本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種高效快速繁殖牡丹的方法。
背景技術(shù)：
：牡丹屬于芍藥科(原毛莨科)芍藥屬牡丹組(Sect.MoutanDC.)植物，原產(chǎn)我國(guó)，是我國(guó)傳統(tǒng)名花。自然條件下適宜移栽期在每年的九月下旬到十月上旬。由于牡丹的適宜移栽期短，移栽后生根困難，常常造成牡丹移栽后成活率低，緩苗期長(zhǎng)，植株生活力弱，限制了牡丹的廣泛栽培和觀賞價(jià)值的提高。牡丹用于群體綠化美麗中國(guó)和油料生產(chǎn)亟需大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗。目前生產(chǎn)上繁殖牡丹種苗的方法主要有播種、嫁接、分株和吊包等方法，播種繁殖的實(shí)生苗存在兩個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題，繁殖后代群體變異大，苗木質(zhì)量難以保證；田間播種繁殖的植株大多數(shù)帶有根結(jié)線蟲(chóng)病，容易導(dǎo)致病疫傳播，嚴(yán)重制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展和國(guó)內(nèi)外交流。牡丹無(wú)性繁殖方式主要有嫁接、分株、吊包等，這些繁殖方式受到母株品質(zhì)和繁殖材料數(shù)量和質(zhì)量限制，主要用于觀賞牡丹品種繁殖，且種苗大小、長(zhǎng)勢(shì)等參差不齊，難以標(biāo)準(zhǔn)化或量化生產(chǎn)。牡丹無(wú)性繁殖存在的主要問(wèn)題是：(1)外植體(鱗芽)表面消毒困難，需要用劇毒消毒劑氯化汞，其殘留對(duì)環(huán)境、操作者和培養(yǎng)材料等會(huì)有影響；(2)不定芽在培養(yǎng)基上容易褐化以至死亡；(3)試管苗生根困難，移栽馴化難以成活。小植株(生根試管苗)從實(shí)驗(yàn)室環(huán)境過(guò)渡到適應(yīng)田間環(huán)境的過(guò)程中容易死亡。本領(lǐng)域技術(shù)人員致力于開(kāi)發(fā)牡丹生根劑，能夠促進(jìn)牡丹移栽后新根形成和生長(zhǎng)，延長(zhǎng)牡丹移栽的適宜期，滿足人們對(duì)栽種牡丹花的迫切需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于一種高效快速繁殖牡丹的方法。本發(fā)明第一方面，提供了一種高效快速繁殖牡丹的方法，包括步驟：(1)制備插穗：選取牡丹的一年生枝條，修剪成長(zhǎng)度為5-15cm的插穗，將所述插穗的下端用55℃～65℃水浸泡30min～90min；(2)制備生根基質(zhì)：取以下組分：以重量份數(shù)計(jì)，枯草芽孢桿菌菌劑5～15、尿素3～5、四硼酸鈉0.2～0.4、磷酸二氫鉀0.5～1、硫酸錳0.03～0.05、鉬酸銨0.1～0.2、多效唑0.3～0.5、萘乙酸(NAA)0.02～0.04、吲哚丁酸(IBA)0.01～0.03，加入等重的水中，混合均勻得生根營(yíng)養(yǎng)液；然后將生根營(yíng)養(yǎng)液和棉籽粉以重量比為1:1～2比例混合，充分?jǐn)嚢?，使棉籽粉完全吸收生根營(yíng)養(yǎng)液，制得所述生根基質(zhì)；(3)扦插：將步驟(1)經(jīng)浸泡處理的插穗，扦插于所述生根基質(zhì)中；和(4)培養(yǎng)：在環(huán)境溫度不低于20℃的條件下，培養(yǎng)20-30天后，獲得扦插成活的牡丹植株。優(yōu)選地，所述步驟(1)中，插穗的下端用58℃～60℃水浸泡40min～60min。優(yōu)選地，所述步驟(2)中，以重量份數(shù)計(jì)，枯草芽孢桿菌菌劑10、尿素4、四硼酸鈉0.3、磷酸二氫鉀0.8、硫酸錳0.04、鉬酸銨0.15、多效唑0.4、萘乙酸(NAA)0.03、吲哚丁酸(IBA)0.02，加入等重的水中，混合均勻得生根營(yíng)養(yǎng)液。優(yōu)選地，所述步驟(2)中，將生根營(yíng)養(yǎng)液和棉籽粉以重量比為1:1比例混合。優(yōu)選地，所述步驟(4)中，維持環(huán)境溫度為25-28℃，維持相對(duì)濕度為80-99％。優(yōu)選地，所述插穗的直徑為0.4-1.0cm，較佳地為0.5-0.8cm。優(yōu)選地，所述插穗的的長(zhǎng)度為7-10cm。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)是重量百分比和重量份數(shù)。以下實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)材料和試劑如無(wú)特別說(shuō)明均可從市售渠道獲得。本發(fā)明采用的菌種如下：枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CGMCCNo.7926，購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。按照說(shuō)明書(shū)上的常規(guī)方式培養(yǎng)。種子培養(yǎng)基配方為：20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、0.5g牛肉膏、1L水；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：玉米粉12g、葡萄糖5g、豆餅粉20g、CaCO38g、(NH4)2SO41g、K2HPO40.3g、MgSO4·7H2O0.2g、1L水。所述菌株特性是產(chǎn)耐高溫α-淀粉酶的酶活力高，耐熱、耐酸性強(qiáng)。所述菌株特點(diǎn)如下：所述菌株在固體平板上菌落顏色為乳白色，表面干燥不透明，邊緣整齊，為具有運(yùn)動(dòng)性的好氧菌。鏡檢為長(zhǎng)桿狀，革蘭氏染色呈陽(yáng)性。該菌可利用檸檬酸鹽，硝酸還原、V-P實(shí)驗(yàn)成陽(yáng)性。實(shí)施例1制備枯草芽孢桿菌菌劑：將枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CGMCCNo.7926的保藏菌種劃線轉(zhuǎn)接到活化斜面37℃恒溫靜置培養(yǎng)48h。接1環(huán)生長(zhǎng)良好的活化斜面種子至種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基為：20g葡萄糖、15g蛋白胨、5g氯化鈉、0.5g牛肉膏、1L水。于37℃、120r/min條件下培養(yǎng)24h。將活化后的種子接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為5％，液體發(fā)酵培養(yǎng)基為：玉米粉12g、葡萄糖5g、豆餅粉20g、CaCO38g、(NH4)2SO41g、K2HPO40.3g、MgSO4·7H2O0.2g、1L水。發(fā)酵枯草芽孢桿菌48h后，發(fā)酵液經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾后進(jìn)行干燥處理，干燥后的培養(yǎng)物即為枯草芽孢桿菌菌劑。牡丹(品種：洛陽(yáng)紅)繁殖：(1)制備插穗：選取牡丹的一年生枝條，修剪成長(zhǎng)度為10cm的插穗，插穗的直徑為0.8cm，將所述插穗的下端用60℃水浸泡60min；(2)制備生根基質(zhì)：取以下組分：枯草芽孢桿菌菌劑100kg、尿素40kg、四硼酸鈉3kg、磷酸二氫鉀8kg、硫酸錳0.4kg、鉬酸銨1.5kg、多效唑4kg、萘乙酸(NAA)0.3kg、吲哚丁酸(IBA)0.2kg混合，加入等重(157.4kg)的水中，混合均勻得生根營(yíng)養(yǎng)液；然后將生根營(yíng)養(yǎng)液和棉籽粉以重量比為1:1比例混合，充分?jǐn)嚢?，使棉籽粉完全吸收生根營(yíng)養(yǎng)液，制得所述生根基質(zhì)；(3)扦插：將步驟(1)經(jīng)浸泡處理的插穗，扦插于所述生根基質(zhì)中；和(4)培養(yǎng)：在環(huán)境溫度不低于20℃、相對(duì)濕度為80-99％的條件下，培養(yǎng)25天后，獲得扦插成活的牡丹植株。優(yōu)選地，所述步驟(4)中，維持環(huán)境溫度為25-28℃，維持相對(duì)濕度為80-99％。對(duì)比例1同實(shí)施例1，不同之處在于，步驟(1)的插穗不用熱水浸泡。對(duì)比例2同實(shí)施例1，不同之處在于，不使用生根基質(zhì)扦插，使用大田土壤扦插。牡丹扦插繁殖結(jié)果如表1所示。表1組別插穗生根率平均不定根條數(shù)平均根長(zhǎng)實(shí)施例192％38.66.2cm對(duì)比例163％14.83.8cm對(duì)比例246％26.45.7cm實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用本發(fā)明的方法進(jìn)行牡丹繁殖，插穗成活率極高，可以快速高效地繁殖牡丹。在插穗處理上，采用熱水浸泡的方式，不僅可以消毒消除病菌污染，有效的減少爛根現(xiàn)象的發(fā)生，還能促進(jìn)生根(生根率較使用殺菌劑浸泡時(shí)提高了約20％)，配合本發(fā)明的生根基質(zhì)，插穗生根率可以達(dá)到90％以上，顯著提高了插穗成活率。使用棉籽粉制備的生根基質(zhì)，不僅能夠極好的保持營(yíng)養(yǎng)，起到緩釋的作用，同時(shí)棉籽粉中的含有的棉籽酚能夠顯著提高扦插植株對(duì)病菌和害蟲(chóng)的抵抗能力，提高扦插成功率。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3