白芷活性成分在抗葡萄生擬莖點(diǎn)菌和昏暗擬莖點(diǎn)霉中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物活性成分，具體地說，涉及白芷活性成分在抗葡萄生擬莖點(diǎn)菌和 昏暗擬莖點(diǎn)霉中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著植物害蟲和病原體的耐化學(xué)性不斷加劇導(dǎo)致農(nóng)藥用量不斷加大，迫使我們不 得不去尋找新的農(nóng)用殺菌劑和殺蟲劑。美國環(huán)保署和歐洲食品安全局已經(jīng)認(rèn)定吡咯類殺菌 劑是存在問題的，因為它對內(nèi)分泌系統(tǒng)有影響，還會有肝臟毒性和其他嚴(yán)重的問題。因此， 尋找環(huán)境友好對哺乳動物更安全低毒的農(nóng)藥成為現(xiàn)今農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要研宄內(nèi)容。從天然植 物中有發(fā)現(xiàn)和研發(fā)新型抗菌劑和生物殺蟲劑化合物的巨大潛能，天然植物已成為當(dāng)今新藥 研發(fā)的重要來源。
[0003] 白芷來源于傘形科多年生草本植物白芷或杭白芷的根，多年生，其性溫，氣芳香， 味辛、微苦，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，白芷入藥始見于《本經(jīng)》。具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫 排膿的作用，被臨床廣泛應(yīng)用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶和瘡瘍腫痛等 癥，并有較好的療效，白芷為常用中藥，在多個成方中出現(xiàn)，同時也是一種很好的香料和調(diào) 味輔料，在日常在生活中廣泛使用。
[0004] 目前，有多個含有白芷的專利配方用于人體真菌感染所致的手足癬，體癬等，如白 芷，蛇床子，木香，花椒配伍治療腳癬，皮膚真菌病以及婦科炎癥；由白芷，土荊皮，山椒，珍 珠透骨草，明礬，防風(fēng)，硫磺，蒺藜粉末，水楊酸，薄荷腦，冰片組成的外用搽劑可用來治療腳 癬，手癬，體癬，股癬。近年也有人發(fā)表白芷在農(nóng)業(yè)方面的應(yīng)用專利，采用白芷，茯苓，知母等 中藥與稻瘟凈共同煎煮所得提取物能有效控制稻瘟病的發(fā)生，具有制作簡單易行，成本低 無殘留的特點(diǎn)。
[0005] 葡萄生擬莖點(diǎn)菌（Phomopsis viticola)和昏暗擬莖點(diǎn)霉（Phomopsisobscurans) 引起多種作物的病害，寄主廣泛，包括蔬菜、觀賞植物、果實作物、藥用植物和雜草?，F(xiàn)階段 對葡萄生擬莖點(diǎn)菌和昏暗擬莖點(diǎn)霉的抑制絕大多數(shù)為化學(xué)殺蟲劑，長期廣泛大量使用化學(xué) 殺蟲劑，易污染大氣、水域、土壤，對人畜健康造成威脅，甚至中毒。而從天然植物中提取抑 菌劑又存在提取工藝復(fù)雜、天然植物品種和資源較少而不具備廣泛應(yīng)用性。
[0006] 因此，亟需開發(fā)一種無毒無污染、低成本、易獲得的具有抗葡萄生擬莖點(diǎn)菌和昏暗 擬莖點(diǎn)霉活性的物質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的是提供白芷活性成分在抗葡萄生 擬莖點(diǎn)菌和昏暗擬莖點(diǎn)霉中的應(yīng)用。
[0008] 為了實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明首先提供白芷活性成分在抗真菌中的應(yīng)用，所述白 芷活性成分為花椒素、香柑內(nèi)酯、別歐前胡素或花椒毒酚；所述真菌為葡萄生擬莖點(diǎn)菌或昏 暗擬莖點(diǎn)霉。
[0009] 本發(fā)明還提供了含有白芷活性成分的抗葡萄生擬莖點(diǎn)菌藥劑，所述白芷活性成分 為花椒素、香柑內(nèi)酯、別歐前胡素或花椒毒酚中的一種或兩種以上。
[0010] 作為優(yōu)選，其特征在于，所述白芷活性成分為香柑內(nèi)酯和/或花椒毒酚，進(jìn)一步優(yōu) 選為香柑內(nèi)酯。
[0011] 進(jìn)一步地，所述香柑內(nèi)酯在藥劑中的濃度為〇. 1-0. 3 μ M。
[0012] 作為優(yōu)選，所述香柑內(nèi)酯在藥劑中的濃度為0. 3 μ Μ。
[0013] 本發(fā)明還提供了含有白芷活性成分的抗昏暗擬莖點(diǎn)霉藥劑，所述白芷活性成分為 花椒素、香柑內(nèi)酯、別歐前胡素或花椒毒酚中的一種或兩種以上。
[0014] 作為優(yōu)選，其特征在于，所述白芷活性成分為香柑內(nèi)酯和/或花椒素，進(jìn)一步優(yōu)選 為香柑內(nèi)酯。
[0015] 進(jìn)一步地，所述香柑內(nèi)酯在藥劑中的濃度為0. 1-0. 3 μ Μ。
[0016] 作為優(yōu)選，所述香柑內(nèi)酯在藥劑中的濃度為0. 3 μ Μ。
[0017] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了香柑內(nèi)酯在抗真菌中的應(yīng)用，所述真菌為葡萄生擬莖點(diǎn)菌 或昏暗擬莖點(diǎn)霉。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了白芷活性成分單體化合物在抗葡萄生擬莖點(diǎn)菌和昏暗擬莖點(diǎn) 霉方面的作用，并通過實驗證明了其抑菌效果，為葡萄生擬莖點(diǎn)菌和昏暗擬莖點(diǎn)霉的防治 提供了新的途徑和思路。
[0020] 白芷是一味普通的中藥材，中華民族應(yīng)用幾千年以來安全有效，分布廣泛，且因其 本身對氣候、土壤等具有較好的適應(yīng)性而容易栽培。所以從原料上來說可以大量獲得，而本 發(fā)明的方法提取工藝簡單，活性測定實驗證明其提取物中的成分具有很好的抗葡萄生擬莖 點(diǎn)菌和昏暗擬莖點(diǎn)霉活性。本發(fā)明可以提供幾種從植物中提取抗葡萄生擬莖點(diǎn)菌和昏暗擬 莖點(diǎn)霉的化合物，為殺蟲劑的研制提供一種簡單易得、無毒無污染的原料。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明實施例1中白芷單體化合物分離的技術(shù)路線圖。
[0022] 圖2為本發(fā)明實施例1中四種白芷單體化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
[0023] 圖3為本發(fā)明實施例1中化合物花椒素（I) 1H-NMR譜圖。
[0024] 圖4為本發(fā)明實施例1中化合物花椒素⑴13C-NMR譜圖。
[0025] 圖5為本發(fā)明實施例1中化合物香柑內(nèi)酯（2) 1H-NMR譜圖。
[0026] 圖6為本發(fā)明實施例1中化合物香柑內(nèi)酯⑵13C-NMR譜圖。
[0027] 圖7為本發(fā)明實施例1中化合物別歐前胡素（3) 1H-NMR譜圖。
[0028] 圖8為本發(fā)明實施例1中化合物別歐前胡素（3) 13C-NMR譜圖。
[0029] 圖9為本發(fā)明實施例1中化合物花椒毒酚（4) 1H-NMR譜圖。
[0030] 圖10為本發(fā)明實施例1中化合物花椒毒酚（4) 13C-NMR譜圖。
[0031] 圖11為本發(fā)明實施例2中微量測定法測定白芷單體化合物對葡萄生擬莖點(diǎn)菌 Ρ. viticola的生長抑制率；其中：1.花椒素；2.香柑內(nèi)酯；3.別歐前胡素；4.花椒毒酚； 5. Azoxystrobin (喃菌醋）（陽性對照藥）；6· Captan (克菌丹）（陽性對照藥）。
[0032] 圖12為本發(fā)明實施例2中微量測定法測定白芷單體化合物對昏暗擬莖點(diǎn)霉 P. obscurans的生長抑制率；其中：1.花椒素；2.香柑內(nèi)酯；3.別歐前胡素；4.花椒毒酚； 5. Azoxystrobin (喃菌醋）（陽性對照藥）；6· Captan (克菌丹）（陽性對照藥）。
【具體實施方式】
[0033] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0034] 實施例1白芷活性成分的分離鑒定
[0035] I. 1實驗材料、試劑與儀器
[0036] I. I. 1 藥材
[0037] 白芷采購于湖南省中醫(yī)藥研宄院附屬醫(yī)院，產(chǎn)地為四川，GMP認(rèn)證企業(yè)，湖南省松 齡堂中藥飲片有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為120401。白芷飲片3kg，留樣100g，保存于中藥民 族藥物創(chuàng)新發(fā)展實驗室（No. 201204628-1)。藥材經(jīng)鑒定為白]E Angelica dahurica的根。
[0038] I. L 2 試劑
[0039] 硅膠G、GF254、硅膠H(青島海洋化工有限公司）；
[0040] 95%乙醇為化學(xué)純；蒸餾水：自制；石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲 醇、乙腈（分析純，天津恒興試劑廠）；甲醇、乙腈（色譜純，Tedia)
[0041] I. L 3 儀器
[0042] 電熱恒溫水浴鍋（北京市意成科技開發(fā)公司）；DHG-9241型電熱恒溫干燥箱（上 海精宏實驗設(shè)備有限公司）；電子萬用爐（天津市泰斯特儀器有限公司）；HCTP11-1架盤 藥物天平（上海精科天平）；ZF-2型三用紫外儀（上海市安亭電子儀器廠）；DFY-200萬 能粉粹機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）；電子天平：上海光正醫(yī)療儀器有限公司（原上 海醫(yī)用激光儀器），型號：YP 10;電熱套：北京科偉永興儀器有限公司，型號3000、 北京科偉永興儀器有限公司，型號5000 ;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：Rotavapor R-3(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 R-3)，BUCHI Labortechnik AG(瑞士步琦有限公司），型號：R-3HB ;真空泵：SHZ-D(III) 循環(huán)水式真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，型號=SHZ-D(III);烘箱：101型電熱 鼓風(fēng)干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，型號：1〇1系列。1H-13C-NMR核磁共振 (600MHz Varian, Palo Alto, CA, USA). Biotage(Inc. HorizonTM(Charlottesville, Virgi nia, USA)，Biotage 硅膠柱型號（a SNAP cartridge, XP-Sil, 100g, 40-63 μm, 6〇A, 40x 150mm，Biotage，LLC，10430Har;ris Oaks