專利名稱：干擾素干粉配方的方法及組合物的制作方法
本申請(qǐng)為1994年5月18日提出的、未決的美國(guó)專利申請(qǐng)08/246,034號(hào)的部分繼續(xù)。
本發(fā)明一般地涉及細(xì)胞因子，特別是干擾素干粉配方的方法和組合物。更具體講，本發(fā)明涉及干擾素(IFNS)的噴霧干燥以生產(chǎn)高效干粉配方的方法。
干擾素是可用于治療人類癌癥—免疫系統(tǒng)增強(qiáng)等多種疾病的細(xì)胞因子。干擾素通常被配成非腸道給藥的等滲溶液。近來，臨床醫(yī)師們尋找可供病人長(zhǎng)期使用的干擾素的另一些給藥途徑。特別是，WO91/16038中描述的已制備出肺部給藥的干擾素的氣霧劑配方。通過一種液體拋射劑的揮發(fā)使該配方分散。該專利告訴人們，通過加入表面活化劑或類似物來提高人類干擾素從氟里昂給藥系統(tǒng)中釋放的分散性。
WO91/16038中公開了將固體多肽微粒制成藥用氣霧劑的方法和組合物，其中通過將IFN水溶液凍干然后噴射粉碎再凍干制成β-INF的干粉形式。美國(guó)專利4,503,035號(hào)中公開了分子量超過12,000，包括人類IFN在內(nèi)的蛋白質(zhì)的純化方法。WO89/05158號(hào)中公開了重組β-IFN低pH值的藥物組合物。
由于干擾素是相當(dāng)貴的化合物，有必要將其制成能在干粉吸入器中高效使用、在肺部給藥能重現(xiàn)劑量，改進(jìn)流動(dòng)特性的高效價(jià)制劑。
本發(fā)明的目的是提供一種病人長(zhǎng)期肺部給藥的、含有干擾素的組合物。本發(fā)明的另一目的是提供一種無(wú)氟氯烷烴類或二氧化碳這樣的液體拋射劑即可吸入給藥的含有干擾素的粉狀組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種含有干擾素的粉狀組合物，該組合物易于用能夠保持干擾素高百分比活性的方法來制造。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種比以往干擾素顯示出較高穩(wěn)定性的含有干擾素的組合物。
本發(fā)明的其他目的是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過審閱下列說明書和權(quán)利要求書就可明了的。
本發(fā)明一方面是一種肺部給藥的、以干擾素為主的干粉組合物，該組合物含有治療有效量的干擾素和藥物可接受載體。
本發(fā)明的另一方面是干擾素肺部給藥的單位劑量形式，該單位劑量形式包括一個(gè)含有本發(fā)明以干擾素為主的干粉組合物的單位容器。
本發(fā)明的第三方面是一種治療對(duì)干擾素敏感的疾病的方法，該方法包括在病人的肺部給予生理有效量的以干擾素為主的干粉組合物。
本發(fā)明的另一方面是一種將以干擾素為主的干粉組合物氣霧化的方法，該方法包括將一定量的干粉組合物分散到氣流中形成氣霧，然后將氣霧捕獲到有吹口的藥室，隨后可供病人吸入。
本發(fā)明還有一方面是制備以干擾素為主的干粉組合物的方法，該方法包括在一定條件下將干擾素與載體的濕混合物進(jìn)行噴霧干燥，以制成可吸入的干粉。
本發(fā)明至少是部分基于用本發(fā)明的噴霧干燥法制成的具有高效價(jià)和改進(jìn)流動(dòng)性的以干擾素為主的干粉組合物。更高的效價(jià)是指所得的以干擾素為主的干粉組合物中有比用其他方法制備的組合物更高百分比的生理活性的干擾素。本發(fā)明的組合物通過干粉吸入器給藥時(shí)其可快速氣霧化并通過宿主的肺快速吸收。
在用于解釋本發(fā)明的各方面的權(quán)利要求書中，應(yīng)考慮幾個(gè)重要定義。
術(shù)語(yǔ)“干擾素”是指包括天然存在的或重組技術(shù)制備的、分子量約為15,000-27,000道爾頓的、具有類似干擾素活性的小分子蛋白質(zhì)和糖蛋白(有時(shí)叫作細(xì)胞因子)。一般地，這種活性是通過在細(xì)胞表面與特定的細(xì)胞膜受體結(jié)合而產(chǎn)生的。一旦結(jié)合，不同的干擾素會(huì)引發(fā)許多系列的細(xì)胞內(nèi)作用。干擾素可用于治療人類癌癥——免疫系統(tǒng)抑制等多種疾病，天然干擾素是在對(duì)病毒感染、合成或生物誘導(dǎo)體的應(yīng)答過程中，由細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的。有些干擾素是天然干擾素的變體，可用DNA重組技術(shù)制備。干擾素有時(shí)被縮寫成“IFN”，在本申請(qǐng)中也縮寫成“IFN”。干擾素的例子包括如重組α-2A-IFN(RofernA Roche Laboratories)，重組α-2B-IFN(IntronA Schering)，從人類白細(xì)胞得到的α-N3-IFN(AlferonN-Pur-due Frederick)，γ-1B-IFN(Actimmune-Genentech)，重組β-IFN(Betaseron-Chiron，Berlex)，天然存在的β-INF(Feron-Toray，Japan)等等。1985年3月5日公布的Pestka和Rubinstein的美國(guó)專利4,503,035中給出了人類白細(xì)胞干擾素的例子。用于本發(fā)明的目的，β-IFN是優(yōu)選的，特別是天然存在的β-IFN。
術(shù)語(yǔ)“粉”是指一種由能自由流動(dòng)并易在吸入器中分散，隨后可供病人吸入以使微粒到達(dá)肺部并滲透到肺泡囊中的粉細(xì)分散的微粒組成的組合物，因而該粉被說成是能被吸入的。優(yōu)選的是比較均勻的球狀分布的、直徑平均在10微米(μm)以下的微粒。更好的是直徑在7.5μm以下的微粒。最好的是直徑在5.0μm以下。通常微粒大小分布約為0.1μm-5μm，特別是約為2μm-5μm。
術(shù)語(yǔ)“干”是指組合物中的水分能使微粒在吸入器中易于分散以形成氣霧。一般地，按重量計(jì)(％W)，這些水分約為10％以下，通常為5％W以下，3％以下更好。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指存在于組合物中的、病人用后能出現(xiàn)生理反應(yīng)所需的干擾素的量。每種干擾素的用量要依具體情況而定。以下將給出用量指南。
術(shù)語(yǔ)“生理有效量”是指給病人服用的、能產(chǎn)生預(yù)期的緩解作用或療效的量。該量對(duì)每種干擾素都是特定的，為最終被批準(zhǔn)的劑量水平，以下將給出指南。
術(shù)語(yǔ)“藥物可接受的載體”是指能被用于肺部并無(wú)嚴(yán)重不良毒理作用的載體。
本發(fā)明一方面是一種肺部給藥的以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物，該組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素。
一般地，本發(fā)明的組合物比本領(lǐng)域已知的其他干擾素組合物的效價(jià)要高，分散性也高。IFN在干燥狀態(tài)下為無(wú)定形粉末。適用于本發(fā)明組合物的IFN包括各種廣泛定義的αIFN，βIFN和γIFN。優(yōu)選的是αIFN和βIFN，特別是βIFN。該組合物對(duì)天然存在的βIFN特別有用，如日本Toray Industries Co.的βIFN。
組合物中IFN的治療有效量取決于所用的IFN的生物活性和單位劑量形式中所需的量。由于IFN的高活性，應(yīng)以某種單位制劑的形式制造，以使配制者和消費(fèi)者便于操作。這意味著干粉組合物中單位劑量物質(zhì)的總重約為0.5mg-15mg，優(yōu)選的是約為2mg-10mg，一般地，組合物中IFN的量為0.05％W-5.0％W。最好是約為0.2％-2.0％W。
藥物可接受載體的量是為確保在病人肺部均勻給藥，組合物應(yīng)具必需的穩(wěn)定性、分散性、相容性和松散的特點(diǎn)所需的載體量。其用量取決于所用的IFN的活性，約為95.0％W-99.95％W，優(yōu)選的是98％W-99.8％W。
載體可以是一種賦形劑或兩種或兩種以上藥物賦形劑的結(jié)合體，但一般實(shí)際上不是任何“滲透促進(jìn)劑”。滲透促進(jìn)劑是能夠增加藥物通過粘膜或肺泡滲透的表面活性物質(zhì)，這些物質(zhì)是鼻內(nèi)、直腸內(nèi)和陰道內(nèi)藥物配方中推薦使用的。典型的滲透促進(jìn)劑包括膽汁鹽，如?；悄懰猁}，甘膽酸鹽和去氧膽酸鹽；褐霉酸鹽，如牛去氧褐霉酸鹽；以及生物適合劑，如吐溫，聚乙二醇單十二醚十二酸酯等?？墒怯捎诒砻婊钚晕镔|(zhì)會(huì)對(duì)肺部上皮血屏障產(chǎn)生不良作用，肺部用的配方中一般不必使用滲透促進(jìn)劑。
本發(fā)明中用作載體的藥物賦形劑的類型包括穩(wěn)定劑，如人血清白蛋白(HSA)，填充劑，如碳水化合物，氨基酸和多肽；pH調(diào)節(jié)劑或緩沖劑；鹽，如氯化鈉等。這些載體可以是結(jié)晶或無(wú)定形粉末或這兩種的混合物。
已發(fā)現(xiàn)HSA是特別有用的載體，因它可使IFN在溶液中非常穩(wěn)定。
特別有用的填充劑包括互容的碳水化合物，多肽，氨基酸或它們的結(jié)合體。適宜的碳水化合物包括單糖，如半乳糖D-甘露糖，山梨糖等；二糖，如乳糖，海藻糖等；環(huán)糊精，如2-羥丙基-β-環(huán)糊精；以及多糖，如棉子糖，糊精-麥芽糖復(fù)合劑，葡聚糖等；糖醇，如甘露醇，木糖醇等。優(yōu)選的碳水化合物包括乳糖，海藻糖，棉子糖，糊精-麥芽糖復(fù)合劑和甘露醇。適宜的多肽包括天門冬酰苯丙氨酸甲酯。氨基酸包括丙氨酸和甘氨酸，優(yōu)選的是甘氨酸。
本發(fā)明的組合物中占有較少成分的添加劑可能包括噴霧干燥過程中的穩(wěn)定性助劑和粒子分散性助劑。這些添加劑包括疏水氨基酸，如包氨酸，酪氨酸，亮氨酸，苯丙氨酸等。
適宜的pH調(diào)節(jié)劑或緩沖劑包括用有機(jī)酸和有機(jī)堿制成的有機(jī)鹽，如枸櫞酸鈉，抗壞血酸鈉等，優(yōu)選的是枸櫞酸鈉。
以下將描述本發(fā)明的單位劑量形式，治療方法和制備方法。單位劑量形式本發(fā)明的另一方面是干擾素肺部給藥的單位劑量形式，這種劑量形式包含一個(gè)裝有以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物的單位劑量容器，該組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素。
關(guān)于本發(fā)明的這一方面，是將本發(fā)明的組合物(如前所述)放入一個(gè)適宜的劑量容器中，該劑量能為病人單位劑量的治療提供足夠的IFN。劑量容器裝在適宜的吸入器中，以使以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物能夠氣霧化，分散成氣流形成氣霧，隨后將生成的氣霧捕獲到有吹口的藥室，隨后可供病人吸入。這一劑量容器包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的裝有組合物的任意容器，如明膠或塑料膠囊，容器具移動(dòng)部分，能允許氣流(如空氣)直接進(jìn)入容器使干粉組合物分散。這些容器的例子可參見1980年10月14日公布的美國(guó)專利4,227,522號(hào)；1980年3月11日公布的4,192,309號(hào)；和1978年8月8日公布的4,105,027，適宜的容器也包括與Glaxo′s Ventolin Rotohaler和Fi-son′s Spinhaler一起用的粉末吸入器。另一種能較好地防潮的單位劑量容器是用鋁箔塑料薄片制成的。β-IFN粉末按重量或體積壓縮填充到可成形的箔中并用箔-塑料薄片密封。美國(guó)專利4,778,054號(hào)中公開了這種與粉末吸入器一起使用的容器，并被Glaxo′sDiskhaler使用(美國(guó)專利4,627,432；4,811,731；5,035,237)。這些文獻(xiàn)均為本文的參考文獻(xiàn)。治療疾病的方法本發(fā)明的另一方面是對(duì)干擾素敏感的疾病的治療方法，該方法包括在病人肺部給予生理有效量的以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物，該干擾素含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素。
可用本發(fā)明的組合物治療的疾病包括那些對(duì)IFN的治療敏感的疾病。例如，αIFN可用于治療乙肝和丙肝，毛細(xì)胞白血病，慢性非甲、非乙/非丙型肝炎和卡波濟(jì)氏肉瘤；βFIN可用于治療多發(fā)性硬化，腦瘤，皮膚癌和乙肝，丙肝；γIFN可用于治療慢性肉芽腫病。
治療特定病人或疾病所需的生理有效量取決于個(gè)體差異，身體條件，治療周期，治療規(guī)律，IFN的類型和其他因素，但可由醫(yī)療領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定。每人每天的劑量范圍可從0.25×106IU-50×106IU，按醫(yī)生的處方量服用，例如，用重組αIFN(ReferonA-Roche Laboratonies)治療毛細(xì)胞白血病的初始劑量可以為每天3×106IU，用16-24周，每周3次的維持劑量為3×106IU。其他劑量范圍可根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)并參考Physicians Desk Reference1994年增補(bǔ)版來確定。
相信病人對(duì)本發(fā)明的干粉干擾素的有效吸收是由于其在肺泡超薄(＜0.1fm)液層的迅速溶解所致。因而本發(fā)明的微粒平均大小以肺液層大10-50倍，使這些微粒出乎意料地被溶解，無(wú)論在局部肺還是全身治療都能使干擾素迅速的被全身吸收。詳細(xì)作用機(jī)制在此不再敘述。
本發(fā)明的氣霧化的以干擾素為基礎(chǔ)的干粉可特別用于代替非腸道給藥的干擾素。因此，本發(fā)明的方法和組合物對(duì)慢性病人自行給藥的治療方案特別有用。正如剛剛敘述的，病人通過吸入適量的干擾素得到所需的劑量。通過剛才所述的方法。干擾素全身吸收的效率范圍約為15％-50％，就個(gè)人劑量而言(每次吸入量)每次吸入藥量范圍約為3百萬(wàn)-5百萬(wàn)IU。因此病人要吸1-5次才能達(dá)到所需劑量。粉末氣霧化的方法本發(fā)明還有一方面是將以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物的氣霧化的方法，該組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素，這一方法包含將一定量的干粉組合物分散到氣流中形成氣霧并將氣霧捕獲到有吹口的藥室，隨后可供病人吸入。
在未決的美國(guó)專利申請(qǐng)07/910,048和08/207,472號(hào)中對(duì)此方法作了進(jìn)一步的詳述，這兩篇申請(qǐng)均為本申請(qǐng)的參考文獻(xiàn)。
制備組合物本發(fā)明還有一方面是制備本發(fā)明的以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物的方法，該方法包括在可提供吸入干粉組合物條件下噴霧干燥干擾素與藥物可接受載體的濕混合物，該混合物具有使干擾素穩(wěn)定的pH。
噴霧干燥是一種將IFN與載體的濕混合物通過噴嘴(如兩種液體的噴嘴)、旋轉(zhuǎn)盤或相同裝置送入熱氣流中，使溶液霧化形成精細(xì)飛沫的方法。濕混合物可能是溶液、懸浮液或類似物，必須是均勻的，以確保各組分在混合物中或在最終的粉狀組合物中均勻分布。優(yōu)選的濕混合物是溶液，溶劑一般為水，從飛沫中迅速蒸發(fā)，生成直徑1-5μm的微粒組成的細(xì)干粉。出人意外的是。蛋白質(zhì)暴露于干燥的熱氣中時(shí)不被降解，可制成具有足夠純度、可藥用的干擾素粉末。定義的可接受的純度為降解物和污染物的含量在5％以下，優(yōu)選的是3％以下，最好為1％以下。
噴霧干燥是在能夠生成具有微粒的均勻組成的無(wú)定形粉末的條件下進(jìn)行，該粉末為可吸入的、低水分的、具流動(dòng)特性且可氣霧化。優(yōu)選的最終粉末微粒的大小是約有98％以上的物質(zhì)直徑約為10μm或10μm以下的微粒。微粒中約90％的物質(zhì)的直徑在5μm以下?；蛘呒s95％的物質(zhì)(更好的是95％以上)為直徑10μm以下的微粒，微粒中約80％的物質(zhì)(更好的是80％以上)的直徑在5μm以下。
按照本發(fā)明的方法，高效價(jià)、高流動(dòng)性的干擾素干粉是用噴霧干燥的方法制備的，優(yōu)選的干擾素原料是β-干擾素，但也適用于其他干擾素。在該方法中，干擾素被制成按重量計(jì)濃度為0.0005％-0.02％，通常為0.001％-0.005％的溶液。該溶液可含有一種能保持干擾素在溶液中的化學(xué)穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑，如HSA，其濃度按重量計(jì)為0.01％-1.0％。優(yōu)選的是0.05％-0.25％，并可還含有其他化學(xué)物質(zhì)，如存在于IFN原料中的鹽或防腐劑。然后將溶液用常規(guī)的、從Buchi，Niro，Yamato Chemical Co.，Okawara Kakoki Co等公司買到的噴霧干燥設(shè)備進(jìn)行噴霧干燥，生成實(shí)際上為無(wú)定形的微?；漠a(chǎn)物。
噴霧方法可用旋轉(zhuǎn)噴霧，加壓噴霧，二流體噴霧，這些方法中所用設(shè)備的例子包括Yamato Chemicel Co.制的GA-32型泡騰小型噴霧器，DL-41型泡騰噴霧干燥器，或Okawara Kakoki Co.制造的CL-8型噴霧干燥器，L-8型噴霧干燥器，F(xiàn)L-12型噴霧干燥器，F(xiàn)L-16型噴霧干燥器，或FL-120型噴霧干燥器，這些干燥器能用轉(zhuǎn)盤霧化器進(jìn)行噴霧。
在噴霧方法中對(duì)霧化器的噴嘴沒有特殊的限制，建議使用能夠產(chǎn)生微粒直徑適于鼻腔、咽部或肺部給藥的晶粒的噴霧干燥組合物的噴嘴。例如，由同一公司Yameto Chemical Co.制造的“1A”，“1”，“2A”，“2”，“3”型等可用于上述噴霧干燥器的噴嘴。另外，由同一公司Okawara Kakoki Co.制造的“MC-50”，“MC-65”或“MC-85”型可用于噴霧干燥器的轉(zhuǎn)盤。
對(duì)用于干燥噴霧物質(zhì)的氣體沒有特殊的限制，建議用空氣、氮?dú)饣蛞环N惰性氣體。用于干燥噴霧物質(zhì)的氣體，其入口溫度為不會(huì)使噴霧干燥物質(zhì)熱滅活的溫度。溫度范圍約為50℃-200℃，優(yōu)選的是約為50℃-100℃。用于干燥噴霧物質(zhì)的氣體，出口溫度約為0℃-150℃，優(yōu)選的為0℃-90℃最好為0℃-60℃。鑒于IFN在55℃開始滅活，約70℃時(shí)幾乎全部滅活，出口和入口處溫度均為55℃以上是出人意外的。
通過將溶液中的穩(wěn)定劑減到最少量來制備高效價(jià)的IFN粉末，以減少高劑量給藥的吸入次數(shù)，通常只需1次吸入。
用于本發(fā)明的干擾素干粉實(shí)際為無(wú)定形的，基本上沒有晶體結(jié)構(gòu)。在噴霧干燥條件下制備的干粉干擾素，實(shí)際為微粒大小在上述范圍的無(wú)定形粉末。按照本發(fā)明的方法，優(yōu)選的是β-IFN，但也適用于其他干擾素，先將干擾素原料溶于pH約為2-9的生理可接受的水溶液，典型的水溶液中含有氯化鈉，也可含一種緩沖劑。干擾素溶液制成重量百分比濃度為0.01％-1％，通常為0.1％-0.2％的溶液。然后用可買到的載體如Buchi，Niro Yamato Okawara Kakori等常規(guī)噴霧干燥器將溶液噴霧干燥，得到實(shí)際為無(wú)定形的微粒產(chǎn)物。
本發(fā)明的干擾素可與適于吸入給藥或肺部給藥的藥物載體或賦形劑結(jié)合。當(dāng)需要降低給病人服用的粉末中的干擾素的濃度時(shí)，這些載體可用作填充劑，也可用于提高干擾素組合物的穩(wěn)定性，增加粉末在分散器中的分散性，以使干擾素更為有效并可重現(xiàn)給藥，改善干擾素的操作性能，如流動(dòng)性和相容性，從而加快制造和粉末填充的過程。
這些載體可在噴霧干燥前與干擾素結(jié)合，即將載體加到原料溶液中。這樣，載體微粒與IFN微粒一起形成，生成均勻粉末。另一種是將載體分別制成干粉形式并與干粉干擾素混合載體粉末通常如結(jié)晶體(以避免吸收水分)，但某些情況下也可是無(wú)定形粉末，或結(jié)晶與無(wú)定形粉末的混合物。載體微粒大小是可以選擇的，用以增加IFN粉末的流動(dòng)性能，典型的載體微粒大小為25μm-100μm，優(yōu)選的載體物質(zhì)是大小為上述范圍的結(jié)晶乳糖。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例I本實(shí)施例闡述一種制備本發(fā)明組合物的方法制備約50ml10mM的、含有約2mg/mlHSA的天然人類β-IFN的氯化鈉溶液。
所得濕混合物在下列條件下裝到Buchi Laboratory噴霧干燥器中，得到本發(fā)明的組合物。
濕混合物的溫度4℃-10℃入口溫度 115℃-125℃進(jìn)料速度 6ml/min出口溫度 60℃-70℃一旦濕混合物耗完，由于入口溫度緩慢下降，出口溫度將在70℃左右維持15分鐘，這使水分已在3％以下的以IFN為基礎(chǔ)的干粉組合物得以二次干燥，水分用電量Karl Fischer法制定。本實(shí)施例的組合物組成如下(％W按固體總量計(jì)算)1.9％W β-IFN98.1％W載體(75.8％HSA，22.3％Nacl)實(shí)施例II用實(shí)施例I的方法，但在二次干燥階段將出口溫度增至75℃-80℃，得到水分在1％以下的本發(fā)明的組合物。
實(shí)施例III本實(shí)施例闡述一種制備本發(fā)明的組合物的方法，該組合物中的載體含有填充劑-甘露醇。
按實(shí)施例I所述，將甘露醇溶于天然人類βIFN中。甘露醇的濃度為5.75mg/ml。
在下列條件下，將所得的濕混合物裝入Buchi Laboratory噴霧干燥器中濕混合物的溫度 4℃-10℃入口溫度 115℃-125℃進(jìn)料速度 5ml/min出口溫度 60℃-70℃二次干燥—15分鐘于 70℃雖然已用說明書和實(shí)施例對(duì)前述發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，但為了理解的更清楚顯然可在后面權(quán)利要求范圍內(nèi)，對(duì)說明書和實(shí)施例予以修改。
實(shí)施例IV本實(shí)施例闡述一種制備本發(fā)明的組合物的方法，其中無(wú)膨脹劑存在于組合物中。
制備約100ml、10mM的含有2mg/ml人血清白蛋白(HSA)(用人類正常二倍體成纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)得到)(約7×104IU/ml)的天然人類干擾素的氯化鈉溶液。用買到的Yamrto Chemicel Co.制造的“GA-32型泡騰小型噴霧器”進(jìn)行噴霧干燥。所用噴嘴為1A噴嘴(0.4mm)，干燥氣體入口和出口溫度分別為100℃和60℃。另外，噴霧壓力為1kg/cm2，熱空氣流量為0.40-0.42m3/min，溶液的傳輸速率為4.3ml/min，噴霧干燥約20分鐘后，用旋風(fēng)器將干粉收集到藥室，回收干粉，測(cè)定IFN的活性。用含有抗人類β干擾素的抗體進(jìn)行酶免疫分析法測(cè)定干擾素的活性(S.Yamazaki et al.，Im-munoassay，10，57(1989))將干粉用蒸餾水溶解，測(cè)定干粉的活性，先吸收在280nm，與噴霧干燥前的干擾素活性進(jìn)行比較。所得結(jié)果列于表1。重復(fù)測(cè)定3次，用平均值進(jìn)行比較。表中相對(duì)活性的誤差為標(biāo)準(zhǔn)誤差(±SE)。
表1天然人類β干擾素在噴霧干燥前后的活性相對(duì)活性(IU/A280單位)剩余活性(％)噴霧干燥前4.11±0.11 100％噴霧干燥后3.14±0.04 74.8％噴霧干燥后，天然人類β干擾素的活性為噴霧干燥前的74.8％，表明在噴霧干燥過程中是能保持活性的。這一結(jié)果是出人意外的，因?yàn)榱硪环N含有相似量HSA的類似天然人類β干擾素的溶液在約55℃時(shí)開始滅活，70℃時(shí)全部滅活。將本發(fā)明的方法得到的干粉涂鉑，用場(chǎng)致發(fā)射掃描電子顯微鏡(Hitachi Co.生產(chǎn)，型號(hào)S-8000)查看晶粒形狀。觀察到約90％的晶粒相對(duì)光滑，晶粒表面有大的凹痕和突起，晶粒直徑約為10μm。另外，用Karl fischer法(MitsubishiKasei Co.生產(chǎn)，CA-06型電量滴定水分儀)測(cè)定所得干粉水分為5.6wt％。
實(shí)施例V本實(shí)施例闡述一種制備IFN/HSA/甘露醇組合物的方法。
制備約100ml、10mM的含有150mg/ml甘露醇和約2mg/ml人血清白蛋白(HSA)的天然人類干擾素的氯化鈉溶液。在該溶液組成中，甘露醇約占總?cè)苜|(zhì)量的90wt％。
用與實(shí)施例IV相同的方法和條件將上述溶液噴霧干燥，用與實(shí)施例IV相同的方法測(cè)定所得干粉的干擾素活性。所得結(jié)果列于表2中。
表2天然人類β干擾素噴霧干燥前后的活性相對(duì)活性(IU/A280單位) 剩余活性(％)噴霧干燥前 5.59±0.51 100％噴霧干燥后 4.53±0.13 81.0％噴霧干燥后，天然人類β干擾素的活性與噴霧干燥前比為81.0％，正如實(shí)施例IV中所述，這一結(jié)果是出人意外的，因?yàn)轭愃频暮邢嗤康奶烊蝗祟惁赂蓴_素、HSA和甘露醇的溶液在約55℃時(shí)開始滅活，70℃時(shí)幾乎全部滅活。
用實(shí)施例IV和V制得的從IFN為基礎(chǔ)的粉末是分散的，實(shí)施例V制得的粉末比實(shí)施例IV更分散。
粉末涂鉑，并用場(chǎng)致發(fā)射掃描電子顯微鏡(Hitachi公司制造，型號(hào)S-8000)查看晶粒形狀時(shí)，發(fā)現(xiàn)晶粒大小與實(shí)施例IV中相似，但其形狀比實(shí)施例IV中的更圓。另外，將粉末分散到無(wú)水乙醇中，用顆粒分析器(Nikkiso Co.制造，Microtrac FRA)查看晶粒直徑分布時(shí)，發(fā)現(xiàn)約有90％的晶粒分布在1.6-9.3μm范圍。用實(shí)施例IV中的Karl Fischer法測(cè)定水分為0.74％wt。
本發(fā)明中提到的所有出版物和專利申請(qǐng)文獻(xiàn)在同等程度上，即使每一公開物和專利申請(qǐng)?zhí)刂缸鳛楸旧暾?qǐng)的對(duì)比文獻(xiàn)。
由于已對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了完全的描述，顯然，本領(lǐng)域的任何普通技術(shù)人員都能按后面權(quán)利要求書的范圍或精神對(duì)其進(jìn)行改變和修改。
權(quán)利要求
1.一種用于肺部給藥的噴霧干燥的以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物，所述組合物含有與藥物可接受的載體結(jié)合的治療有效量的干擾素。
2.權(quán)利要求1的組合物，該組合物實(shí)際不含滲透促進(jìn)劑。
3.權(quán)利要求2的組合物，其中的載體含有人血清白蛋白。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中的載體可進(jìn)一步含有一種碳水化合物填充劑。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中的載體為甘露醇。
6.權(quán)利要求4的組合物，其中的載體為棉子糖。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中的干粉組合物中約95％的物質(zhì)為大小在10μm以下的微粒。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中的干粉組合物中約80％的物質(zhì)為大小在5μm以下的微粒。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中的干擾素為天然存在的。
10.權(quán)利要求1的組合物，其中的干擾素為β干擾素。
11.一種肺部給藥的干擾素的單位劑量形式，該劑量形式含有一個(gè)裝有噴霧—干燥的、以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物的單位劑量容器，該組合物含有與藥物可接受的載體結(jié)合的治療有效量的干擾素。
12.權(quán)利要求11的單位劑量形式，其中的載體含有人血清白蛋白或人血清白蛋白和碳水化合物填充劑，該組合物實(shí)際不含滲透促進(jìn)劑，并且干粉組合物中約95％的物質(zhì)為大小約在10μm以下的微粒。
13.一種治療對(duì)干擾素的治療敏感的疾病的方法，該方法包含在病人肺部給予一個(gè)生理有效量的、噴霧干燥的、以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物，該組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素。
14.權(quán)利要求13的方法，其中的載體含有HSA和一種碳水化合物填充劑，該組合物實(shí)際不含滲透促進(jìn)劑，并且干粉組合物中約95％的物質(zhì)為大小約在10μm以下的微粒。
15.一種將噴霧—干燥的、以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物氣霧化的方法，該組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素，該方法包含將一定量的干粉組合物分散到氣流中以形成氣霧，并且將氣霧捕獲到隨后適于病人吸入的藥室。
16.權(quán)利要求15的方法，其中的載體含有HSA和一種碳水化合物填充劑，該組合物實(shí)際不含滲透促進(jìn)劑，并且干粉組合物中約95％的物質(zhì)為大小約在10μm以下的微粒。
17.一種將噴霧—干燥的、以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物的方法，該組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的干擾素，該方法包含將干擾素與載體的濕混合物在一定條件下噴霧—干燥，以得到可吸入的干粉。
18.權(quán)利要求17的方法，其中的組合物實(shí)際不含滲透促進(jìn)劑。
19.權(quán)利要求18的方法，其中的載體含有HSA。
20.權(quán)利要求19的方法，其中的載體可進(jìn)一步含有一種碳水化合物填充劑。
21.權(quán)利要求20的方法，其中的填充劑為甘露醇。
22.權(quán)利要求20的方法，其中的填充劑為棉子糖。
23.權(quán)利要求17的方法，其中的噴霧—干燥組合物中有95％的物質(zhì)為大小約在10μm以下的微粒。
24.一種噴霧干燥的、肺部給藥的以干擾素為基礎(chǔ)的干粉組合物，所述組合物含有與藥物可接受載體結(jié)合的治療有效量的天然存在的干擾素，該藥物可接受載體含有人血清白蛋白或人血清白蛋白和碳水化合物填充劑，組合物中實(shí)際不含滲透促進(jìn)劑。并且干粉組合物中約有95％的物質(zhì)為大小在10μm以下的微粒。
25.權(quán)利要求24的組合物，其中的填充劑為甘露醇。
26.權(quán)利要求24的組合物，其中的填充劑為棉子糖。
全文摘要
本發(fā)明提供了經(jīng)噴霧-干燥以干擾素為主特別是β-干擾素干粉配方的方法和組合物。該組合物可用于對(duì)干擾素治療敏感的人類疾病的治療，尤其是，本發(fā)明的方法基于噴霧干燥，可生產(chǎn)穩(wěn)定高效的干擾素的干粉配方，這些干擾素包括但不限于β-干擾素。出人意外的是，人們發(fā)現(xiàn)可用噴霧干燥法制備干擾素的高效干粉配方。這些干粉配方可特別用于干擾素的肺部給藥。
文檔編號(hào)A01N25/02GK1151168SQ95193669
公開日1997年6月4日 申請(qǐng)日期1995年5月15日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月18日
發(fā)明者R·M·埔拉茲, N·凱穆拉, O·薩彤, L·C·佛斯特爾 申請(qǐng)人:吸入治療系統(tǒng)公司