎng)基以WPM為基本培養(yǎng)基，PH＝5.8，附加1.5mg/LIBA、0.1mg/LNAA和3g/LPVP。進(jìn)一步，所述愈傷誘導(dǎo)采用暗處理，28℃處理48小時(shí)，瓊脂用量為6.0g/L，培養(yǎng)基pH值為5.7。其它培養(yǎng)條件為白天25℃，夜晚18℃；光照強(qiáng)度1000～2000lx；光暗周期15h/9h；相對(duì)濕度80％，瓊脂用量為6.0g/L，培養(yǎng)基pH值5.8。進(jìn)一步，所述煉苗營(yíng)養(yǎng)土采用滅菌處理，煉苗時(shí)間為6天～9天。本發(fā)明提供的南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法，首次建立了南川木菠蘿組織培養(yǎng)繁殖體系，通過(guò)葉片即可大量繁殖南川木菠蘿，使南川木菠蘿這一瀕危植物資源通過(guò)實(shí)驗(yàn)室條件得以很好保護(hù)，同時(shí)又可以提供大量苗木用于生產(chǎn)；南川木菠蘿作為林木樹(shù)種，在組織培養(yǎng)過(guò)程中褐化比較嚴(yán)重，從而導(dǎo)致組織培養(yǎng)過(guò)程部分組織死亡而不能成功誘導(dǎo)出苗。本發(fā)明克服了南川木菠蘿組織培養(yǎng)過(guò)程中褐化致死現(xiàn)象，能成功誘導(dǎo)出幼苗，建立的南川木菠蘿組織培養(yǎng)技術(shù)體系可使幼葉愈傷誘導(dǎo)率達(dá)100％，出芽誘導(dǎo)率200％(30個(gè)帶愈傷外植體可誘導(dǎo)出60個(gè)芽)，生根率達(dá)75％以上，移栽成活率90％以上，因此可以使用該組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行南川木菠蘿的苗木生產(chǎn)；進(jìn)行南川木菠蘿苗木生產(chǎn)時(shí)，是在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下利用葉片形成愈傷，再誘導(dǎo)分化出幼苗，生產(chǎn)苗木的初始原料為切割的小葉片外植體，相對(duì)于扦插育苗可以規(guī)模化低成本的開(kāi)展南川木菠蘿的苗木生產(chǎn)，同時(shí)克服了扦插育苗的季節(jié)性和低成活率的局限。本發(fā)明南川木菠蘿組織培養(yǎng)的外植體為帶芽莖段，通過(guò)帶芽莖段獲得的無(wú)菌幼葉進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)時(shí)基本無(wú)褐化現(xiàn)象；南川木菠蘿愈傷培養(yǎng)的培養(yǎng)基為WPM+2.0mg/L2，4–D+0.2或0.3mg/L6-BA+3g/LPVP，能很好的利用莖段再生幼葉誘導(dǎo)出愈傷組織，防止褐化現(xiàn)象的發(fā)生，愈傷誘導(dǎo)率為100％；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為WPM+3.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+3g/LPVP，該培養(yǎng)基能很好的促進(jìn)愈傷組織分化出芽，芽誘導(dǎo)率為200％；生根培養(yǎng)基為WPM+1.5mg/LIBA+0.1mg/LNAA+3g/LPVP，可使75％的幼苗誘導(dǎo)生根，減輕褐化現(xiàn)象的發(fā)生；組培苗煉苗時(shí)長(zhǎng)為6－9天，使用滅菌營(yíng)養(yǎng)土，可以提高移栽成活率。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法流程圖。具體實(shí)施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。本發(fā)明從外植體選擇到幼苗移栽，對(duì)南川木菠蘿組織培養(yǎng)各相關(guān)環(huán)節(jié)進(jìn)行了研究。首次建立起了南川木菠蘿的組織培養(yǎng)體系；結(jié)果表明，南川木菠蘿組織培養(yǎng)適宜的外植體為帶芽莖段，探明了獲得無(wú)菌外植體的方法；南川木菠蘿愈傷培養(yǎng)的優(yōu)選培養(yǎng)基為WPM+2.0mg/L2，4–D+0.2或0.3mg/L6-BA+3g/LPVP，芽誘導(dǎo)優(yōu)選培養(yǎng)基為WPM+3.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+3g/LPVP，生根優(yōu)選培養(yǎng)基為WPM+1.5mg/LIBA+0.1mg/LNAA+3g/LPVP；適宜的組培苗煉苗時(shí)長(zhǎng)為6－9天，使用滅菌營(yíng)養(yǎng)土較好，移栽存活率可達(dá)90％以上。下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作詳細(xì)的描述。如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例的南川木菠蘿組織培養(yǎng)方法包括以下步驟：S101：采集10年以上成年南川木菠蘿樹(shù)上帶芽莖段為外植體；S102：選取適度大小的帶2-3個(gè)芽的莖段，去掉衰老腐化的組織，蒸餾水浸泡5分鐘，流水沖洗15分鐘，用蒸餾水沖洗3-5次，75％乙醇處理30-60秒，無(wú)菌水沖洗3次，2％次氯酸鈉處理10-15分鐘，無(wú)菌濾紙吸干水，接種至相應(yīng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；S103：消毒完成的帶牙莖段首先放入枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基，再選取重新生長(zhǎng)出來(lái)的幼葉切割成1-2平方厘米的外植體進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，芽的分化誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)及移栽成苗。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步的描述。1材料與方法1.1材料南川木菠蘿組織培養(yǎng)快速繁殖系統(tǒng)的建立以重慶綦江區(qū)東坡鎮(zhèn)野生群為試材。采集10年以上成年南川木菠蘿樹(shù)上帶芽莖段、嫩葉、幼嫩莖段為外植體。1.2材料處理1.2.1消毒：選取適度大小的嫩葉、帶芽莖段、幼嫩莖段，去掉衰老腐化的組織，蒸餾水浸泡5分鐘，流水沖洗15分鐘，用蒸餾水沖洗3-5次，75％乙醇處理30-60秒，無(wú)菌水沖洗3次，2％次氯酸鈉(滴加幾滴tween-20)處理10-15分鐘，無(wú)菌濾紙吸干水，接種至相應(yīng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。1.2.2組織培養(yǎng)方式：消毒完成的帶芽莖段首先放入枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基，再選取重新生長(zhǎng)出來(lái)的幼葉切割成1-2平方厘米的外植體進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)，芽的分化誘導(dǎo)，生根培養(yǎng)及移栽成苗。直接從成年大樹(shù)上采集的幼葉和幼嫩莖段經(jīng)過(guò)消毒處理后，幼葉切割為1-2平方厘米，幼嫩莖段切割為1.5-2厘米直接進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)。1.3培養(yǎng)基采用高壓蒸汽進(jìn)行培養(yǎng)基滅菌，設(shè)定在121℃，0.105MPa的壓力下，滅菌15－20min，滅好備用。1.3.1枝條生長(zhǎng)培養(yǎng)基以WPM(WoodyPlantmedium)為基本培養(yǎng)基，附加3g/L的聚乙烯吡咯烷酮(PVP，Polyvinylpyrrolidone)。1.3.2愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基以WPM為基本培養(yǎng)基，PH＝5.7，附加6-BA和2，4－D或IAA，具體濃度設(shè)計(jì)組成見(jiàn)表1。PVP附加濃度為3.0g/L。每個(gè)處理設(shè)計(jì)3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)設(shè)計(jì)10個(gè)外植體，統(tǒng)計(jì)愈傷誘導(dǎo)率(愈傷誘導(dǎo)率＝形成愈傷外植體數(shù)/總外植體數(shù))。1.3.3芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基以WPM為基本培養(yǎng)基，PH＝5.8，附加不同濃度6-BA，NAA和3g/L的PVP，6-BA設(shè)計(jì)1.0ppm，2.0ppm,3.0ppm，4.0，5.05個(gè)濃度，NAA設(shè)計(jì)0.1ppm,0.2ppm2個(gè)濃度，不同濃度的6-BA和NAA進(jìn)行兩兩組合配制培養(yǎng)基。每種激素組合接種愈傷3瓶，每瓶接種帶有愈傷的外植體5塊，并統(tǒng)計(jì)芽誘導(dǎo)率。1.3.4生根培養(yǎng)基以WPM為基本培養(yǎng)基，PH＝5.8，附加不同濃度IBA、NAA和3g/L的PVP，IBA設(shè)計(jì)0.5ppm，1.0ppm，1.5ppm，2.0ppm四個(gè)濃度，NAA設(shè)計(jì)0.1ppm和0.2ppm兩個(gè)濃度。每個(gè)濃度處理使用20個(gè)幼苗，統(tǒng)計(jì)出根苗數(shù)，計(jì)算生根率(生根率＝生根苗數(shù)/總苗數(shù))，3個(gè)月后結(jié)束生根統(tǒng)計(jì)。1.4培養(yǎng)條件愈傷誘導(dǎo)階段采用暗處理，28℃48小時(shí)，其它無(wú)菌培養(yǎng)條件為白天25℃，夜晚18℃；光照強(qiáng)度1000～2000lx；光暗周期15h/9h；相對(duì)濕度80％。瓊脂用量為6.0g/L，培養(yǎng)基pH值5.8。1.5煉苗移栽營(yíng)養(yǎng)土處理設(shè)計(jì)滅菌和不滅菌。煉苗時(shí)間長(zhǎng)設(shè)計(jì)為0天、3天、6天、9天、12天、15天5個(gè)處理，每個(gè)處理10株。統(tǒng)計(jì)移栽存活率(移栽存活率＝存活苗數(shù)/移栽總苗數(shù))。2結(jié)果與分析2.1不同外植體的愈傷誘導(dǎo)從母株上采取的嫩葉、幼莖在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-10天后表現(xiàn)出褐化現(xiàn)象；而帶芽莖段在枝條培養(yǎng)基培養(yǎng)20-25天可長(zhǎng)出新葉，再利用長(zhǎng)出的新葉作為外植體在愈傷培養(yǎng)基上培養(yǎng)可形成良好愈傷。因此，本發(fā)明以莖段芽長(zhǎng)出的新葉為材料進(jìn)行愈傷、幼芽誘導(dǎo)及生根培養(yǎng)。在培養(yǎng)基中附加PVP可以緩解外植體培養(yǎng)的褐化，在沒(méi)有添加PVP的培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷、芽誘導(dǎo)及生根培養(yǎng)時(shí)，褐化較嚴(yán)重，PVP的添加濃度以3g/L為宜。2.2不同激素組合對(duì)愈傷誘導(dǎo)的影響取從無(wú)菌枝條新長(zhǎng)出的嫩葉，切割成約1x1.5厘米大小的外植體，置于附加不同激素的愈傷培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)。接種10－12天后，葉片周?chē)黠@增厚，體積膨大，周?chē)刃纬捎鷤M織。30天后進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)統(tǒng)計(jì)(表1)，結(jié)果表明不同激素和濃度其愈傷組織誘導(dǎo)率差異明顯，附加2，4–D的培養(yǎng)基愈傷誘導(dǎo)率為17％－100％，而附加IAA的愈傷誘導(dǎo)率為7％－50％。附加2，4–D對(duì)南川木菠蘿葉片愈傷的誘導(dǎo)以2.0mg/L水平最好，平均誘導(dǎo)率為98％，比1.0mg/L和3.0mg/L2，4–D的平均誘導(dǎo)率分別高70％和9％。在本發(fā)明中2，4–D對(duì)南川木菠蘿葉子的愈傷誘導(dǎo)效果比IAA好，其中WPM+2，4–D2.0mg/L+6-BA0.2或0.3mg/L以及WPM+2，4–D3.0mg/L+6-BA0.2誘導(dǎo)率高達(dá)100％。表1不同激素對(duì)南川木菠蘿葉片愈傷誘導(dǎo)的影響2.3不同激素組合對(duì)芽誘導(dǎo)的影響在愈傷培養(yǎng)基中培養(yǎng)3-4周后轉(zhuǎn)入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不同激素組合的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織培養(yǎng)的褐化程度不同，其中附加1.0mg/L和5.0的6-BA愈傷褐化程度較高，實(shí)驗(yàn)的30個(gè)帶愈傷外植體沒(méi)有誘導(dǎo)出芽，附加2.0和3.0mg/L的6-BA的培養(yǎng)基芽誘導(dǎo)效果較好，其中培養(yǎng)基WPM+3.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+3g/LPVP芽誘導(dǎo)率最高，30個(gè)外植體可誘導(dǎo)60個(gè)芽。當(dāng)提高6-BA附加濃度到4.0mg/L，芽誘導(dǎo)率極低，30個(gè)外植體誘導(dǎo)出2個(gè)芽，且褐化較重。NAA的濃度以0.2mg/L與6-BA的組合，較適宜南川木菠蘿芽的誘導(dǎo)。2.4生根培養(yǎng)當(dāng)芽伸長(zhǎng)到約3厘米時(shí)，從基部切取幼苗，并帶少量愈傷接入生根培養(yǎng)基。不同激素對(duì)南川木菠蘿芽的根誘導(dǎo)，以培養(yǎng)基wps+1.5mg/LIBA+0.1mg/LNAA+3mg/LPVP效果最好，生根率達(dá)75％，相對(duì)較高，1個(gè)月左右可使幼苗生根，而附加1.0mg/L的IBA培養(yǎng)基生根需要約2個(gè)月，且生根率為25％，相對(duì)較低。當(dāng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中附加0.5ppm和2.0的IBA時(shí)，三個(gè)月內(nèi)不能誘導(dǎo)出根。2.5幼苗馴化移栽幼苗在生根培養(yǎng)基生長(zhǎng)到6-8厘米時(shí)開(kāi)始煉苗移栽，移栽前揭開(kāi)封口膜進(jìn)行煉苗。之后去掉大部分葉片和殘留培養(yǎng)基，保留2-3片葉移入滅菌營(yíng)養(yǎng)土。本發(fā)明中滅菌營(yíng)養(yǎng)土可以明顯提高移栽存活率，在煉苗6天的情況下，移栽15株幼苗存活14株，而使用未滅菌營(yíng)養(yǎng)土移栽15株幼苗存活7株。煉苗時(shí)間6-9天比較適宜，在滅絕營(yíng)養(yǎng)土中存活率可達(dá)90％，0天、3天、12天和15天煉苗時(shí)長(zhǎng)相應(yīng)的存活率分別為10％、30％、50％、30％。當(dāng)煉苗時(shí)間較短時(shí)進(jìn)行移栽，幼嫩莖段易干枯，影響存活率，煉苗時(shí)間較長(zhǎng)則容易長(zhǎng)菌，而且失水嚴(yán)重，降低移栽存活率。苗期要注意保持水分，使?fàn)I養(yǎng)土保持潤(rùn)濕，移栽后約7天即可恢復(fù)生長(zhǎng)。南川木菠蘿系?？撇_蜜屬分布在我國(guó)最北端的植物，是十分寶貴的植物資源，同時(shí)具有較好的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)前景。南川木菠蘿組培繁殖技術(shù)的建立將有利于該瀕危植物的保護(hù)；通過(guò)該技術(shù)可以培育大量苗木，促進(jìn)該資源的綠化、食品、醫(yī)藥等產(chǎn)品的合理利用和開(kāi)發(fā)；也為將來(lái)進(jìn)一步開(kāi)展相關(guān)生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。南川木菠蘿是一種高大喬木植物，在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)褐化現(xiàn)象比較嚴(yán)重，本發(fā)明表明PVP、適當(dāng)?shù)募に貪舛群团浔瓤梢砸欢ǔ潭葴p緩褐化現(xiàn)象，探索抑制組織培養(yǎng)中的褐化現(xiàn)象，將是改良南川木菠蘿組織培養(yǎng)技術(shù)的途徑之一。例如，本發(fā)明中將形成的愈傷進(jìn)行芽誘導(dǎo)時(shí)，如果中芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中附加6-BA濃度為1.0mg/L時(shí)愈傷呈現(xiàn)發(fā)育緩慢，培養(yǎng)3天左右即出現(xiàn)較嚴(yán)重的褐化現(xiàn)象，不能分化出芽；當(dāng)6-BA濃度增加到3.0時(shí)，褐化相對(duì)較輕，能分化出芽，可能與提高6-BA的濃度進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞分裂有關(guān)；當(dāng)6-BA濃度增加到5.0時(shí)，褐化相對(duì)1.0的濃度較輕，但較3.0濃度嚴(yán)重，且發(fā)育緩慢，檢測(cè)的30個(gè)外植體中沒(méi)有芽的分化，可能是高濃度的6-BA破壞了組織發(fā)育的激素平衡?？扇苄跃垡蚁┻量┩橥?PVP)是酚類(lèi)物質(zhì)的，專一性吸附劑，用于防止褐化的發(fā)生，PVP能減輕南川木菠蘿組織培養(yǎng)中的褐化率，2-5g/L的濃度都有作用，以3g/L效果較好。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。