一種藍雪花組織培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說，涉及一種藍雪花組織培養(yǎng)技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]MMIHPlumbago aaricWa)又名藍花丹、藍花磯松、藍茉莉、藍雪丹，為白花丹科白花丹屬多年生常綠灌木。原產(chǎn)南非，目前在世界熱帶、亞熱帶均有栽培，是一種觀賞價值與藥用價值俱佳的新型花卉。藍雪花管理粗放，病蟲害少，耐高溫、高濕，長勢健壯，觀賞期長。其葉色翠綠，花色淡雅，炎炎夏日給人清涼之感，可盆栽點綴居室、陽臺。成年植株冠幅較大，耐修剪，適合與其他觀賞植物進行組合造景，用于城市建筑物、道路、立交橋綠化，也可以種植于林緣、草坪。藍雪花全株富含白花丹素，對風濕關(guān)節(jié)疼痛、血瘀經(jīng)閉、跌打損傷、腫毒惡瘡以及疥癬具有較好的治療作用。
[0003]藍雪花是一種集觀賞價值與藥用價值于一體的新型花卉，具有優(yōu)良的市場應用潛力。但是受限于材料的缺乏，目前人們對藍雪花的了解和應用還非常有限。目前藍雪花主要通過播種、扦插等繁殖方式進行種苗繁育，存在繁殖系數(shù)低、周期長、成本高等缺點。植物的組織培養(yǎng)技術(shù)是自20世紀以來科技進步的主要成果之一。組織培養(yǎng)技術(shù)既不會受到地理位置的限制、也不會受到季節(jié)的限制，它僅需要足夠的實驗材料，繁殖就可以進行，且遺傳背景一致、生長周期短、成本低。目前關(guān)于藍雪花植物組織培養(yǎng)方面的研究還沒有任何報道，而本發(fā)明通過單芽誘導與增殖、再生幼苗誘導生根等關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，大大提高藍雪花增殖率，對實現(xiàn)藍雪花組織培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種藍雪花組織培養(yǎng)技術(shù)，本發(fā)明以藍雪花細嫩枝條為外植體，經(jīng)過外植體處理、單芽誘導、叢生芽增殖、生根、煉苗及移栽等過程建立了藍雪花離體再生體系，大大提高藍雪花增殖率，從而實現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種藍雪花組織培養(yǎng)技術(shù)，包括以下的步驟:
(O外植體消毒:剪取長勢良好無病蟲害的幼嫩枝條，用洗衣粉溶液浸泡處理40?90min后流水沖洗I?3h,于超凈工作臺中用75%乙醇消毒30?60s后用無菌水洗3?5次，再用0.1%升汞溶液消毒10?25min，用無菌水沖洗4?6次后用無菌濾紙吸去水分備用。
[0006](2)單芽誘導:將步驟(I)處理后的外植體切成1.0cm長左右的莖段，其中以莖節(jié)為界，上半部分保留0.3cm,下半部分保留0.7cm,每個莖段保留一個莖節(jié)。將莖段接種到誘導培養(yǎng)基中進行單芽誘導，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)5?10天，然后置于每天光照12?16小時，光照強度為1500?30001x條件下培養(yǎng)直至形成單芽。
[0007](3)叢生芽培養(yǎng)及增殖:將步驟(2)培養(yǎng)得到的單芽長至2?3cm高時，切下單芽并轉(zhuǎn)入?yún)采颗囵B(yǎng)基上進行叢生芽培養(yǎng)及增殖，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照12?16小時，光照強度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至形成叢生芽。
[0008](4)生根培養(yǎng):將步驟(3)的叢生芽長至3?4cm高時，切割成單芽并接種到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照14?16小時，光照強度為3000?50001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0009](5)煉苗移栽:將高約6?7cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶蓋半開煉苗3?5天，再全開瓶蓋加入適量的自來水并置于自然光照下煉苗5?7天后將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和黃沙泥混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
[0010]上述步驟(2)所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+1.0?4.0mg/L6-BA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的叢生芽培養(yǎng)基為:MS+1.0?3.0mg/L6-BA+0.1?1.0mg/LNAA+0.5 ?1.0mg/LIAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]上述步驟(4)所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.5?1.5mg/LNAA +15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點是:藍雪花aaricWa)結(jié)實率低，種子價格較為昂貴，擴繁系數(shù)低、造成目前傳統(tǒng)繁殖方式己無法滿足藍雪花的應用需求，而本發(fā)明可以克服傳統(tǒng)繁殖方法的不足之處，在相對短的時間內(nèi)可大量生產(chǎn)藍雪花優(yōu)良品種。本發(fā)明以藍雪花細嫩枝條為外植體，經(jīng)過外植體處理、單芽誘導、叢生芽增殖、生根、煉苗及移栽等過程建立了藍雪花離體再生體系，大大提高藍雪花增殖率，對實現(xiàn)藍雪花組織培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。
【具體實施方式】
[0014]以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，不是對本發(fā)明的限制。
[0015]實施例1:
(I)外植體消毒:剪取長勢良好無病蟲害的幼嫩枝條，用洗衣粉溶液浸泡處理50min后流水沖洗lh，于超凈工作臺中用75%乙醇消毒30s后用無菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用無菌水沖洗4次后用無菌濾紙吸去水分備用。
[0016](2)單芽誘導:將步驟(I)處理后的外植體切成1.0cm長左右的莖段，其中以莖節(jié)為界，上半部分保留0.3cm,下半部分保留0.7cm,每個莖段保留一個莖節(jié)。將莖段接種到誘導培養(yǎng)基中進行單芽誘導，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)5天，然后置于每天光照12小時，光照強度為15001x條件下培養(yǎng)26天即可形成單芽，誘導率為81.9%。所述的誘導培養(yǎng)基為:MS+2.0mg/L6-BA+25g/L 蔗糖 +3.9g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0017](3)叢生芽培養(yǎng)及增殖:將步驟(2)培養(yǎng)得到的單芽長至2?3cm高時，切下單芽并轉(zhuǎn)入?yún)采颗囵B(yǎng)基上進行叢生芽培養(yǎng)及增殖，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)2天，然后置于每天光照12小時，光照強度為20001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)30天即可形成叢生芽，增殖系數(shù)為4.8。所述的叢生芽培養(yǎng)基為:MS+1.5mg/L6-BA+0.lmg/LNAA+0.5mg/LIAA+18g/L 蔗糖 +3.5g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
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